Simplexa Group A Strep Direct - Focus Diagnostics
←
→
Transkription von Seiteninhalten
Wenn Ihr Browser die Seite nicht korrekt rendert, bitte, lesen Sie den Inhalt der Seite unten
Simplexa™ Group A Strep Direct
REF MOL2850
Rev. C
(Deutsch)
Ein Echtzeit-PCR-Assay zum qualitativen In-vitro-
Nachweis von bakterieller DNA von A-Streptokokken.
In-vitro-Diagnostikum
CLIA-Komplexität - Mäßig
Verschreibungspflichtig
ANWENDUNGSBEREICH
Der Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay von Focus Diagnostics ist für die Anwendung auf dem Integrated Cycler von 3M
bestimmt. Er dient dem qualitativen In-vitro-Nachweis von A-Streptokokken (Streptokokken der Lancefield-Gruppe A, GAS) in
Rachenabstrichen menschlicher Patienten mit Anzeichen und Symptomen einer Pharyngitis, z. B. Halsschmerzen. Dieser Test ist
als Hilfsmittel bei der Diagnose einer GAS-Infektion bestimmt. Der Assay darf in Krankenhäusern, Referenzlaboren oder
staatlichen Laboren eingesetzt werden. Der Assay darf nicht in der Point-of-Care-Diagnostik eingesetzt werden.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERLÄUTERUNG
Streptococcus pyogenes, auch als A-Streptococcus bezeichnet, ist ein betahämolytisches Bakterium, das der Lancefield-
Serogruppe A zugeordnet wird.1 A-Streptococcus ist die Hauptursache für bakterielle akute Rachenentzündung (Pharyngitis) und
ist für 15 bis 30 Prozent der akuten Pharyngitis-Fälle bei Kindern und für 5 bis 20 Prozent der Fälle bei Erwachsenen
verantwortlich.2,3 Akute Pharyngitis kann auch durch Viren hervorgerufen werden, zum Beispiel durch Adenovirus, Influenzavirus,
4
Parainfluenzavirus, Rhinovirus und das Respiratory-Syncytial-Virus. Die Symptome einer bakteriellen und viralen akuten
Pharyngitis sind weitgehend gleich und häufig schwer differenzierbar. Die Identifizierung einer Infektion mit A-Streptokokken
ermöglicht die effektive Behandlung mit Antibiotika. Undiagnostiziert und unbehandelt können A-Streptokokken zahlreiche
gravierende Komplikationen hervorrufen, beispielsweise akutes rheumatisches Fieber, Scharlach, Glomerulonephritis und das
Streptokokken-induzierte toxische Schocksyndrom.5,6,7
Der Goldstandard für die Diagnose einer Streptokokken-Pharyngitis ist eine Rachenabstrichkultur, die eine Empfindlichkeit von
8
90-95 % aufweist. Allerdings dauert es 1-2 Tage, bis ein schlüssiges Ergebnis vorliegt. Mit Rachenabstrichen durchgeführte
Antigen-Schnelltests (Rapid Antigen Detection Tests, RADT) zum Nachweis des Vorhandenseins von A-Streptokokken-
Kohlenhydrat auf der Zelloberfläche liefern bereits innerhalb von 10 bis 20 Minuten ein Testergebnis. RADT-Immunassays aus
den vergangenen 10 Jahren wurden ausführlich charakterisiert und zeigten eine gute Spezifität (95,0-98,7 %), jedoch eine
niedrige Empfindlichkeit (90,6-97,6 %) im Vergleich zu Kulturen. Deshalb ist, abhängig von der Leistung dieser Immunassays, die
Bestätigung von negativen Ergebnissen in Rachenabstrichkulturen in unterschiedlichem Maße erforderlich. Echtzeit-PCR-Assays
haben sich zum Nachweis von A-Streptokokken in Rachenabstrichen bewährt.9,10 Einige dieser Assays bieten eine mit einer
Abstrichkultur vergleichbare Empfindlichkeit und Spezifität; allerdings ist vom Endverbraucher ein DNA-Extraktionsschritt
auszuführen. Der Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay ist dafür ausgelegt, einen wesentlich schnelleren Nachweis von A-
Streptokokken zu ermöglichen. Bei dem Simplexa™ Group A Strep Direct handelt es sich um einen Echtzeit-PCR-Assay, der die
DNA des universellen pyrogenen Exotoxins B von A-Streptokokken direkt aus einem Rachenabstrich ohne herkömmliche DNA-
Extraktion amplifiziert. Der Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay ist einfach in der Durchführung und dauert nur etwa eine
Stunde.
Simplexa™ Group A Strep Direct ermöglicht einen genauen Nachweis von A-Streptokokken, ohne dass eine kulturelle
Bestätigung erforderlich ist.
GRUNDLAGEN DES VERFAHRENS
Das Simplexa™ Group A Strep Direct-Assaysystem ist ein Echtzeit-PCR-System zum direkten und qualitativen Nachweis von
bakterieller DNA von A-Streptokokken aus Rachenabstrichen, die keiner Nukleinsäureextraktion unterzogen wurden. Das System
besteht aus dem Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay, dem Integrated Cycler von 3M (mit der Integrated Cycler Studio
Software), der Direktamplifikationsplatte (DAD) und dazu benötigtem Zubehör.Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 2
Im Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay werden bifunktionelle fluoreszierende Primersonden zusammen mit entsprechenden
Rückwärts-Primern verwendet, um bakterielle DNA von A-Streptokokken sowie einer internen Kontrolle (DNA IC) zu amplifizieren.
Der Assay ist spezifisch für eine konservierte Region von A-Streptokokken (das Gen für pyrogenes Exotoxin-B), um diese
Bakterien in der Probe zu identifizieren. Zur Überprüfung einer Fehlfunktion und/oder Hemmung der PCR wird eine interne DNA-
Kontrolle (DNA IC) mitgeführt.
MITGELIEFERTES MATERIAL
Der Diagnostics Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay von Focus Diagnostics enthält ausreichend Reagenzien für 24
Bestimmungen. Nach Erhalt bei -10 °C bis -30 ºC aufbewahren (keine Gefriergeräte mit Abtauautomatik verwenden). Jedes
Röhrchen enthält genügend Material für eine Anwendung. Innerhalb von 30 Minuten nach dem Auftauen bzw. der Entnahme aus
dem Gefrierschrank verwenden.
Beschreibung des Kits
Bezeichnung der Reaktionen
EG-SYMBOL Anzahl Volumen pro
Komponente REF Kurzbezeichnung Deckelfarbe pro
AUF ETIKETT Fläschchen Fläschchen
Fläschchen/Kit
Simplexa™ Group A
Strep Direct Reaction MOL2851 REAG A RM Braun 24 1/24 50 µl
Mix
Beschreibung der Komponente
Kit-Komponente Inhalt
DNA-Polymerase, Puffer und dNTPs, DNA-Matrize (interne Kontrolle) farbstoffmarkierte, fluoreszierende
Primersonden für den spezifischen Nachweis von A-Streptokokken und für die interne Kontrolle
Sonden
Target Fluorophor Exzitation Emission Zielgen
(Farbstoff)
Simplexa™ Group A
Strep Direct Reaction Mix Pyrogenes
(RM) (Reaktionsgemisch) A-Streptokokken FAM 495 520
Exotoxin B
Interne Kontrolle
Q670 644 670 n. z.
