Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit - Sample & Assay Technologies - Januar 2009 - Qiagen
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Januar 2009
Gebrauchsinformation
cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit
24 (Katalog Nr. 280363)
Fürs Rind
Zul. Nr: FLI-B 468
280363
QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden
Sample & Assay TechnologiesQIAGEN Sample and Assay Technologies QIAGEN ist der führende Anbieter von Proben- und Testtechnologien zur Isolierung und Analyse jeder biologischen Probe. Unsere hochwertigen Produkte und der exzellente Service garantieren Erfolg von der Probenvorbereitung bis zum Ergebnis. QIAGEN setzt Standards für: Aufreinigung von DNA, RNA und Proteinen Testsysteme für Nukleinsäuren und Proteine microRNA Forschung und RNAi Automatisierung von Proben- und Testtechnologien Wir stellen Ihnen die neuesten Technologien zur Verfügung, damit Sie schnell und sicher die besten Ergebnisse erzielen können. Weitere Informationen finden Sie unter www.qiagen.com .
Inhaltsverzeichnis Wirksame Bestandteile 4 Symbole 4 Darreichungsform 5 Art der Aufbewahrung 5 Datum des Verfalls 6 Anwendungszweck 6 Tierarten, für die das Mittel bestimmt ist 6 Art und Beschaffenheit des Probenmaterials 6 Sicherheitsinformationen 6 Qualitätskontrolle 7 Produktgewährleistung und Zufriedenheitsgarantie 7 Technischer Service 7 Einleitung 9 Prinzip der Real-Time PCR 10 Erreger-Informationen 10 Vom Anwender bereitzustellende Ausrüstung und Reagenzien 11 Wichtige Hinweise 13 Allgemeine Vorsichtsmaßnahmen 13 Isolierung viraler RNA 13 Carrier-RNA 14 Protokoll 1: PCR 15 Protokoll 2: Auswertung 22 Troubleshooting 29 Bestellinformationen 32 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 3
Wirksame Bestandteile
cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit (24)
Katalog Nr. 280363
Anzahl der Reaktionen 24
BVDV Type 1/2
Master: Enzyme, 2 x 12
Blau
Oligonucleotide, PCR- Reaktionen
Puffer
BVDV Type 1 Control:
Rot In-vitro Transcript in 200 μl
Puffer
BVDV Type 2 Control:
Rot In vitro Transcript in 200 μl
Puffer
BDV Control: In vitro
Rot 200 μl
Transcript in Puffer
BVDV Type 1/1 Mg-
Gelb Sol: Magnesium Sulfat 400 μl
Lösung
Weiss H2O 1000 μl
Gebrauchsinformation 1
Symbole
Inhalt reicht für Tests
Zur Verwendung bis
4 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Katalognummer
Chargenbezeichnung
Temperaturbereich
Hersteller
Magnesium-Lösung
Kontrolle
Komponenten
Inhalt
Anzahl
Materialnummer
Gebrauchsinformation
Darreichungsform
Die Komponenten des cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit sind wässrige Lösungen
zur Verwendung in der PCR.
Art der Aufbewahrung
Die Komponenten des cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit sollten bei -15 bis -
30°C gelagert werden. Wiederholtes Auftauen und Einfrieren (> 2 x) sollte
vermieden werden, da dadurch die Sensitivität verringert wird. Bei
unregelmäßigem Gebrauch sollten deshalb die Reagenzien aliquotiert werden.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 5Falls die Komponenten bei 2-8°C gelagert werden, darf ein Zeitraum von 5 Stunden nicht überschritten werden. Datum des Verfalls Die Komponenten des cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit sind bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Datum haltbar. Anwendungszweck Der cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit ist für die Differenzierung zwischen BVDV 1, BVDV 2 und dem Border-Disease-Virus in positiven Proben vom Rind (Bos tauris) durch die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) vorgesehen. Es wurde entwickelt und validiert auf dem Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System. Andere Real-time PCR Geräte können alternativ genutzt werden, allerdings können Einstellungen der Geräte (zum Beispiel Farbkanäle oder Temperaturangaben) abweichen. Abhängig von regulatorischen Anforderungen können zusätzliche Validierungsexperimente notwendig sein. Tierarten, für die das Mittel bestimmt ist Fürs Rind. Art und Beschaffenheit des Probenmaterials Das Ausgangsmaterial ist virale RNA, die aus bovinem Plasma, Serum, Hautproben (Ohrgewebe), Milchsediment (Zellen) oder aus EDTA-Blut isoliert wurde (siehe “Isolierung viraler RNA”, Seite 13). Sicherheitsinformationen Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien immer einen Laborkittel, Einmal- Handschuhe und eine Schutzbrille. Weitere Informationen können Sie den entsprechenden Sicherheits-Datenblättern entnehmen (material safety data sheets, MSDSs). Unter www.qiagen.com/Support/MSDS.aspx finden Sie zu jedem QIAGEN® Kit und zu jeder Kit-Komponente das jeweilige MSDS als PDF- Datei, die Sie einsehen und ausdrucken können. 6 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009
24-Stunden-Giftnotruf Im Notfall können Sie 24 Stunden am Tag medizinische Informationen (in englischer, französischer und deutscher Sprache) erhalten über den: Giftnotruf der Beratungsstelle bei Vergiftungen in Mainz (Deutschland), Tel.: +49-(0)6131-19240 Qualitätskontrolle In Übereinstimmung mit dem ISO-zertifizierten Qualitäts-Management-System von QIAGEN wurde jede Charge des cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kits gegen vorgegebene Spezifikationen getestet, um eine einheitliche Produktqualität zu gewährleisten. Produktgewährleistung und Zufriedenheitsgarantie QIAGEN garantiert die volle Funktionsfähigkeit aller ihrer Produkte für die in der Produktliteratur genannten Anwendungen bei genauer Einhaltung der beschriebenen Protokolle. Der Kunde muss die Eignung dieses Produkts für seine spezielle Anwendung selbst bestimmen. Sollte das Produkt trotz sachgemäßer Verwendung nicht zu zufriedenstellenden Ergebnissen führen, wird QIAGEN es kostenlos ersetzen oder den Verkaufspreis erstatten. Wir behalten uns das Recht vor, jedes Produkt zu verändern oder zu modifizieren, um dadurch dessen Funktionalität oder Design zu verbessern. Sollte ein QIAGEN Produkt nicht Ihren Erwartungen entsprechen, rufen Sie unseren Technischen Service oder den Distributor an. Wir werden Ihnen entweder den gezahlten Betrag erstatten oder das Produkt ersetzen – so wie Sie es wünschen. Gesonderte Konditionen gelten für die wissenschaftlichen Instrumente, Serviceprodukte und für die auf Trockeneis gelieferten Produkte von QIAGEN. Kontaktieren Sie uns für weitere Informationen. Sie können auf Wunsch ein Exemplar der Allgemeinen Geschäftsbedingungen von QIAGEN erhalten; sie sind ebenfalls auf der Rückseite unserer Rechnungen abgedruckt. Wenn Sie Fragen zu den Spezifikationen oder zur Leistung des Produkts haben, wenden Sie sich bitte an unseren Technischen Service oder an einen der regionalen Händler (siehe die Rückseite oder besuchen Sie www.qiagen.com). Technischer Service Der Technische Service von QIAGEN garantiert Qualität auch in der wissenschaftlichen Beratung unserer Kunden. Hier stehen Ihnen erfahrene Wissenschaftler für Ihre Fragen zu QIAGEN Produkten gerne zur Verfügung. Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 7
Rufen Sie uns an, wenn Sie Fragen zum cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit oder zu anderen QIAGEN Produkten haben. Die Erfahrungen unserer Kunden sind eine wichtige Informationsquelle bei der Entwicklung und Verbesserung unserer Produkte. Diese Informationen sind sowohl für andere Wissenschaftler, als auch für die Entwickler von QIAGEN sehr hilfreich. Rufen Sie uns an, denn Ihre Vorschläge und Ideen zu unseren Produkten und zu neuen Techniken interessieren uns. Für technische Unterstützung sowie weitere Informationen besuchen sie bitte unseren Technischen Support unter www.qiagen.com/Support oder wenden Sie sich an eine der QIAGEN Technical Service Departments oder an Ihren lokalen Distributor (siehe die Rückseite oder besuchen Sie www.qiagen.com). 8 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009
Einleitung Der cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit ist ein gebrauchsfertiges System für die Differenzierung zwischen BVDV 1, BVDV 2 und dem Border-Disease-Virus in positiven Proben vom Rind (Bos tauris) durch die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) auf den Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System. Der BVDV Type 1/2 Master beinhaltet Reagenzien und Enzyme für die reverse Transkription und spezifische Amplifikation eines hoch konservierten Abschnitts des BVDV- und BDV-Genoms. Die Detektion der Amplifikate erfolgt durch die Signalmessung in dem FAM™- (BVDV-1), JOE- (BVDV-2) und ROX-Kanal (BDV) im Applied Biosystems Real-Time PCR System. Es werden drei externe Positivkontrollen (BVDV 1 Control, BVDV 2 Control und BDV Control) mitgeliefert. Der Kit ist für die Verwendung zur Detektion und Differenzierung zwischen den beiden BVDV Genotypen BVDV 1 und BVDV 2, sowie zur Differenzierung von dem Border-Disease-Virus vorgesehen. Es ist empfohlen, den Kit als Anschlusstest für Analysen mit dem cador BVDV RT-PCR Kit (siehe Seite 32 für Bestellinformationen) in einem Screening-Programm zu nutzen. Mit Hilfe des cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit kann dann bestimmt werden, welchen BVDV Genotyp die Probe enthält (siehe Schema). Der Kit kann ebenfalls als eigenständiger Test für positive Proben verwendet werden, bei denen Möglichkeit einer PCR Inhibition ausgeschlossen wurde. Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 9
Prinzip der Real-Time PCR Bei dem Nachweis mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) werden spezifische Bereiche aus dem Erregergenom amplifiziert. Die Detektion findet bei der Real-Time PCR mit Hilfe von Fluoreszenzfarbstoffen statt. Diese sind in der Regel an Oligonukleotid-Sonden gekoppelt, die spezifisch an das PCR-Amplifikat binden. Die Detektion der Fluoreszenzintensitäten im Verlauf der Real-Time PCR ermöglicht den Nachweis und die Quantifizierung der Produkte, ohne die Probenröhrchen nach der PCR wieder öffnen zu müssen (Mackay, 2004).* Erreger-Informationen Das Virus der bovinen Virusdiarrhoe (BVDV: Bovine Viral Diarrhea Virus) ist ein wirtschaftlich bedeutender tierpathogener Infektionserreger und wird in die zwei Genotypen BVDV 1 und BVDV 2 eingeteilt. Beide Genotypen sind pathogen. Die Hauptaspekte der Pathogenese der durch die zwei Genotypen verusachten Krankheit ähneln sich. BVDV Infektionen können von milden Durchfallerkrankungen über das haemorrhagische Syndrom bis zur Mucosal Disease führen. Außerdem kann es durch eine BVDV-Infektion zu Fruchtbarkeitsstörungen und Aborten kommen. Bei einer Infektion mit einem nicht-cytopathogenen Biotyp während der Trächtigkeit kann der betroffene Fetus eine lebenslange Immuntoleranz ausbilden, wird aber zum symptomlosen Dauerausscheider (persistent infizierte Tiere; PI-Tiere). Durch Identifikation der PI-Tiere können permanente Quellen der Reinfektion ausgeschlossen werden. Border-Disease (auch als Zitterkrankheit bekannt) kommt in der Regel bei den Schafen vor. Eine Infektion während der Trächtigkeit hat Aborte, abnormale Behaarung oder Defekte des zentralen Nervensystems bei den Lämmern zur Folge. Diese Defekte führen oft zum Tod. In leichten Fällen werden die Tiere zu PI-Tieren. Aktuelle Daten zeigen, dass BDV auch auf die Rinder übergehen und ggf. klinische Symptome entwickeln kann.† In leichten Fällen ermöglicht die Detektion von BDV im Rind die Identifikation persistent infizierter Rinder. * Mackay, I.M. (2004) Real-time PCR in the microbiology laboratory. Clin. Microbiol. Infect. 10, 190. † Cranwell, M.P., Otter, A., Errington, J., Hogg, R.A., Wakeley, P., and Sandvik, T. (2007) Detection of Border disease virus in cattle. Vet. Rec. 161, 211. 10 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009
Vom Anwender bereitzustellende Ausrüstung und
Reagenzien
Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien immer einen Laborkittel,
Schutzhandschuhe und eine Schutzbrille. Weitere Informationen können Sie
dem entsprechenden Sicherheits-Datenblättern (material safety data sheets,
MSDS) entnehmen. Unter www.qiagen.com/Support/MSDS.aspx finden Sie zu
jedem QIAGEN® Kit und zu jeder Kit-Komponente das jeweilige MSDS als PDF-
Datei, die Sie einsehen und ausdrucken können.
