Die automatisierte Herstellung von CAR-T- Zellen im geschlossenen System - Symposium der Cellex Academy 14.09.2018 Julia Riewaldt - Cellex Stiftung
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Die automatisierte Herstellung von CAR-T-
Zellen im geschlossenen System
Symposium der Cellex Academy
14.09.2018
Julia Riewaldt
www.cellex.me www.gemoab.com
Agenda
I. UniCAR-T Herstellung im Labormaßstab
II. Automatisierte UniCAR-T Herstellung im klinischen Maßstab
• Prozessübersicht
• Qualitätskontrolle
• Prozessparameter
III. Reinraumkonzept der UniCAR-T Herstellung
IV. Zusammenfassung
13.09.2018 2
Autologe UniCAR-T-Immuntherapie 13.09.2018 3
Agenda
I. UniCAR-T Herstellung im Labormaßstab
II. Automatisierte UniCAR-T Herstellung im klinischen Maßstab
• Prozessübersicht
• Qualitätskontrolle
• Prozessparameter
III. Reinraumkonzept der UniCAR-T Herstellung
IV. Zusammenfassung
13.09.2018 4
Herstellung (UniCAR) T-Zellen im Labormaßstab
Plasmide
(Transfervektor, Produktionszellen Herstellungsschritte Benötigte Geräte
Verpackungsplasmide) (HEK293T)
Incoming starting material
Transfektion
Isolation T cells Device for isolation
Viruspartikel
Activation T cells Culture device I: small volume
Quality Control
Transduction centrifuge
Expansion Culture device II: large volume
Formulation centrifuge
Cryopreservation CRF
13.09.2018 5
Optimierung des F&E Herstellungsprozesses
Transduction efficiency at day 7
Activator: TransAct Beads
Medium: TexMACS + cytokines
Isolierungsmethode der zu transduzierenden Zellen n=4
100
Wellgröße, Plattenmaterial 80
UniCAR+ T cells [%]
Medium und Zusätze (z.B. Interleukine) 60
40
Zellzahl bzw. Zelldichte
20
Aktivierung (Art der Beads)
0
M I1
M I2
M I3
M I4
I5
M I1
M I2
M I3
M I4
I5
M I1
M I2
M I3
M I4
I5
MOI (infektiöse Partikelzahl/Zelle)
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
M
M
M
d1 d2 d3
Tag der Transduktion
Spinocculation (Dauer, Geschwindigkeit)
Transduktionsenhancer (Protamin, Retronektin, Vectofusin,...)
Kultivierungsmethoden (Verwendung von Schüttlern)
13.09.2018 6
Agenda
I. UniCAR-T Herstellung im Labormaßstab
II. Automatisierte UniCAR-T Herstellung im klinischen Maßstab
• Prozessübersicht
• Qualitätskontrolle
• Prozessparameter
III. Reinraumkonzept der UniCAR-T Herstellung
IV. Zusammenfassung
13.09.2018 7
Herstellung UniCAR-T im klinischen Maßstab
Herstellungsschritte Benötigte Geräte
Incoming starting material Üblich (A/B) Cellex (C/D)
Isolation T cells Device for isolation
Activation T cells Culture device I: small volume
Single platform
Quality Control
Transduction centrifuge
Expansion Culture device II: large volume
Formulation/Cryopreservation centrifuge
Packaging CRF CRF
Outgoing Transport
13.09.2018 8
Herstellung UniCAR-T im klinischen Maßstab
CliniMACS Prodigy® XURI W25 CliniMACS Prodigy®
Incoming starting material
Formulation
Expansion
Expansion
Packaging
250 mL max. Kulturvolumen
• • 1000 mL max. Kulturvolumen
Fed-batch Kultur • • Fed-batch oder Perfusionskultur
Kontinuierliche Gasperfusion
• • Kontinuierliche Gasperfusion
Kontinuierliche • • Kontinuierliche Temperaturüberwachung