DNA (IC)
Simplexa™ Group A
Strep Direct Barcode Test-spezifische Parameter und Chargeninformationen.
Card (Barcode-Karte)
SEPARAT GELIEFERTES MATERIAL
1. Kit mit Direktamplifikationsplatte (Direct Amplification Disc) (REF MOL1455)
a) Direktamplifikationsplatten zur Verwendung auf dem Integrated Cycler
ERFORDERLICHES, JEDOCH NICHT MITGELIEFERTES MATERIAL
1. 3M Integrated Cycler mit Integrated Cycler Studio-Software, Version 6.0 oder höher
2. Simplexa™ Group A Strep Positive Control Pack (REF MOL2860)
3. Pipette mit fest eingestelltem Volumen von 50 µl (ergonomischer Hochleistungspipettor Signature™ mit Fixvolumen von
VWR, Modell VWR FE50, oder gleichwertige Pipette)
4. Sterile, nukleasefreie Einwegpipettenspitzen mit Filter (zum Pipettieren aus den primären Abstrichröhrchen werden
extralange Spitzen ≥ 91 mm empfohlen).
5. Gefrierschrank, -10 °C bis -30 °C (mit manueller Abtaufunktion), für die Lagerung der gefrorenen Kit-Komponenten und
Proben
6. Kühlschrank mit 2 °C bis 8 °C (für Proben)
7. Einweg-Schutzhandschuhe (ungepudert)
EMPFOHLENES MATERIAL
1. Amies-Flüssigmediumpuffer als Leerwertkontrolle (NTC, No Template Control)
2. Replacement Foil Wedges (REF MOL1550)Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 3
HANDHABUNG UND HALTBARKEIT VON REAGENZIEN
1. Reagenzien bei -10 bis -30 aufbewahren (keine Gefriergeräte mit Abtauautomatik verwenden).
2. Reagenzien vor Gebrauch bei Raumtemperatur auftauen lassen (Temperaturbereich ca. 18 °C bis 25 °C).
3. Kits und Reagenzien nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwenden.
4. Nach der Entnahme des Reaktionsgemischs aus der Gefrierlagerung den Test innerhalb von 30 Minuten starten.
5. Das Reaktionsgemisch nicht vortexen.
6. Das Reaktionsgemisch nicht wieder einfrieren.
WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN
1. Beim Umgang mit den Kit-Reagenzien persönliche Schutzausrüstung wie (jedoch nicht beschränkt auf) Handschuhe und
Laborkittel tragen. Hände nach der Durchführung des Tests gründlich waschen.
2. In Bereichen, in denen Kit-Reagenzien und/oder Humanproben gehandhabt werden, darf nicht geraucht, getrunken und
gegessen werden.
3. In diesen Bereichen sollten auch keine Kontaktlinsen eingesetzt/herausgenommen und kein Make-up aufgetragen werden.
4. Die Kontamination des Reaktionsgemisches bzw. der Patientenproben kann zu einer Verfälschung der Testergebnisse
führen. Unter aseptischen Bedingungen arbeiten.
5. Nur das in diesem Beipackzettel beschriebene Protokoll verwenden. Bei Nichteinhaltung des Protokolls oder der
angegebenen Zeiten sowie Temperaturen kann es zu fehlerhaften Testergebnissen kommen.
6. Der Testansatz sollte bei Raumtemperatur (Temperaturbereich ca. 18 °C bis 25 °C) erfolgen.
7. Zum Überführen von Proben und Reaktionsgemisch kalibrierte Fixvolumenpipetten oder gleichwertige Artikel verwenden.
8. Die Unterseite der Folie, die in Kontakt mit den Kavitäten und der Plattenoberfläche kommt, möglichst nicht berühren.
9. Um potenzielle Fehlergebnisse zu verhindern, ist darauf zu achten, die Proben und Reagenzien in die jeweils korrekten
Kavitäten zu pipettieren.
10. Das Beladen und das Anbringen der Abdeckklebefolie auf einem Keil abschließen, bevor die Folie des nächsten Keils
geöffnet wird.
11. Den Lauf innerhalb von 30 Minuten nach der Entnahme des Fläschchens mit dem Reaktionsgemisch aus der Gefrierlagerung
starten.
12. Nicht versuchen, einen Keil, der in vorherigen Analysen verwendet wurde, erneut zu verwenden oder die Abdeckklebefolie
von einem bereits verwendeten Keil zu entfernen.
13. Die Discs können mehrfach verwendet werden, bis alle 8 Keile benutzt worden sind. Gebrauchte Discs ohne Abnehmen der
Abdeckklebefolie entsorgen. Gebrauchte Discs ohne Abnehmen der Abdeckklebefolie als biologisch gefährlichen Abfall
entsorgen.
14. Das Reaktionsgemisch enthält >1 % Glycerin, das beim Einatmen oder Hautkontakt zu Reizungen führen kann. Nach
Einatmen oder Berührung sollten Erste-Hilfe-Maßnahmen eingeleitet werden.
15. Das Kit bei offensichtlich angebrochener oder beschädigter Verpackung bzw. angebrochenem oder beschädigtem Inhalt nicht
verwenden und Focus Diagnostics kontaktieren. Kontaktadressen befinden sich auf der letzten Seite dieses Dokuments.
16. Die Spektralmatrix muss auf jedem 3M Integrated Cycler installiert werden und darf nur dann geändert werden, wenn von
Focus Diagnostics ein aktualisierter QR-Code für das Instrument bereitgestellt wird. Die Spektralmatrix ist für jeden 3 M
Integrated Cycler spezifisch. Die Spektralmatrix für jedes 3M Integrated Cycler-Gerät befindet sich auf der vorderen
Umschlagseite des 3M Integrated Cycler-Hardware-Handbuchs. Kann das Matrixetikett nicht gescannt oder gefunden
werden, kontaktieren Sie bitte Focus Diagnostics. Kontaktadressen befinden sich auf der letzten Seite dieses Dokuments.
17. Das Nichtinstallieren bzw. die Änderung der Spektralmatrix kann zu falschen Ergebnissen führen.
GEBRAUCHSANWEISUNG
A. PROBENGEWINNUNG
Akzeptable Probentypen sind Rachenabstriche in Amies-Medium: Copan Katalognummer 480C und 481C oder
gleichwertiges Produkt. Den mit dem Transportmedium mitgelieferten Abstrichtupfer verwenden. Keine Kalziumalginattupfer
verwenden, da diese Stoffe enthalten können, die den PCR-Test hemmen. Rachenabstriche sollten innerhalb von 72
Stunden nach der Gewinnung verwendet werden.