RNA-Isolierungskit (siehe “Viral RNA isolation”, Seite 13)
Pipetten (einstellbar)
Sterile Pipettenspitzen mit Filter
Vortex-Mixer
Tischzentrifuge mit Rotor für 2 ml-Reaktionsgefäße
Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System
Eis oder Kühlblock
Verwendung von PCR-Röhrchen
Optische Reaktionsgefäße (ABI PRISM Optical Tubes, 8 tubes/strip, Kat. Nr.
4 316 567, mit ABI PRISM Optical Caps, Kat. Nr. 4 323 032, Applied
Biosystems; oder MicroAmp® Optical Tubes, Kat. Nr. N8010933, Applied
Biosystems)†
96-well zweiteiliger Halterahmen zur Verwendung von optischen
Reaktionsgefäßen (96-Well Tray/Retainer Set, Kat. Nr. 403 081, Applied
Biosystems)†
†
Dies ist keine vollständige Lieferantenliste; viele wichtige Vertreiber biologischer Artikel sind
nicht aufgeführt.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 11Verwendung der 96-well optischen Reaktionsplatte
96-well Reaktionsplatte/Reaktionsgefäße für optische Messungen mit
entsprechenden optischen Verschlussmaterialien (96-Well Optical Reaction
Plate, Kat. Nr. 4 306 737, mit Optical Adhesive Covers, Kat. Nr.
4 311 971, Applied Biosystems)†
Kompressionsmatte zur Verwendung mit optischen Klebefolien (Optical
Cover Compression Pads, Kat. Nr. 4 312 639, Applied Biosystems)†
Applikator zum Verschließen der Reaktionsplatten unter Verwendung von
optischen Klebefolien (Adhesive Seal Applicator Kit, Kat. Nr. 4 333 183,
Applied Biosystems)*
Zentrifuge mit Rotor für 96-well Mikrotiterplatten (optional), z. B. das
QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System (für Bestellung siehe Seite
28)†
12 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Wichtige Hinweise
Allgemeine Vorsichtsmaßnahmen
Folgendes sollte vom Anwender immer beachtet werden:
Sterile Pipettenspitzen mit Filter verwenden.
Positivmaterial (Proben, Kontrollen, Amplifikate) räumlich getrennt von den
übrigen Reagenzien lagern, aufreinigen und zur Reaktion zusetzen.
Alle Komponenten vor Testbeginn vollständig bei Raumtemperatur
auftauen (15–25°C).
Anschließend die Komponenten gründlich durchmischen und kurz
zentrifugieren.
Zügig auf Eis oder im Kühlblock arbeiten.
Isolierung viraler RNA
Wir empfehlen den QIAamp Viral RNA Mini Kit (50) (QIAGEN, Kat. Nr. 52904)
für die manuelle Reinigung viraler RNA aus bovinem Plasma oder Serum mit
geringem Durchsatz.
Für Extraktion viraler RNA aus Hautproben (Ohrgewebe) empfehlen wir den
RNeasy® Fibrous Tissue Mini Kit (50) (QIAGEN, Kat. Nr. 74704). Für die
Reinigung viraler RNA aus Milchsediment (Zellen) ist der RNeasy Mini Kit
(Kat. Nr. 74104 or 74106) oder der RNeasy 96 Kit (Kat. Nr. 74181 bzw.
74182) mit QIAshredder Homogenisatoren (Kat. Nr. 79654 bzw. 79656)
erhältlich.
Ein spezialisiertes Protokoll für die automatisierte Hochdurchsatz-Reinigung
viraler Nukleinsäure aus EDTA-Blut, Gewebe (Ohrgewebe) und Milchsediment
(Zellen) ist erhältlich zur Verwendung mit dem BioRobot® Universal System. Bei
Fragen wenden Sie sich bitte an den QIAGEN Technical Services
(Kontaktinformationen finden Sie an der Rückseite oder unter
www.qiagen.com).
Bei Extraktionen, die Ethanol-haltige Waschpuffer benutzen wie der QIAamp
Viral RNA Mini Kit oder RNeasy Kits, stellen Sie unbedingt sicher, dass vor der
Elution ein zusätzlicher Zentrifugationsschritt zur Beseitigung von Ethanol-
Rückständen durchgeführt wird. Dies verhindert mögliche PCR-Inhibitionen.
Dieser zusätzliche Schritt wird in den Protokollen relevanter Kit-Handbücher als
empfohlener optionaler Schritt aufgeführt.
Die in Blutentnahmeröhrchen enthaltenen Antikoagulantien können inhibierend
auf die PCR wirken, werden aber von den aufgeführten Aufreinigungskits gut
eliminiert. Es wird empfohlen, auf die Benutzung von Heparin-Blut zu
verzichten.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 13Der cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit ist nicht kompatibel mit Aufreinigungs-
verfahren, die auf der Grundlage von Phenol arbeiten.
Carrier-RNA
Der Einsatz von Carrier-RNA ist für die Effizienz der Aufreinigung und damit für
die DNA-/RNA-Ausbeute von entscheidender Bedeutung. Um eine höhere
Stabilität der im QIAamp Viral RNA Mini Kit mitgelieferten Carrier-RNA zu
erzielen, empfehlen wir folgendes von den Angaben im Handbuch des
Isolierungskits abweichendes Vorgehen:
Resuspendieren Sie die lyophilisierte Carrier-RNA vor Erstbenutzung des
Isolierungskits in 310 μl des im Kit enthaltenen Elutionspuffers
(Endkonzentration 1 μg/μl, keinen Lysispuffer verwenden) und portionieren
Sie diese Carrier-RNA-Lösung auf eine Ihren Anforderungen entsprechende
Anzahl von Aliquots, die bei –15 bis –30°C gelagert werden müssen.
Vermeiden Sie das wiederholte Auftauen (> 2 x) eines Carrier-RNA-
Aliquots.
Vor Beginn jeder Aufreinigung muss ein Gemisch aus Lysispuffer und
Carrier-RNA gemäß folgendem Pipettierschema frisch hergestellt werden.
Anzahl der Proben 1 12
Puffer AVL 560 μl 6720 μl
Carrier-RNA (1 μg/μl) 5,6 μl 67,2 μl
Gesamtvolumen 565,6 μl 6787,2 μl
Volumen für die Aufreinigung 560 μl je 560 μl
Setzen Sie das frisch hergestellte Gemisch aus Lysispuffer und Carrier-RNA
sofort für die Aufreinigung ein. Eine Lagerung des Gemisches ist nicht
möglich.