Temperaturüberwachung • kontinuierliche Wellenbewegung für
• Schütteln für Durchmischung
13.09.2018 Durchmischung 9
Herstellungsprozess UniCAR02-T
Zeit [d]
-1 0 1-3 4-7 7- ≤14 ≤14 ≤16Herstellungsprozess: Qualitätskontrolle
Zeit [d]
-1 0 1-3 4-7 7- ≤14 ≤14 ≤16Agenda
I. UniCAR-T Herstellung im Labormaßstab
II. Automatisierte UniCAR-T Herstellung im klinischen Maßstab
• Prozessübersicht
• Qualitätskontrolle
• Prozessparameter
III. Reinraumkonzept der UniCAR-T Herstellung
IV. Zusammenfassung
13.09.2018 12UniCAR-T Herstellung: Reinraumkonzept (1)
• 2019 Start von 2 klinischen Studien (UniCAR02-T-pPSMA, UniCAR02-T-CD123)
• bei Erfolg schnelle Kapazitätserweiterung notwendig
modulares Design des Produktionsbereichs (Raum-in-Raum Container)
flexible Anpassung der Produktionsfläche an aktuelle Anforderungen
schnelle Anpassung an neue regulatorische oder produktionsbedingte
Anforderungen (z.B. Klassifizierung, Wechsel im Equipment)
13.09.2018 13CCMP: UC02-T manufacturing facility design
Unit 1 • Start mit 2 Einheiten à 102 m2
• Pro Einheit: 4 Suiten
Isolator • Vergrößerungsoptionen vorhanden
Suit 4
(A in C)
• 1 Suite = 1 Produkt
• Kryolager und QK-Labor im Haus
Suit 3 (140 m2)
• Kapazität pro Herstellungseinheit:
Media 8-12 Produkte/Monat
preparation Suit 1 Suit 2
13.09.2018 14CCMP: UC02-T manufacturing facility design
Unit 1
Isolator
Suit 4
(A in C)
Suit 3
Media
preparation Suit 1 Suit 2
13.09.2018 15Zusammenfassung Translation des Herstellungsprozesses aus Labormaßstab in GMP-konformen, klinischen Maßstab Bisher erfolgreiche Herstellung von 9 UniCAR-T Batches Geringe „Hands-on“-Zeit pro Batch Robuste In-Prozess- und Prozessend-Parameter Generierte UniCAR-T in in vitro und in vivo Modellen wirksam Modulares Reinraumkonzept für flexible UniCAR-T Herstellung 13.09.2018 16
Acknowledgements Cellex Cell Professionals University Hospital Dresden UCC
Gerhard Ehninger, & HZDR
Cellex Patient Treatment Volker Knöll Michael Bachmann
Marc Cartellieri, Carla Kreissig Stefanie Koristka
Johannes Spehr, Klaus Frenken, Helen Springer-Frauenhoff, Anja Feldmann
Darin Alannan, Sonja Schallenberg, Claudia Arndt
Jana Hase, Traugott Leopold, Susann Helas,
Christin Tischner, Ilker Karaca, Can Korkmaz
Patrizia Di Benedetto, Martina Raupach,
Sabine Schöffel-Weiß, Kai Schormann University Hospital Dresden
Christiane Kahle, Susann Gerber, Glenn
Medical Clinic I
Gröbe, Sarah Tröger, Rebecca Christiana,
Fraunhofer ITEM Braunschweig Martin Bornhäuser
Katrin Zimmermann, Nicole Kronstein,
Holger Ziehr Malte von Bonin, Martin Wermke
Josephine Dietrich, Jan-Erik Meyer
Kathrin Bohle
Stefanie Hebecker, Markus Heine University Hospital Würzburg
GEMoaB Monoclonals GmbH
Annabel Nieter, Ute Pägelow, Nico Langer CCC
Armin Ehninger
Ralf Bargou
Marika Geissler Maria-Elisabeth Goebeler
Cordula Gründer
Kristin Franke Alexander Höpping, Linda Evermann
Julia Huffziger, Ulrike Böhmer, Jana Fiebiger,
Ilka Müller, Juliane Schneider, Therese
Miersch, Alexander Schiewart, Andre Herbrig,
Christin Eger, Simon LoffThank you for your attention!
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