B. EINSTELLUNG DES GERÄTS FÜR DIE REAL-TIME-PCR
1. Einzelheiten darüber, wie die Integrated Cycler Studio Software zu konfigurieren ist, um eine Assaydefinition
hinzuzufügen, einen Lauf einzustellen und die Läufe auf dem Integrated Cycler zu analysieren, sind der
Bedienungsanleitung des 3M Integrated Cycler zu entnehmen.
C. LADEN DER DIREKTAMPLIFIKATIONSPLATTE UND AMPLIFIZIERUNG MITTELS ECHTZEIT-PCR
HINWEIS: Vor der PCR-Amplifikation ist keine Probenextraktion erforderlich.
1. Wählen Sie die Proben, die getestet werden müssen.
2. Röhrchen mit Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur (ca. 18 °C bis 25 °C) auftauen. Für jede zu testende Probe
ein Röhrchen mit Reaktionsgemisch verwenden.
3. Den Barcode auf dem Fläschchen mit Reaktionsgemisch des Simplexa™ Group A Strep Direct oder auf der
Barcode-Karte einscannen.
4. Den Platten-Barcode auf der Direktamplifikationsplatte (DAD) einscannen.Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 4
5. Jede Probenkennung einscannen oder eingeben.
6. Die Abdeckklebefolie jeweils nur von einem Keil abziehen, um die Probenkavitäten (SAMPLE) und
Reaktionskavitäten (R) zu öffnen, dabei jedoch die Abdeckklebefolie nicht vollständig entfernen (Abbildung 1 und 2).
Die Unterseite der Folie, die in Kontakt mit den Kavitäten und der Plattenoberfläche kommt, möglichst nicht
berühren.
7. Stellen Sie sicher, dass das Reaktionsgemisch vollständig aufgetaut ist. Die Röhrchen falls notwendig kurz
zentrifugieren. (Das Reaktionsgemisch nicht vortexen.)
8. Mit der Festvolumenpipette 50 µl des Reaktionsgemischs in die Reaktionskavität (R) überführen.
9. Mit der Festvolumenpipette 50 µl einer Probe bzw. Kontrolle in die Probenkavität (SAMPLE) überführen.
10. Den Keil, der die Kavitäten abschließt, mit der abgezogenen Klebefolie abdecken und diese an den Rändern der
Platte fest andrücken. Wenn die ursprüngliche Folie eingerissen ist, muss sie durch eine Ersatzkeilfolie ersetzt
werden.
11. Den Laschenteil der Abdeckung vorsichtig an der Perforierung abtrennen.
12. Für die nächste(n) Probe(n) Schritt 6 bis 11 wiederholen.
13. Die versiegelte Direktamplifikationsplatte (DAD) in den 3M Integrated Cycler einsetzen und den Lauf starten.
Abbildung 1 – Platte mit abgezogener Folie Abbildung 2 – Probenkavität [Sample] und
von der Proben- und der Reaktionskavität in Keil 3 Reaktionskavität [R]
HINWEISE (nur zur Information - keine Maßnahmen/Umsetzung erforderlich):
1. Kits von Focus Diagnostics können Versionsnummern für Assaydefinitionen enthalten. Falls eine Versionsnummer
vorhanden ist, wird sie an die Assay Definition angehängt, z. B. als ‘Probe IVD Assay.2’. Wenn mehrere Versionen
vorhanden sind, verwendet die Software automatisch die mit der eingescannten Chargennummer verknüpfte
Assaydefinition.
QUALITÄTSKONTROLLE
Als externe Kontrolle für die Qualitätskontrolle, zur Einarbeitung oder für Leistungstests kann das Simplexa™ Group A Strep
Positive Control Pack (MOL2860) verwendet werden. Jedes Labor sollte, ausgehend von den vor Ort geltenden Gesetzen,
Bestimmungen und der üblichen guten Laborpraxis eigene Qualitätskontrollbereiche wie auch die Häufigkeit der
Qualitätskontrollen ermitteln. Anweisungen zur Testung der Positivkontrolle sind der Packungsbeilage des Simplexa™ Group A
Strep Positive Control Pack (PI.MOL2860) zu entnehmen.
Erwartete Kontrollergebnisse
Interne Kontrolle
Art der Kontrolle A-Streptokokken
(DNA IC)
Simplexa™ Group A
Strep Direct Positive Detektiert1 Nicht zutreffend2
Control1
Leerwertkontrolle (NTC) Nicht detektiert Gültig
1
Typische Ct-Werte für die Positivkontrolle liegen in einem Bereich von 25 bis ≤45.
2.
Die Detektion der Simplexa™ internen DNA-Kontrolle (DNA IC) ist für ein gültiges Ergebnis nicht erforderlich.
ERGEBNISSE
Nach Beendigung des Laufs werden die Ergebnisse von der Software automatisch ausgewertet und angezeigt.
1. Für jede eingegebene Zugangs-ID (Proben-ID) zeigt die Software ein Ergebnis („Detected“ [Detektiert], „Not Detected“
[Nicht detektiert] oder „Invalid“ (Ungültig) für A-Streptokokken an.
a. „Detected“ deutet darauf hin, dass DNA von A-Streptokokken in der Patientenprobe vorhanden ist.Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 5
b. „Not Detected“ deutet darauf hin, dass keine DNA von A-Streptokokken in der Patientenprobe vorhanden ist.
c. Als „Invalid“ ausgewiesene Ergebnisse deuten darauf hin, dass kein schlüssiger Nachweis des
Vorhandenseins bzw. Nichtvorhandenseins von DNA von A-Streptokokken in der Patientenprobe möglich ist.
Dieses Ergebnis kann folgende Ursachen haben: 1) Fehler der internen Kontrolle (DNA IC) oder 2)
unzureichende Probenmenge. Die Probe muss erneut getestet werden. Siehe Abschnitt „Ungültige Ergebnisse“
weiter unten.
d. „EC500“ deutet daraufhin, dass ein Datenqualitätsfehler bei dem Bakterienanalyten aufgetreten ist. Die
Software konnte für den Analyten keine gültige Amplifikation erkennen.
e. „EC505“ deutet daraufhin, dass ein Datenqualitätsfehler bei dem Bakterienanalyten aufgetreten ist. Die
Software konnte für den Analyten keine gültige Amplifikation erkennen. Wenden Sie sich an die Technische
Assistenz von Focus Diagnostics. Kontaktinformationen befinden sich auf der letzten Seite dieses Dokuments.
2. Den Bericht gegebenenfalls ausdrucken.
a. Die Ergebnisse ggf. exportieren.