14 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Protokoll 1: PCR
Wichtige Hinweise vor Beginn
Lesen Sie bitte vor dem Beginn des PCR Ansatzes “Wichtige Hinweise”,
Seite 13.
Nehmen Sie sich vor dem Protokollbeginn Zeit, sich mit dem
entsprechendem Applied Biosystems Real-Time PCR System vertraut zu
machen. Beachten sie das mit dem Gerät mitgelieferte Benutzerhandbuch.
Beachten Sie beim Ansetzen der PCR, dass pro PCR-Lauf mindestens eine
Positivkontrolle (BVDV 1 Control, BVDV 2 Control oder BVD Control) sowie
eine Negativkontrolle (Water, PCR grade) mitgeführt werden sollten.
Vor dem Testbeginn
Alle Reagenzien sollten vor Testbeginn vollständig bei Raumtemperatur
(15–25°C) aufgetaut, gut durchmischt (mehrfaches Auf- und Abpipettieren
oder kurzes Vortexen) und anschließend anzentrifugiert werden. Stellen Sie
danach alle Reagenzien in einen Kühlblock bei 2–8°C oder auf Eis.
Durchführung
1. Bereiten Sie den Master Mix entsprechend der Tabelle 1 in einem
Kühlblock bei 2–8°C oder auf Eis vor.
Das Reaktionsgemisch enthält alle für die PCR benötigten Komponente
außer der Probe. Das Volumen des Reaktionsgemisches sollte um
mindestens 10 % größer sein als das Volumen, das für alle
durchzuführenden PCR-Ansätze benötigt wird.
Tabelle 1. Ansetzen des Master Mixes.
Anzahl der Proben 1 12
BVDV Master 38 μl 456 μl
BVDV Mg-Sol 2 μl 24 μl
Gesamtvolumen 40 μl 480 μl
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 152. Pipettieren Sie in jedes Reaktionsgefäß bzw. in jede benötigte
Vertiefung der 96-well Reaktionsplatte 40 μl des Master Mixes.
Anschließend geben Sie 10 μl des Eluats aus der RNA-Isolierung
hinzu (siehe Tabelle 2). Entsprechend müssen als Positivkontrolle
10 μl von mindestens einer der Positivkontrollen (BVDV 1 Control,
BVDV 2 Control oder BDV Control) und als Negativkontrolle 10 μl
Wasser (Water, PCR grade) eingesetzt werden. Achten Sie darauf,
dass die beiden Lösungen durch mehrfaches Auf- und Abpipettieren
gut durchmischt werden.
Die externen Positivkontrollen (BVDV 1 Control, BVDV 2 Control oder BDV
Control) werden wie eine bereits aufgereinigte Probe behandelt und im
gleichen Volumen eingesetzt (10 μl). Sie dienen als positives Referenzsignal.
Tabelle 2. Ansetzen der PCR-Reaktion
Komponente Volumen
Master mix 40 μl
Probe 10 μl
Gesamtvolumen 50 μl*
* Falls Sie das Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (das in der Regel
30 μl des Reaktionsvolumens verwendet) benutzen, dann setzen Sie das
Gesamtvolumen (50 μl) ein.
3. Verschließen Sie die Reaktionsgefäße mit den dazugehörigen
Deckeln bzw. bei Benutzung einer 96-well Reaktionsplatte alternativ
mit Hilfe optischer Klebefolien. Um das Ansatzvolumen im Röhrchen-
bzw. Plattenboden zu sammeln, zentrifugieren Sie die
Reaktionsgefäße (in einem für PCR-Röhrchen vorgesehenen
Aufbewahrungsrack) in einer Mikrozentrifuge bzw. die 96-well
Reaktionsplatte in einer Zentrifuge mit 96-well-Plattenrotor (wie z.B.
das QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System) für 30 Sekunden
bei 1.780 x g (4.000 Upm). Lagern Sie die Reaktionsansätze bei 2–
8°C in einem Kühlblock oder auf Eis, bis das Thermocycler
programmiert ist (Schritte 4-9).
Sollten Sie nicht über eine Zentrifuge mit 96-well-Plattenrotor verfügen, so
achten Sie beim Ansetzen der PCR-Reaktionen bitte darauf, sowohl den
Master Mix als auch das Probenvolumen auf den Boden der
Reaktionsgefäße bzw. der Reaktionseinheiten (well) zu pipettieren.
16 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/20094. Wählen Sie “File/New”, um “New Document”-Fenster zu öffnen.
Stellen Sie für das neue Dokument die folgenden
Grundeinstellungen ein (Abbildung 1). Bestätigen Sie Ihre Eingaben
mit „OK“. Gehen Sie zum Feld “Select Detectors”.
Alle Einstellungen in den Schritten 4–9 beziehen sich auf die ABI PRISM
7500 SDS Software-Version 1.4. Die Angaben für andere Applied
Biosystems Real-Time PCR Systeme sind gleich, die Bildanzeige kann jedoch
etwas variieren. Einzelheiten entnehmen Sie bitte dem mit dem
Thermocycler mitgelieferten Benutzerhandbuch.
Zur besseren Übersicht sind die Einstellungen in den Abbildungen 1–5
durch schwarze Rahmen hervorgehoben.
Ein zuvor abgespeichertes SDS Template (*.sdt) steht Ihnen in der
„Template“-Liste oder durch Auswahl mittels „Browse“-Funktion zur
Verfügung. Siehe den Schritt 9.
Abbildung 1. Voreinstellungen bei der Erstellung eines neuen PCR-Laufs im
“New Document”-Dialogfenster
5. Wählen Sie “New Detector”, um das Fenster “New Detector” zu
öffnen. Geben Sie folgende Namen und Bezeichnungen ein und
wählen Sie die Reporter- und Quencherfarbstoffe (Abbildung 2).
Bestätigen Sie die Einstellungen mit “OK”. Markieren Sie die soeben
erstellten Detektoren im “New Document Wizard”-Fenster und
transferieren Sie jede Auswahl durch Anklicken der Option “Add”
zum “Detectors in Document” (Abbildung 3, Seite 19). Wählen Sie
(none) im “Passive Reference”-Dialogfeld (d.h. ROX abwählen).
Durch Anklicken der Schaltfläche “Finish” gelangen Sie zum “Well
Inspector”-Fenster.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 17A B
C
Abbildung 2. Erstellung der Detektoren im “New Detector”-Dialogfenster. A
Erstellung des BVDV 1 spezifischen Detektors. Wählen Sie FAM im “Reporter Dye”-Feld
und TAMRA im “Quencher Dye”-Feld. B Erstellung des BVDV 2 spezifischen Detektors.