UNGÜLTIGE ERGEBNISSE
Bei einem als „Invalid“ angegebenen Ergebnis oder einem Fehlercode muss die Probe mit einem neuen Röhrchen mit
Reaktionsgemisch desselben Kits oder aus einem neuen Kit erneut getestet werden. Falls der Fehler weiterhin besteht, wenden
Sie sich an die Technische Assistenz von Focus Diagnostics. Kontaktadressen befinden sich auf der letzten Seite dieses
Dokuments.
EINSCHRÄNKUNGEN
1. In-vitro-Diagnostikum. In den Vereinigten Staaten ist dieses Produkt für die Anwendung in Gesundheitseinrichtungen mit
einer CLIA-Zertifizierung von mindestens einer mäßigen Komplexität vorgesehen.
2. Alle Ergebnisse aus diesen und anderen Tests müssen zusammen mit der klinischen Anamnese, den epidemiologischen
Daten und allen anderen Daten, die dem zuständigen Arzt vorliegen, gesehen werden.
3. Weitere Folgetests per Kultur sind erforderlich, falls das Ergebnis negativ ist und klinische Symptome weiter bestehen bzw.
im Falle eines Ausbruchs von akuten rheumatischen Fieber.
4. Die Prävalenz der Bakterieninfektion kann den prognostischen Wert des Assays beeinflussen.
5. Wie bei anderen Tests auch, schließt ein negatives Ergebnis eine Infektion mit A-Streptokokken nicht aus.
6. Falls die Bakterien Genmutationen, Insertionen, Deletionen oder Rearrangements aufweisen oder wenn die Testung im
Frühstadium der Erkrankung erfolgt, kann es zu falsch negativen Ergebnissen kommen.
7. Falsch negative Ergebnisse können auftreten, wenn in der Probe aufgrund von Fehlern bei Entnahme, Transport oder
Verarbeitung eine unzureichende Anzahl von Bakterien vorhanden ist. Falsch negative Ergebnisse können auch auftreten,
wenn die Konzentration der vorhandenen Bakterien unter der analytischen Nachweisgrenze des Assays liegt.
8. Wie bei anderen Testverfahren kann es auch hier zu falsch positiven Ergebnissen kommen. Eine Wiederholung des Tests
oder die Durchführung des Tests mit einem anderen Gerät könnte in manchen Fällen indiziert sein.
9. Dieser Assay kann keine Infektionen ausschließen, die durch andere bakterielle oder virale Erreger verursacht wird.
10. Die Informationen auf dem Kit-Barcode können nur mit einem Barcode-Scanner in die Integrated Cycler Studio-Software
übertragen werden. Bei einer Funktionsstörung des Scanners oder wenn die Informationen aus einem anderen Grund nicht
übertragbar sind, wenden Sie sich unter den auf der Rückseite dieses Dokuments angegebenen Kontaktnummern an Focus
Diagnostics.
11. Die Leistungsfähigkeit dieses Assays wurde nicht bei Anwendung in Spenderscreeningtests ermittelt.Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 6
SPEZIFISCHE LEISTUNGSDATEN
KLINISCHE PROSPEKTIVE STUDIE
Eintausenddreihundertsiebenundneunzug (1397) Proben, die an vier (4) geografisch verteilt liegenden Zentren zwischen dem 6.
Mai 2014 und dem 28. Oktober 2014 von Patienten mit Anzeichen und Symptomen einer Infektion des Rachenraums mit A-
Streptokokken prospektiv entnommen wurden. Eintausenddreihundertzweiundfünfzig (1352) Proben waren mit dem Simplexa™
Group A Strep Direct und zum Vergleich mit der Kulturmethode auswertbar. Die Testung der Proben mit dem Simplexa™ Group
A Strep Direct wurde von den Zentren, an denen auch die Abstrichentnahme erfolgte, selbst durchgeführt, eine vergleichende
Kulturmethode wurde in einem (1) Zentrallabor durchgeführt. Der Anteil ungültiger Proben der klinischen prospektiven Studie mit
dem Simplexa™ Group A Strep Direct betrug 0,57% (acht Proben von eintausend dreihundert und sechsundneunzig (8/1396)).
Mithilfe eines validierten, bidirektionalen Sequenzierungsassays wurde eine Diskrepanzanalyse durchgeführt.
Klinische Prospektive Studie (gesamt)
Simplexa™ Kulturmethode
Group A Strep
Direct-Ergebnis Detektiert Nicht detektiert Gesamt
a
Detektiert 152 57 209
b
Nicht detektiert 4 1139 1143
Gesamt 156 1196 1352
97,4%(152/156) 95,2%(1139/1196)
% Sensitivität 95% CI: 93,6% bis % Spezifität 95% CI: 93,9% bis
99,0% 96,3%
% Positiver 72,7%(152/209) 99,7%(1139/1143)
% Negativer prädiktiver
prädiktiver Wert 95% CI: 66,3% bis 95% CI: 99,1% bis
Wert (NPV)
(PPV) 78,3% 99,9%
a
Bei Testung mit einem validierten bidirektionalen Sequenzierungsassay waren 46 von
57 diskrepanten Proben positiv für A-Streptokokken, 9/57 waren negativ für A-
Streptokokken und 2/57 waren unbestimmt.
a
Bei Testung mit einem validierten bidirektionalen Sequenzierungsassay waren 2 von 4
diskrepanten Proben positiv für A-Streptokokken und 2/4 waren negativ.
REPRODUZIERBARKEIT
Drei (3) Prüfzentren beurteilten die Reproduzierbarkeit des Assays zwischen Labors (Inter-Labor-Reproduzierbarkeit) und
zwischen Tagen (Inter-Tag) sowie zwischen und innerhalb von Tests (Inter-/Intra-Assay-Reproduzierbarkeit). Jedes Labor testete
ein Sechserpanel (6), das aus zusammengestellten Proben bestand und jeweils eine für die Serotypen M1 und M3 von A-
Streptococcus schwach positive (ca. 1-fache LoD) und eine mäßig positive Probe (ca. 3-fache LoD) enthielt. Das Panel enthielt
außerdem eine Positiv- und eine Negativkontrolle. Die Assays wurden an fünf (5) verschiedenen Tagen im Dreifachansatz (3)
durchgeführt. An jedem Prüfzentrum gab es zwei (2) Personen (Bediener), die jeweils einmal (1) pro Tag das Probenpanel
testeten (d. h. insgesamt wurden pro Tag 2 Datensätze erhalten). Die Ergebnisse aller Prüfzentren sind in den folgenden
Tabellen zusammengefasst.
Prüfzentrum 1 Prüfzentrum 2 Prüfzentrum 3 Gesamt
Probenpanel- Übereinstim Übereinstim Übereinstim
Element mung in % Durch mung in % Durch mung in % Durch
mit den schn. %CV mit den schn. %CV mit den schn. %CV Gesamt % 95 %CI
erwarteten Ct erwarteten Ct erwarteten Ct
Ergebnissen Ergebnissen Ergebnissen
100,0% 96,7% 100,0% 98,9% 94,0 bis
Negativ n. z. n. z. 41,9 n. z. n. z. n. z.
(30/30) (29/30) (30/30) (89/90) 99,8 %
100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 95,9 bis
Positivkontrolle 29,5 1,4 29,5 3 30 1,2
(30/30) (30/30) (30/30) (90/90) 100,0 %
Schwach
positiv für A- 100,0% 83,3% 93,3% 86,2 bis
38,6 4,4 39,4 5,6 96,7% (29/30) 38 3,5
Streptokokken, (30/30) (25/30) (84/90) 96,9%
Serotyp M1
Mäßig positiv
für A- 100,0% 93,3% 100,0% 97,8% 92,3 bis
35,9 2,6 36,3 4,8 36 1,8
Streptokokken, (30/30) (28/30) (30/30) (88/90) 99,4%
Serotyp M1Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 7
Prüfzentrum 1 Prüfzentrum 2 Prüfzentrum 3 Gesamt
Probenpanel- Übereinstim Übereinstim Übereinstim
Element mung in % Durch mung in % Durch mung in % Durch
mit den schn. %CV mit den schn. %CV mit den schn. %CV Gesamt % 95 %CI
erwarteten Ct erwarteten Ct erwarteten Ct
Ergebnissen Ergebnissen Ergebnissen
Schwach
positiv für A- 96,7% 90,0% 94,4% 87,6 bis
38,5 2,9 39,2 4,8 96,7% (29/30) 39 4,5
Streptokokken, (29/30) (27/30) (85/90) 97,6%
Serotyp M3
Mäßig positiv
für A- 100,0% 90,0% 100,0% 96,7% 90,7 bis
36,3 2,6 36,7 3,2 37 2,7
Streptokokken, (30/30) (27/30) (30/30) (87/90) 98,9%
Serotyp M3
96,9% 95,0 bis
Alle 99,4% (179/180) 92,2% (166/180) 98,9% (178/180)
(523/540) 98,0%
ANALYSEEMPFINDLICHKEIT / NACHWEISGRENZE
Mit einer Verdünnungsreihe wurde die Nachweisgrenze (Limit of Detection, LoD) des Simplexa™ Group A Strep Direct bestimmt.
Die für die Studie verwendeten LoD-Proben wurden aus zwei (2) Serotypen von A-Streptococcus zusammengestellt (M1 und M3),
bei denen es sich um verifizierte (erneut in Kultur genommen und titriert) Bakterienstammlösungen handelte. Für jeden Serotyp
wurden acht (8) verschiedene Konzentrationen der verifizierten Bakterienstammlösung einer simulierten Matrix zugesetzt und
anhand von zweiunddreißig (32) Replikaten bestätigt. Es wurde folgende Nachweisgrenze bestimmt:
Simplexa™ Group A Strep Direct – Nachweisgrenze
Serotyp der A-Streptokokken Konzentration (KBE/ml)
M1 682
M3 2350
ANALYTISCHE REAKTIVITÄT / KREUZREAKTIVITÄT
Analytische Reaktivität
Zur Bestimmung der analytischen Reaktivität wurde die Fähigkeit des Simplexa™ Group A Strep Direct zur Erkennung von
sechzig (60) A-Streptokokken-Stämmen, die in der LoD-Studie nicht verwendet worden waren, geprüft. Analytische Reaktivität
wurde bei einundzwanzig (21) Stämmen beobachtet. Alle wurden bei bzw. unterhalb einer Konzentration von 5000 KBE/ml als A-
Streptokokken-positiv erkannt. Außerdem wurde die analytische Reaktivität mithilfe einer In-Silico NCBI BLAST-
Sequenzanalysemethode bei neununddreißig (39) anderen als in der Nassprüfung verwendeten GAS-Stämmen geprüft.
Qualitatives Ergebnis für
Streptococcus pyogenes-
Konzentration (KBE/ml) Simplexa™ Group A Strep
Serotyp
Direct; % Detektion
M2 1,50 x 103 100% (3/3)
3
M4 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M5 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M6 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M9 3,00 x 10 100% (3/3)
3
M12 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M13 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M14 1,50 x 10 100% (3/3)Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 8
Qualitatives Ergebnis für
Streptococcus pyogenes-
Konzentration (KBE/ml) Simplexa™ Group A Strep
Serotyp
Direct; % Detektion
M18 5,00 x 103 100% (3/3)
3
M22 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M27 3,00 x 10 100% (3/3)
3
M28 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M29 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M49 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M73 3,00 x 10 100% (3/3)
3
M75 3,00 x 10 100% (3/3)
3
M77 3,00 x 10 100% (3/3)
3
M78 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M82 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M87 1,50 x 10 100% (3/3)
3
M89 3,00 x 10 100% (3/3)
Kreuzreaktivität (analytische Spezifität)
Die analytische Reaktivität des Simplexa™ Group A Strep Direct wurde bestimmt, indem die Fähigkeit zur ausschließlichen
Erkennung von A-Streptokokken ohne Kreuzreaktivität mit Organismen, die eng verwandt sind oder ähnliche klinische
Symptome hervorrufen oder zur normalen Rachenflora zählen, untersucht wurde. Dazu wurden negative Proben mit potenziell
kreuzreaktiven Organismen in bekannten Konzentrationen versetzt. Die versetzten Proben wurden hinsichtlich der Reaktivität
mit dem Group A Strep Direct untersucht. Es wurden vierundsechzig (64) Organismen getestet. Bacteroides ovalis und
Tremella fuciformis standen zur Testung nicht zur Verfügung, daher wurden Daten aus einer In-Silico NCBI BLAST-
Sequenzanalyse verwendet. Es wurde keine Kreuzreaktivität festgestellt.
Qualitative Ergebnisse für Simplexa™
Kreuzreagierender Erreger Getestete Konzentration Group A Strep Direct: % Detektion
(Anzahl detektiert/Anzahl getestet)
Baseline1 nicht zutreffend 0,0% (0/5)
Baseline2 nicht zutreffend 0,0% (0/5)
Adenovirus 1 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Adenovirus 7A 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Arcanobacterium haemolyticum 1,00 x 106 TCID50/ml 0,0% (0/3)
6
Bacillus cereus 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Bacteroides ovatus 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Bordetella pertussis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Burkholderia cepacia 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Campylobacter rectus 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Candida albicans 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Chlamydia pneumoniae 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Coronavirus 229E 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
6
Corynebacterium diphtheriae 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
5
Cytomegalievirus (CMV) 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 9
Qualitative Ergebnisse für Simplexa™
Kreuzreagierender Erreger Getestete Konzentration Group A Strep Direct: % Detektion
(Anzahl detektiert/Anzahl getestet)
Enterococcus faecalis vanB 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
Enterovirus 71 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
5
Epstein-Barr-Virus (B95-8) 1,00 x 10 Kopien/ml 0,0% (0/3)
6
Escherichia coli 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Fusobacterium necrophorum 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Haemophilus influenzae 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
HSV-1 McIntyre 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
5
HSV-2 G 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Influenza A/Hong Kong/8/68 H3N2 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Influenza B/Panama/45/90 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
6
Klebsiella pneumoniae 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Lactobacillus acidophilus 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Legionella pneumophila 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Metapneumovirus-9 1,00 x 105 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Moraxella catarrhalis 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
Mycoplasma pneumoniae 1,00 x 106 CCU/ml 0,0% (0/3)
6
Neisseria gonorrhoeae 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Neisseria meningitidis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
5
Parainfluenza 1 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
5
Parainfluenza 2 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
5
Parainfluenza 3 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Peptostreptococcus micros 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/6)
Pseudomonas aeruginosa 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
5
Rhinovirus 1A 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
5
RSV-B 9320 1,00 x 10 TCID50/ml 0,0% (0/3)
Staphylococcus aureus (MRSA), ATCC
6
43300 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Staphylococcus epidermidis (MRSE), ATCC
29887 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Stenotrophomonas maltophilia 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Streptococcus agalactiae 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus anginosus 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus canis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Streptococcus constellatus subsp.