Wählen Sie JOE im “Reporter Dye”-Feld und (none) im “Quencher Dye”-Feld.
C Erstellung des BDV spezifischen Detektors. Wählen Sie ROX im “Reporter Dye”-Feld und
(none) im “Quencher Dye”-Feld.
18 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Abbildung 3. Auswahl der Detektoren im “New Document Wizard“-Dialogfenster
6. Markieren Sie die für den Nachweis von BVDV-RNA belegten
Positionen der Platte. Ordnen Sie diesen Positionen die
ausgewählten Detektoren zu, indem Sie die “Use”-Option beider
Detektoren aktivieren (Abbildung 4). Bestätigen Sie die Einstellungen
mit “Finish“.
Abbildung 4. Zuordnung der notwendigen Informationen zu den
Plattenpositionen im “Well Inspector”-Dialogfenster
7. Wählen Sie “Plate” und tragen Sie für jede Position einen
einmaligen Namen unter “Sample Name” im Dialogfenster “Well
Inspector” ein. Geben Sie Unknown im Dialogfeld “Task” bei jeder
Position, die eine Probe enthält, und für jeden Detektor ein. Wählen
Sie NTC für jede Position, die eine Negativkontrolle enthält. Stellen
Sie sicher, dass bei “Passive Reference” (none) ausgewählt wurde.
Beachte: Die Ansätze mit identischem “Sample Name“ werden von der
Software als Replikat identifiziert und gemittelt.
Alternativ können die Namen und die “Task”-Felder nach dem Lauf
bestimmt werden.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 198. Wechseln Sie bitte zur „Instrument“-Ebene durch Anwählen von
“Instrument”. Geben Sie im Feld “Thermal Cycler Protocol”
entsprechend Abbildung 5 das Temperaturprofil ein. Stellen Sie das
Probenvolumen unter “Sample Volume” auf 50 μl und wählen Sie
die Option“ Standard 7500 ” im Dialogfeld “Run Mode”.
Die Voreinstellungen von “Auto Increment” und “Ramp Rate” bleiben
unverändert (“Auto Increment” 0.0°C, 0.0 Seconds).
Abbildung 5. Erstellung des Temperaturprofils im “Thermal Cycler Protocol”-Feld
auf der “Instrument“-Ebene.
9. Wechseln Sie zur „Setup“-Ebene durch Anwählen von “Setup”.
Wählen Sie “File/Save” und speichern Sie Ihre Einstellungen als SDS
Template (*.sdt) in dem Ordner Template directory unter C:\Program
Files\ABI PRISM 7500\Templates. Vor dem Starten des PCR-Laufs
achten Sie bitte darauf, diesen erneut als SDS Document (*.sds) durch
Auswählen von “File/Save As” abzuspeichern. Damit stellen Sie die
Speicherung der sich im Verlauf der PCR ansammelnden Daten
sicher.
Die Template-Datei ist direkt aus der ”Template” Drop-down-Liste in dem
“New Document”-Fenster anwählbar. In anderen Ordnern gesicherte
Vorlagen müssen über “Browse“ geöffnet werden.
20 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/200910. Legen Sie die Reaktionsgefäße oder die 96-well Reaktionsplatte
(Schritt 3) in den Thermocycler ein. Setzen Sie bei Nutzung von
Reaktionsgefäßen einen Halterahmen ein. Die 96-well
Reaktionsplatte muss mit einer Kompressionsmatte bedeckt werden.
Starten Sie den PCR-Lauf durch Anwählen von “Instrument/Start”
oder des Feldes “Start” auf der “Instrument”-Ebene.
Beachte: Setzen Sie bei Nutzung von optischen Reaktionsgefäßen in
Kombination mit optischen Deckeln bitte stets einen Halterahmen (96-Well
Tray/Retainer Set, Applied Biosystems) in das Instrument ein. Bei der
Benutzung des zweiteiligen Halterahmens ist es notwendig, die
Reaktionsgefäße beim Einsetzen und beim Herausnehmen zu öffnen. Zur
Vermeidung von dadurch bedingten Kontaminationen benutzen Sie bitte
ausschließlich den unteren Teil des Halterahmens.
Beachte: Die Benutzung von 96-well optischen Reaktionsplatten in
Kombination mit optischen Klebefolien erfordert das Auflegen einer
Kompressionsmatte (Optical Cover Compression Pads, Applied Biosystems).
11. Analysieren Sie die Daten entsprechend dem “Protokoll 2:
Auswertung”, Seite 22.
Beachte: Die Analyse muss ohne der ROX-Kompensation erfolgen.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 21Protokoll 2: Auswertung
Wichtige Hinweise vor Beginn
Lesen Sie bitte vor dem Beginn des Verfahrens “Wichtige Hinweise”, Seite
13.
Nehmen Sie sich vor dem Protokollbeginn Zeit, sich mit dem
entsprechendem Applied Biosystems Real-Time PCR System vertraut zu
machen. Beachten sie das mit dem Gerät mitgelieferte Benutzerhandbuch.
Die Analyse muss ohne der ROX-Kompensation erfolgen.
Falls als Ausgangsmaterial eine positive Probe verwendet wird (siehe
“Einleitung”, Seite 9), erscheint in dem FAM-Kanal ein Signal unabhängig
davon, ob BVDV 1, BVDV 2 oder das Border-Disease-Virus detektiert wird.
Aufgrund der Interferenzen unter den 3 Kanälen wird eine
Grenzwertfestlegung für die drei Kanäle empfohlen, um sicherzustellen,
dass die Probe eindeutig als BVDV 1, BVDV 2 oder BDV positiv identifiziert
wird. Wird das Biosystems 7500 Real-Time PCR System verwendet, sollte
der Grenzwert für den FAM- und JOE-Kanal bei 50.000 und für den ROX-
Kanal bei 40.000 liegen. Signale unter diesen Grenzwerten können als
negativ angesehen werden. Dies wird deutlich, vergleicht man die Signale
mit den echt positiven Signalen der Positivkontrollen, die mit dem
jeweiligen Kanal verbunden sind (BVDV 1 Control für FAM, BVDV 2 Control
für JOE und BDV Control für ROX; siehe z.B. Abbildung 9, Seite 17).
Durchführung
1. Eine vorliegende, gültige Kalibrierung der Farbstoffe (Pure Spectra
Component File) und des Hintergrundes (Background Component
File) ist bei Inbetriebnahme der Geräte unbedingt erforderlich. Die
bei der Auswertung eines PCR-Laufs genutzten Kalibrierungsdateien
werden beim Abspeichern automatisch mitgesichert. Sollten keine
Kalibrierungsdateien installiert sein, erstellen Sie diese Dateien bitte
unter Beachtung der Anleitung in dem mit dem Thermocycler
mitgelieferten Benutzerhandbuch.
Sämtliche die Messung beeinflussenden gerätebedingten Störsignale
werden von der „Sequence Detection Software“ des Applied Biosystems
Real-Time PCR Systems mit Hilfe des Background Component File
eliminiert.
Zudem treten bei Multicolor-Analysen Interferenzen zwischen den
Emissionsspektren der einzelnen Fluoreszenzfarbstoffe auf. Die Software des
Applied Biosystems Real-Time PCR Systems kompensiert diese Interferenzen
durch Verrechnung mit den im Pure Spectra Component File gespeicherten
Spektraldaten der einzelnen Farbstoffe. Die Zuordnung der im Verlauf der
22 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009PCR über das gesamte messbare Spektrum gesammelten Fluoreszenzdaten
zu den programmierten Detektoren nimmt die Software ebenfalls mit Hilfe
dieser Datei vor. Die auf diese Weise normalisierten Signale können mit
Hilfe des “Amplification Plot” ausgewertet werden.
Beachte: Sollten Sie mehr als ein PCR-System in den gleichen PCR-Lauf
integriert haben (Temperaturprofil beachten), so analysieren Sie diese
Testsysteme bitte getrennt voneinander. Proben mit identischer Bezeichnung
(Sample Name) und Detektorzuweisung werden von der “Sequence
Detection Software” automatisch als Replikate identifiziert und ihre Werte
gemittelt.
2. Folgende Ergebnisse (2a, 2b, 2c oder 2d) können auftreten.
Prüfen Sie in allen 3 Kanälen (FAM, JOE, ROX) jede Reaktionseinheit, die
eine Probe enthält.
Die möglichen Ergebnisse sind in der Tabelle 3 zusammengefasst.
2a. Ein FAM-Fluoreszenzsignal wird detektiert. In den anderen Kanälen
(JOE and ROX) ist kein Signal (Abbildung 6, Seite 25).
Das Ergebnis der Analyse ist positiv für BVDV1 oder BDV4 oder
atypische Pestiviren: Die Probe enthält BVDV-1, BDV4 oder atypische
Pestiren RNA.
2b. Ein FAM- und JOE-Fluoreszenzsignal werden detektiert. Im Kanal
ROX ist kein Signal (Abbildung 7; Seite 26).
Das Ergebnis der Analyse ist positiv BVDV 2: Die Probe enthält
BVDV-2 RNA.
2c. Ein FAM- und ROX-Fluoreszenzsignal werden detektiert. Im Kanal
JOE ist kein Signal (Abbildung 8, Seite 27).
Das Ergebnis der Analyse ist BDV positiv: die Probe enthält BDV
RNA.
2d. Es wird kein Fluoreszenzsignal detektiert.
Eine Aussage ist nicht möglich. In der Probe kann weder BVDV- noch
BDV-RNA nachgewiesen werden. Allerdings kann eine Inhibition
nicht ausgeschlossen werden.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 23Tabelle 3. Zusammenfassung der Ergebnisse
Kanal
FAM JOE ROX Ergebnis
+ – – BVDV1oder BDV 4 oder
atypische Pestiviren (Abb. 6)
+ + – BVDV 2 (Abb. 7)
+ – + BDV 1-3 (Abb. 8)
– – – Kein Ergebnis
24 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009A
B
C
Abbildung 6. Nachweis der Positivkontrolle BVDV 1 auf dem Applied Biosystems 7500
Real-Time PCR System. Die Probe weist auf: A Anwesenheit eines Fluoreszenzsignals im
FAM-Kanal mit B Abwesenheit eines Signals im JOE-Kanal und C Abwesenheit eines
Signals im ROX-Kanal. Diese Kombination zeigt, dass diese Probe BVDV-1 positiv ist.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 25A
B
C
Abbildung 7. Nachweis der Positivkontrolle BVDV 2 auf dem Applied Biosystems 7500
Real-Time PCR System. Die Probe weist auf: A Anwesenheit eines Fluoreszenzsignals im
FAM-Kanal und B Anwesenheit eines Signals im JOE-Kanal mit C Abwesenheit eines
Signals im ROX-Kanal. Diese Kombination zeigt, dass die Probe BVDV 2 positiv ist.
26 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009A
B
C
Abbildung 8. Nachweis der Positivkontrolle BDV auf dem Applied Biosystems 7500
Real-Time PCR System. Die Probe weist auf: A Anwesenheit eines Fluoreszenzsignals im
FAM-Kanal mit B Abwesenheit eines Signals im JOE-Kanal und C Anwesenheit eines Signals
im ROX-Kanal. Diese Kombination zeigt, dass die Probe BDV positiv ist.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 27A
B
Abbildung 9. Interferenz der Fluoreszenzen. “Positive” Signale, die unter dem Grenzwert
liegen, sollten nicht beachtet werden. A Eine BDV positive Probe könnte ein solches Signal im
JOE-Kanal aufweisen. Dieses liegt jedoch unter dem empfohlenen Grenzwert (50.000 unter
Verwendung des Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems) und sollte ausgeschlossen
werden. B Im Vergleich weist die BVDV 2 Positivkontrolle ein starkes Signal im JOE-Kanal,
das deutlich über den Grenzwert liegt. Bitte beachten Sie die unterschiedlichen Y-Achsen.
28 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Troubleshooting
In diesem Kapitel finden Sie nützliche Hinweise, die Ihnen bei der Lösung
eventuell auftretender Probleme helfen können. Weitere Informationen können
Sie den häufig gestellten Fragen auf www.qiagen.com/FAQ/FAQList.aspx
entnehmen. Außerdem beantwortet das Team vom Technischen Service bei
QIAGEN gerne Ihre Fragen zu den Angaben und zum Protokoll in diesem
Handbuch bzw. auch zu molekularbiologischen Anwendungen allgemein
(Möglichkeiten der Kontaktaufnahme siehe die Rückseite oder
www.qiagen.com).