constellatus 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
Streptococcus cristatus 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus dysgalactiae 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus equi subsp. zooepidemicus 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus equinus 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 10
Qualitative Ergebnisse für Simplexa™
Kreuzreagierender Erreger Getestete Konzentration Group A Strep Direct: % Detektion
(Anzahl detektiert/Anzahl getestet)
Streptococcus gallolyticus 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus gordonii 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Streptococcus intermedius 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus mitis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus mutans 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus oralis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus parasanguinis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus pneumoniae 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus salivarius 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus sanguinis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
Streptococcus sobrinus 1,00 x 106 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus uberis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Streptococcus vestibularis 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
6
Treponema denticola 1,00 x 10 Spirochäten/ml 0,0% (0/3)
6
Veillonella parvula 1,00 x 10 KBE/ml 0,0% (0/3)
INTERFERENZ
Die Leistung des Simplexa™ Group A Strep Direct wurde mit potenziell interferierenden Substanzen, die im Rachenraum
vorkommen können, evaluiert. Für die Evaluierung der potenziell interferierenden Substanzen wurde eine zusammengestellten
Probe mit A-Streptokokken in schwach positiven Konzentrationen (ca. 1-fache LoD) und mäßig positiven Konzentrationen (ca. 3-
fache LoD) der Serotypen M1 und M3 von A-Streptokokken verwendet. Bei den getesteten Konzentrationen ergaben sich keine
Hinweise auf eine Interferenz aufgrund der getesteten Substanzen.
Qualitative Ergebnisse
Potenziell Konzentration der für Simplexa™ Group A
Serotyp der
interferierende Wirkstoff interferierenden Strep Direct (Anzahl
GAS-Bakterien
Substanz Substanz detektiert/Anzahl
getestet)
Baseline nicht zutreffend nicht zutreffend M1 100,0% (5/5)
Baseline nicht zutreffend nicht zutreffend M3 100,0% (5/5)
Oxymetazolinhydrochl
Afrin Nasenspray 15% v/v M1 100,0% (3/3)
orid
Oxymetazolinhydrochl
Afrin Nasenspray 15% v/v M3 100,0% (3/3)
orid
Antibiotikum Amoxicillin 0,5 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Antibiotikum Amoxicillin 0,5 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Antibiotikum Cephalexin 0,04 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Antibiotikum Cephalexin 0,04 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Antibiotikum Clindamycin 0,06 mg/ml M1 100,0% (5/5)
Antibiotikum Clindamycin 0,06 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Antibiotikum Erythromycin 1 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Antibiotikum Erythromycin 1 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Antibiotikum Penicillin 1200 E/ml M1 100,0% (3/3)
Antibiotikum Penicillin 1200 E/ml M3 100,0% (3/3)Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 11
Qualitative Ergebnisse
Potenziell Konzentration der für Simplexa™ Group A
Serotyp der
interferierende Wirkstoff interferierenden Strep Direct (Anzahl
GAS-Bakterien
Substanz Substanz detektiert/Anzahl
getestet)
Aspirin Aspirin 0,62 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Aspirin Aspirin 0,62 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Benadryl Diphenhydramin-HCl 10 µl/Abstrich M1 100,0% (3/3)
Benadryl Diphenhydramin-HCl 10 µl/Abstrich M3 100,0% (3/3)
Blut Blut 10 % v/v M1 100,0% (3/3)
Blut Blut 10 % v/v M3 100,0% (3/3)
Chloraseptic Spray
Phenol 10 % v/v M1 100,0% (3/3)
gegen Halsschmerzen
Chloraseptic Spray
Phenol 10 % v/v M3 100,0% (3/3)
gegen Halsschmerzen
Acetaminophen 16,2 mg/ml
Contac Tablette gegen
Chlorpheniraminmaleat 0,06 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Erkältung + Grippe
Phenylephrin-HCl 0,16 mg/ml
Acetaminophen 16,2 mg/ml
Contac Tablette gegen
Chlorpheniraminmaleat 0,06 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Erkältung + Grippe
Phenylephrin-HCl 0,16 mg/ml
Corticosteron Corticosteron 4 mg/Abstrich M1 100,0% (3/3)
Corticosteron Corticosteron 4 mg/Abstrich M3 100,0% (3/3)
Crest Complete
Natriumfluorid 0,1 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Zahnpasta
Crest Complete
Natriumfluorid 0,1 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Zahnpasta
Finafta Orales Ethylalkohol
Anästhetikum/Analgetik Salicylsäure 1/10 Verdünnung M1 100,0% (3/3)
um Benzocain
Finafta Orales Ethylalkohol
Anästhetikum/Analgetik Salicylsäure 1/10 Verdünnung M3 100,0% (3/3)
um Benzocain
Eucalyptol
Menthol
Listerine Mundspülung 10 µl/Abstrich M1 100,0% (3/3)
Methylsalicylat
Thymol
Eucalyptol
Menthol
Listerine Mundspülung 10 µl/Abstrich M3 100,0% (3/3)
Methylsalicylat
Thymol
Gereinigtes Mucin-
Mucin 60 µg/ml M1 100,0% (3/3)
Protein
Gereinigtes Mucin-
Mucin 60 µg/ml M3 100,0% (3/3)
Protein
Neo-Synephrin Phenylephrin-HCl 15% v/v M1 100,0% (3/3)
Neo-Synephrin Phenylephrin-HCl 15% v/v M3 100,0% (3/3)
Dextromethorphanhydr
NyQuil obromid 1/200 Verdünnung M1 100,0% (3/3)
DoxylaminsuccinatSimplexa™ Group A Strep Direct
Seite 12
Qualitative Ergebnisse
Potenziell Konzentration der für Simplexa™ Group A
Serotyp der
interferierende Wirkstoff interferierenden Strep Direct (Anzahl
GAS-Bakterien
Substanz Substanz detektiert/Anzahl
getestet)
Dextromethorphanhydr
NyQuil obromid 1/200 Verdünnung M3 100,0% (3/3)
Doxylaminsuccinat
Schmerzmedikation NSAID 0,1 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Schmerzmedikation NSAID 0,1 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Schmerzmedikation Tylenol 1 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Schmerzmedikation Tylenol 1 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Robitussin Hustensaft / Dextromethorphan-
Hustensaft gegen HBr 2 mg/ml M1 100,0% (3/3)
verstopfte Bronchien Guaifenesin
Robitussin Hustensaft / Dextromethorphan-
Hustensaft gegen HBr 2 mg/ml M3 100,0% (3/3)
verstopfte Bronchien Guaifenesin
Nasenspray mit Natriumchlorid mit
15% v/v M1 100,0% (3/3)
Kochsalzlösung Konservierungsmitteln
Nasenspray mit Natriumchlorid mit
15% v/v M3 100,0% (3/3)
Kochsalzlösung Konservierungsmitteln
Wasser, Elektrolyte,
Speichel 50 µl/Abstrich M1 100,0% (3/3)
Schleim etc.