Kommentare und Vorschläge
Kein FAM-, JOE- oder ROX-Fluoreszenzsignal bei den Positivkontrollen
(BVDV 1 Control, BVDV 2 Control und BVD Control)
a) Die Wahl des Wählen Sie für die Datenanalyse den
Detektorfarbstoffes bei Detektorfarbstoff FAM für die analytische BVDV 1
der PCR-Datenanalyse RT-PCR, den Detektorfarbstoff JOE für die BVDV
entspricht nicht den 2 RT-PCR und den Detektorfarbstoff ROX für die
Protokollangaben BDV RT-PCR.
b) Die Programmierung Vergleichen Sie das Temperaturprofil mit den
des Temperaturprofils Protokollangaben (siehe “Protokoll 1: PCR”, Seite
ist fehlerhaft 15).
c) Fehlerhaftes Überprüfen Sie Ihre Arbeitsschritte (siehe
Zusammenstellen der “Protokoll 1: PCR”, Seite 15).
PCR-Reaktion
d) Fehlerhafte Bitte überprüfen Sie sowohl
Lagerungsbedingungen Lagerungsbedingungen als auch
für eine oder mehrere Haltbarkeitsdatum (siehe Kit-Etikett) der
Kit-Komponenten oder Reagenzien und verwenden Sie ggf. ein neues
das Haltbarkeitsdatum Kit. Stellen Sie sicher, dass die
des Kits wurde Lagerbedingungen für die Kit-Komponente den
überschritten in “Fehler! Verweisquelle konnte nicht gefunden
werden.” (Seite Fehler! Textmarke nicht definiert.)
angeführten Vorschriften entsprechen.
Schwaches oder ausbleibendes Signal der positiven Proben bei
gleichzeitiger Abwesenheit eines FAM-, JOE- und ROX-
Fluoreszenzsignals der Positivkontrollen
a) Die PCR-Bedingungen Überprüfen Sie die PCR-Bedingungen (siehe
entsprechen nicht dem “Protokoll 1: PCR”, Seite 15).
Protokoll
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 29Kommentare und Vorschläge
b) Die PCR wurde Stellen Sie sicher, dass Sie ein von uns
inhibiert empfohlenes Aufreinigungsverfahren benutzen
(siehe “Isolierung viraler RNA”, Seite 13) und
halten Sie sich exakt an die Herstellervorschrift.
Vergewissern Sie sich, dass bei der RNA-
Aufreinigung der zusätzliche empfohlene
Zentrifugationsschritt zur vollständigen
Entfernung von Ethanol-Resten vor der Elution
durchgeführt wurde (siehe “ Isolierung viraler
RNA”, Seite 13).
c) Fehlerhafte Bitte überprüfen Sie sowohl
Lagerungsbedingungen Lagerungsbedingungen als auch
für eine oder mehrere Haltbarkeitsdatum (siehe Kit-Etikett) der
Kit-Komponenten oder Reagenzien und verwenden Sie ggf. ein neues
das Haltbarkeitsdatum Kit. Stellen Sie sicher, dass die
des Kits wurde Lagerbedingungen für die Kit-Komponente den
überschritten in “Fehler! Verweisquelle konnte nicht gefunden
werden.” (Seite Fehler! Textmarke nicht definiert.)
angeführten Vorschriften entsprechen.
Ein FAM-, JOE oder ROX-Fluoreszenzsignal der analytischen RT-PCR
bei den Negativkontrollen
a) Es liegt eine Wiederholen Sie die PCR mit noch unbenutzten
Kontamination Reagenzien in Replikaten.
während der Verschließen Sie die einzelnen PCR-Gefäße nach
Vorbereitung der PCR Möglichkeit jeweils unmittelbar nach Zugabe der
vor zu untersuchenden Probe.
Pipettieren Sie die Positivkontrollen grundsätzlich
zuletzt.
Stellen Sie sicher, dass Arbeitsflächen und -
geräte regelmäßig dekontaminiert werden.
b) Es liegt eine Wiederholen Sie die Aufreinigung und PCR der
aufreinigungsbedingte zu untersuchenden Proben unter Verwendung
Kontamination vor noch unbenutzter Reagenzien.
Stellen Sie sicher, dass Arbeitsflächen und -
geräte regelmäßig dekontaminiert werden.
30 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Kommentare und Vorschläge
Starkes Signal in einem oder zwei Kanälen, aber ein schwaches
Signals in dem(n) anderen
Fluoreszenz-Interferenz Verwenden Sie die empfohlenen Grenzwerte.
Vergleichen Sie das schwache Signal mit den
Signalen der Positivkontrollen, die mit dem Kanal
verbunden sind (siehe Abbildung 9, Seite 28.
Schliessen Sie die Signale aus, die unter dem
Grenzwert liegen.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 31Bestellinformationen
Produkt Inhalt Kat. Nr.
cador BVDV Type 1/2 Für 24 Reaktionen: BVDV Master, 280363
RT-PCR Kit (24) BVDV 1 Control, BVDV 2 Control, BDV
Control, BVDV Mg-Sol, Water (PCR
Grade)
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BVDV IC, BVDV Mg-Sol, Water (PCR
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aus zellfreien Körperflüssigkeiten
QIAamp Viral RNA Für 50 RNA-Präparationen: 50 52904
Mini Kit (50) QIAamp Mini-Spinsäulen, Carrier-
RNA, Collection Tubes (2 ml), RNase-
freie Puffer
QIAamp Viral RNA Für 250 RNA-Präparationen: 250 52906
Mini Kit (250) QIAamp Mini-Spinsäulen, Carrier-
RNA, Collection Tubes (2 ml), RNase-
freie Puffer
RNeasy Mini Kit — zur Reinigung der Gesamt-RNA aus
Tierzellen oder -gewebe
RNeasy Mini Kit (50) Für 50 RNA-Präparationen: 50 74104
RNeasy Mini-Spinsäulen, Collection
Tubes (1.5 ml and 2 ml), RNase-freie
Reagenzien und Puffer
RNeasy Mini Kit (250) For 250 RNA-Präparationen: 250 74106
RNeasy Mini-Spinsäulen, Collection
Tubes (1,5 ml und 2 ml), RNase-freie
Reagenzien und Puffer
RNeasy 96 Kit — zur Hochdurchsatz-Reinigung der
Gesamt-RNA aus Tierzellen
32 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Produkt Inhalt Kat. Nr.