Wasser, Elektrolyte,
Speichel 50 µl/Abstrich M3 100,0% (3/3)
Schleim etc.
Glycerin
Natriumsaccharin
Natriumbenzoat
Scope Cetylpyridinumchlorid 10 µl/Abstrich M1 100,0% (3/3)
Benzoesäure
Blau 1
Gelb 5
Glycerin
Natriumsaccharin
Natriumbenzoat
Scope Cetylpyridinumchlorid 10 µl/Abstrich M3 100,0% (3/3)
Benzoesäure
Blau 1
Gelb 5
Halspastille Menthol 1,7 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Halspastille Menthol 1,7 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Halspastille Pektin 1 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Halspastille Pektin 1 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Halspastille Zinkglukonatglycin 0,1 mg/ml M1 100,0% (3/3)
Halspastille Zinkglukonatglycin 0,1 mg/ml M3 100,0% (3/3)
Thymol Thymol 400 mg/Abstrich M1 100,0% (3/3)
Thymol Thymol. 400 mg/Abstrich M3 100,0% (3/3)
Zincum Aceticum
Zicam Oral Mist 0,625% v/v M1 100,0% (3/3)
Zincum GluonicumSimplexa™ Group A Strep Direct
Seite 13
Qualitative Ergebnisse
Potenziell Konzentration der für Simplexa™ Group A
Serotyp der
interferierende Wirkstoff interferierenden Strep Direct (Anzahl
GAS-Bakterien
Substanz Substanz detektiert/Anzahl
getestet)
Zincum Aceticum
Zicam Oral Mist 0,625% v/v M3 100,0% (3/3)
Zincum Gluonicum
HEMMUNG DURCH ANDERE MIKROORGANISMEN
Der Simplexa™ Group A Strep Direct wurde auf seine Fähigkeit zur Erkennung von A-Streptokokken in Gegenwart potenziell
inhibitorischer Organismen untersucht. Das Panel aus vierundsechzig (64) potenziell inhibitorischen Organismen wurde einzeln
einem Pool mit einer niedrigen Konzentration (ca. 1-fache Nachweisgrenze) und einer moderaten Konzentration (ca. 3-fache
Nachweisgrenze) der Serotypen M1 und M3 von A-Streptococcus zugesetzt. Falls in keinem der drei (3) Replikate ein Signal für
A-Streptokokken detektiert wurde, wurden weitere fünf (5) Replikate zur Bestätigung getestet. Bacteroides ovalis und Tremella
fuciformis standen zur Testung nicht zur Verfügung, daher wurden Daten aus einer In-Silico NCBI BLAST-Sequenzanalyse
verwendet. Bei den getesteten Konzentrationen wurde im Simplexa™ Group A Strep Direct keine hemmende Wirkung
festgestellt.
GAS-Serotyp: M1 GAS-Serotyp: M3
Qualitative Qualitative
Ergebnisse für Ergebnisse für
Erreger Getestete Konzentration Simplexa™ Group A Simplexa™ Group
Strep Direct: % A Strep Direct: %
Detektion (Anzahl Detektion (Anzahl
detektiert/Anzahl detektiert/Anzahl
getestet) getestet)
Baseline nicht zutreffend 100,0% (11/11) 100,0% (10/10)
5
Adenovirus 1 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
Adenovirus 7A 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Arcanobacterium 6
1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
haemolyticum
Bacillus cereus 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Bacteroides ovatus 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Bordetella pertussis 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Burkholderia cepacia 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Campylobacter rectus 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Candida albicans 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Chlamydia pneumoniae 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
Coronavirus 229E 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Corynebacterium
1,00 x 106 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
diphtheriae
Cytomegalievirus (CMV) 1,00 x 105 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Enterococcus faecalis 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
vanB
Enterovirus 71 1,00 x 105 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Epstein-Barr-Virus (B95- 5
1,00 x 10 Kopien/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
8)
6
Escherichia coli 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Fusobacterium 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
necrophorum
Haemophilus influenzae 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
HSV-1 McIntyre 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
HSV-2 G 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 14
GAS-Serotyp: M1 GAS-Serotyp: M3
Qualitative Qualitative
Ergebnisse für Ergebnisse für
Erreger Getestete Konzentration Simplexa™ Group A Simplexa™ Group
Strep Direct: % A Strep Direct: %
Detektion (Anzahl Detektion (Anzahl
detektiert/Anzahl detektiert/Anzahl
getestet) getestet)
Influenza A/Hong
1,00 x 105 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Kong/8/68 H3N2
Influenza 5
1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
B/Panama/45/90
Klebsiella pneumoniae 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Lactobacillus acidophilus 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Legionella pneumophila 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
Metapneumovirus-9 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Moraxella catarrhalis 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Mycoplasma
1,00 x 106 CCU/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
pneumoniae
6
Neisseria gonorrhoeae 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Neisseria meningitidis 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
Parainfluenza 1 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
Parainfluenza 2 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
Parainfluenza 3 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Peptostreptococcus 6
*** 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (6/6) 100,0% (6/6)
micros
Pseudomonas 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
aeruginosa
5
Rhinovirus 1A 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
5
RSV-B 9320 1,00 x 10 TCID50/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Staphylococcus aureus 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
(MRSA), ATCC 43300
Staphylococcus
6
epidermidis (MRSE), 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
ATCC 29887
Stenotrophomonas 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
maltophilia
Streptococcus agalactiae 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (5/5) 100,0% (3/3)
anginosus*
6
Streptococcus canis 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus
constellatus subsp. 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
constellatus
Streptococcus cristatus 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
dysgalactiae
Streptococcus equi 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
subsp. zooepidemicus
Streptococcus equinus 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus
1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
gallolyticus
6
Streptococcus gordonii 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus
1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
intermediusSimplexa™ Group A Strep Direct
Seite 15
GAS-Serotyp: M1 GAS-Serotyp: M3
Qualitative Qualitative
Ergebnisse für Ergebnisse für
Erreger Getestete Konzentration Simplexa™ Group A Simplexa™ Group
Strep Direct: % A Strep Direct: %
Detektion (Anzahl Detektion (Anzahl
detektiert/Anzahl detektiert/Anzahl
getestet) getestet)
Streptococcus mitis 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Streptococcus mutans 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Streptococcus oralis 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
parasanguinis
Streptococcus 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
pneumoniae
Streptococcus salivarius 1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus
1,00 x 106 KBE/ml 100,0% (5/5) 100,0% (3/3)
sanguinis**
6
Streptococcus sobrinus 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Streptococcus uberis 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
Streptococcus 6
1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
vestibularis
Treponema denticola 1,00 x 106 Spirochäten/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
6
Veillonella parvula 1,00 x 10 KBE/ml 100,0% (3/3) 100,0% (3/3)
*1/3 der anfänglichen Replikate hatte ein niedriges Volumen (bei der Kontrolle keine ausreichende
Flüssigkeitsmenge), sodass drei weitere Replikate getestet wurden. Insgesamt wurden daher 5 Replikate
evaluiert.