RNeasy 96 Kit (4) Für 4 x 96 RNA-Präparationen: 4 74181
RNeasy 96 Plates, Elution Microtubes
CL, Caps, S-Blocks, AirPore Tape
Sheets, ), RNase-freie Reagenzien und
Puffer
RNeasy 96 Kit (12) Für 12 x 96 RNA-Präparationen: 12 74182
RNeasy 96 Plates, Elution Microtubes
CL, Caps, S-Blocks, AirPore Tape
Sheets, RNase-freie Reagenzien und
Puffer
RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit — zur Reinigung der
Gesamt-RNA aus faserreichem Gewebe
RNeasy Fibrous Tissue Für 50 RNA-Präparationen: 50 74704
Mini Kit (50) RNeasy Mini-Spinsäulen, Collection
Tubes (1,5 ml und 2 ml), Proteinase K,
RNase-freie DNase I, RNase-freie
Reagenzien und Puffer
QIAshredder Homogenizer — für einfache und schnelle
Homogenisierung von Zell- und Gewebelysaten
QIAshredder (50) 50 Einweg-Homogenizatoren für den 79654
Gebrauch bei Mini-Präparationen von
Nukleinsäure, Deckel
QIAshredder (250) 250 Einweg-Homogenizatoren für den 79656
Gebrauch bei Mini-Präparationen von
Nukleinsäure, Deckel
QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System — für
Aufbereitung von 2 QIAGEN 96-well-Platten
Zentrifuge 4-15C Universell einsetzbare Laborzentrifuge Bitte
mit bürstenlosem Antrieb anfragen
Zentrifuge 4K15C Universell einsetzbare Kühl- Bitte
Laborzentrifuge mit bürstenlosem anfragen
Antrieb
Plattenrotor 2 x 96 Rotor für 2 QIAGEN 96-well-Platten, 81031
für Verwendung mit QIAGEN
Zentrifugen
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 33Produkt Inhalt Kat. Nr.
BioRobot Universal System — für voll-automatisierte
Anwendungen im 96-well-Format mit mittlerem bis
hohem Durchsatz
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System computergesteuerte Vakuumpumpe,
Computer, QIAsoft 5 Operating
System, Installation, einjährige
Garantie für Bauteile und Arbeitskräfte
* Vereinbarungen über umfassenden Service sind erhältlich; bitte informieren Sie sich.
Der QIAamp Viral RNA Kit ist für den allgemeinen Laborgebrauch. Die
Produktangaben oder Produktdarstellungen sind nicht dazu vorgesehen,
Informationen für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Erkrankung
zu liefern.
Der RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit ist nur für Forschungszwecke. Das Produkt
ist nicht dafür vorgesehen, Informationen zu der Diagnose, Vorsorge oder
Behandlung einer Krankheit zu liefern.
Das BioRobot Universal System ist nur für Forschungszwecke vorgesehen. Das
Produkt ist nicht dafür vorgesehen, Informationen zu der Diagnose, Vorsorge
oder Behandlung einer Krankheit zu liefern.
34 Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009Trademarks: QIAGEN®, QIAamp®, BioRobot®-, RNeasy® (QIAGEN Group); ABI PRISM®, FAM™, MicroAmp®, ROX™, TAMRA™, VIC® (Applera
Corporation or its subsidiaries); GeneAmp® (Roche Molecular Systems, Inc.).
© 2009 QIAGEN, alle Rechte vorbehalten.
The purchase of this product allows the purchaser to use it for amplification and detection of nucleic acid sequences for providing veterinary in vitro
diagnostics. No general patent or other license of any kind other than this specific right of use from purchase is granted hereby.
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Use of this product signifies the agreement of any purchaser or user of the cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit to the following terms:
1. The cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit may be used solely in accordance with the cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Handbook and for use with
components contained in the Kit only. QIAGEN grants no license under any of its intellectual property to use or incorporate the enclosed
components of this Kit with any components not included within this Kit except as described in the cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Handbook and
additional protocols available at www.qiagen.com .
2. Other than expressly stated licenses, QIAGEN makes no warranty that this Kit and/or its use(s) do not infringe the rights of third-parties.
3. This Kit and its components are licensed for one-time use and may not be reused, refurbished, or resold.
4. QIAGEN specifically disclaims any other licenses, expressed or implied other than those expressly stated.
5. The purchaser and user of the Kit agree not to take or permit anyone else to take any steps that could lead to or facilitate any acts prohibited
above. QIAGEN may enforce the prohibitions of this Limited License Agreement in any Court, and shall recover all its investigative and Court
costs, including attorney fees, in any action to enforce this Limited License Agreement or any of its intellectual property rights relating to the Kit
and/or its components.
For updated license terms, see www.qiagen.com .
© 2009 QIAGEN, all rights reserved.
Gebrauchsinformation cador BVDV Type 1/2 RT-PCR Kit 01/2009 35www.qiagen.com Australia Orders 03-9840-9800 Fax 03-9840-9888 Technical 1-800-243-066 Austria Orders 0800/28-10-10 Fax 0800/28-10-19 Technical 0800/28-10-11 Belgium Orders 0800-79612 Fax 0800-79611 Technical 0800-79556 Canada Orders 800-572-9613 Fax 800-713-5951 Technical 800-DNA-PREP (800-362-7737) China Orders 021-51345678 Fax 021-51342500 Technical 021-51345678 Denmark Orders 80-885945 Fax 80-885944 Technical 80-885942 Finland Orders 0800-914416 Fax 0800-914415 Technical 0800-914413 France Orders 01-60-920-926 Fax 01-60-920-925 Technical 01-60-920-930 Offers 01-60-920-928 Germany Orders 02103-29-12000 Fax 02103-29-22000 Technical 02103-29-12400 Hong Kong Orders 800 933 965 Fax 800 930 439 Technical 800 930 425 Ireland Orders 1800-555-049 Fax 1800-555-048 Technical 1800-555-061 Italy Orders 02-33430411 Fax 02-33430426 Technical 800-787980 Japan Telephone 03-5547-0811 Fax 03-5547-0818 Technical 03-5547-0811 Luxembourg Orders 8002-2076 Fax 8002-2073 Technical 8002-2067 The Netherlands Orders 0800-0229592 Fax 0800-0229593 Technical 0800-0229602 Norway Orders 800-18859 Fax 800-18817 Technical 800-18712 Singapore Orders 65-67775366 Fax 65-67785177 Technical 65-67775366 South Korea Orders 1544 7145 Fax 1544 7146 Technical 1544 7145 Sweden Orders 020-790282 Fax 020-790582 Technical 020-798328 Switzerland Orders 055-254-22-11 Fax 055-254-22-13 Technical 055-254-22-12 UK Orders 01293-422-911 Fax 01293-422-922 Technical 01293-422-999 USA Orders 800-426-8157 Fax 800-718-2056 Technical 800-DNA-PREP (800-362-7737) 1056082 01/2009 Sample & Assay Technologies
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