**1/3 der anfänglichen Replikate war aufgrund einer fehlgeschlagenen internen Kontrolle („IC Failure“)
ungültig („invalid“), sodass drei weitere Replikate getestet wurden. Insgesamt wurden daher 5 Replikate
evaluiert.
***Die Probe wurde zweimal getestet, da im Protokoll für ein und denselben Organismus verschiedene
Bezeichnungen angegeben waren. Insgesamt wurden daher 6 Replikate evaluiert.
KONTAMINATION DURCH VERSCHLEPPUNG
Die Amplifizierung von Verschleppungen in Simplexa™-Assays, einschließlich des Simplexa™ Group A Strep Direct-Assays,
wurde mit dem Simplexa™ Flu A/B & RSV Direct REF MOL2650 (K120413) untersucht und ist auf der FDA-Website zu finden.
Die Untersuchung lässt sich auf den Simplexa™ Group A Strep Direct-Assay anwenden, da sie nicht analytspezifisch ist. Im
Simplexa™ Flu A/B & RSV Direct REF MOL2650 (K120413) zielte die Untersuchung von Amplifikationen von Verschleppungen
darauf ab, Kontaminationen in negativen Proben festzustellen. Die Untersuchung war so ausgelegt, dass auf jeder Platte
abwechselnd stark positive und negative Proben platziert wurden. Es gab keinerlei Hinweise auf Kontaminationen durch
Verschleppung.
ERWARTETE BEFUNDE
Die Prävalenz von A-Streptococcus wird von dem Patientenkollektiv und der Epidemiologie beeinflusst. In der prospektiven
Studie mit dem SimplexaTM Group A Strep Direct waren zweihundertneun (209) der eintausenddreihundertzweiundfünfzig (1352)
Proben bzw. 15,4 % der getesteten Proben aus vier (4) geografisch verteilt liegenden Zentren zwischen dem 6. Mai 2014 und
dem 28. Oktober 2014 positiv.Simplexa™ Group A Strep Direct
Seite 16
LITERATUR
1. Lancefield RC. 1993. A serological differentiation of human and other groups of hemolytic streptococci. J. Exp. Med. 57 (4):
571–95.
2. Poses RM, Cebul RD, Collins M, Fager SS. 1985. The accuracy of experienced physicians' probability estimates for patients
with sore throats: implications for decision making. JAMA 254:925-929.
3. Komaroff AL, Pass TM, Aronson MD, Ervin CT, Cretin S, Winikoff RN, and Branch WT Jr. 1986. The prediction of
streptococcal pharyngitis in adults. J. Gen. Intern. Med. 1:1-7.
4. Marx, John. 2010. Rosen's emergency medicine: concepts and clinical practice (7th ed.). Chapter 30.
5. Brook I, and Dohar JE. 2006. Management of group A beta-hemolytic streptococcal pharyngotonsillitis in children. J. Fam.
Pract. 55 (12): S1–11.
6. Stevens DL, Tanner MH, Winship J, Swarts R, Ries KM, Schlievert PM, and Kapalan E. 1989. Severe group A streptococcal
infections associated with a toxic shock-like syndrome and scarlet fever toxin A. N. Engl. J. Med. 321 (1): 1-7.
7. Hahn RG, Knox LM, and Forman TA. 2005. Evaluation of post streptococcal illness. Am. Fam. Physician. 71 (10): 1949-54.
8. Choby BA. 2009. Diagnosis and treatment of streptococcal pharyngitis. Am. Fam. Physician. 79 (5): 383-90.
9. Lintges M, Sabine S, Uciechowski P, Plümäkers B, Reinert RR, Al-Lahham A, Lütticken R, and Rink L. 2007. A new closed-
tube multiplex real-time PCR to detect eleven super antigens of Streptococcus pyogenes identifies a strain without super
antigen activity. International Journal of Medical Microbiology (297): 471-478.
10. Twagira1 MFN, Wade1 JJ, Eltringham1 I, and Smith M. 2005. Development of a real-time PCR assay on the Roche Light-
Cycler for the detection of erm and mef erythromycin resistance genes in ß-haemolytic streptococci. JAC. 56 (4): 793-794.
Die Verwendung von Scorpions®-Sonden für Zwecke der In-Vitro-Diagnostik beim Menschen ist durch eine Lizenz geschützt, die Focus Diagnostics, Inc. von DxS, Ltd.
erhalten hat. Scorpions ist eine eingetragene Marke von Qiagen Manchester,UK. Die Farbstoffe Black Hole Quencher™, CAL Fluor™ und Quasar™ sind Marken der
Biosearch Technologies, Inc. („BTI“). Die Black Hole Quencher, CAL Fluor- und Quasar-Farbstofftechnologie ist im Rahmen eines Vertrags mit BTI lizenziert, und diese
Produkte werden ausschließlich für klinische, diagnostische oder Forschungs- und Entwicklungszwecke verkauft.
VERTRIEB DURCH:
mdi Europa GmbH, Langenhagener Str. 71 30855, Langenhagen-Hannover, Deutschland
PI.MOL2850.IVD.DE
BESTELLINFORMATIONEN Rev. C
Erstellungsdatum: 17.Juni. 2015
Telefon: 800-838-4548 (nur USA) 562-240-6500 (International)
Fax: (714) 243-4703
TECHNISCHE HILFE
Telefon: 800-838-4548 (nur USA) 562-240-6500 (International)
Fax: (562) 240-6526
Besuchen Sie unsere Webseite: www.focusdx.com Cypress, California 90630 USASie können auch lesen
