Spurensuche - Nachweis versteckter Allergene - Das Unsichtbare sichtbar machen mittels Reveal 3-D Allergen Testen

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Dr. rer. nat. Rolf Steinmüller

Spurensuche – Nachweis
versteckter Allergene
Das Unsichtbare sichtbar machen mittels Reveal® 3-D Allergen Testen

Das Thema Lebensmittelall-            Aus diesem Grunde standen ent-           Nüsse dennoch geringe Nussspu-         ranten (Auditierung), den Einsatz
ergie und das Vorhandensein           sprechende Nachweisverfahren lan-        renanteile enthalten. Was nicht        von zertifizierten Rohstoffen, die
von Allergenen in Lebensmit-          ge Zeit im Focus der Lebensmittel-       nach viel klingt kann für Allergi-     Benutzung von separaten und sau-
teln haben aktuell vermehrt           analytik. Aber manchmal ist es das       ker schwerwiegende Folgen ha-          beren Transportbehältnissen, die
an Aufmerksamkeit und Bri-            Nahrungsmittel selbst, oder dessen       ben. Ihr Immunsystem wehrt sich        räumliche Trennung der Produkti-
sanz gewonnen. Auch wenn              Bestandteile, das den Verbraucher        gegen an sich harmlose Substan-        onslinien sowie auch die Durchfüh-
nicht alles was kribbelt und          gefährdet. Lebensmittelallergien sind    zen wie Proteine, und zwar schon       rung adäquater Reinigungsschritte.
kratzt gleich eine Allergie ist.      auf dem Vormarsch – vornehmlich          bei winzigen Mengen. Die Reak-         Nach jeder Produktion bzw. Produk-
Wer aber allergisch auf be-           in der öffentlichen Wahrnehmung.         tionen reichen dabei von Juckreiz      tionsfolge von allergenhaltigen Pro-
stimmte Lebensmittel reagiert,        Einigkeit besteht jedoch darin, dass     und Hautrötungen bis zum zuwei-        dukten muss eine angemessene Rei-
kommt nicht umhin, die ent-           die einzige Möglichkeit für einen        len tödlichen Atem- oder Kreislauf-    nigung durchgeführt werden, um
sprechenden Produkte zu mei-          Allergiker in der Vermeidung aller       stillstand.                            eine Deklaration des Endproduktes
den. Durch die Änderung in der        Nahrungsmittel liegt, die Spuren                                                mit dem Hinweis auf mögliche Al-
EU-Gesetzgebung und Anfor-            der Allergie auslösenden Lebens-         Allergenmanagement                     lergene zu vermeiden.
derungen internationaler Stan-        mittel enthalten können.
dards sehen sich Lebensmittel-                                                 Generell gelangen Allergene unver-     Hygiene- oder Reinigungskontrolle
produzenten vor völlig neue           Folgerichtig werden potente analy-       meidbar oder unbeabsichtigt wäh-       vor und nach Reinigungsvorgängen
Aufgaben gestellt: Die rich-          tische Methoden benötigt, um die         rend des Herstellungsprozesses an-     gehören zu den zwingend notwen-
tige Produktkennzeichnung             oft nur in Spuren vorkommenden           lagenbedingt oder aber handlungs-      digen Maßnahmen in der Be- und
zu gewährleisten und Kreuz-           versteckten Proteine mit allergenem      bedingt in das Lebensmittel. Dabei     Verarbeitung von Lebensmitteln.
kontaminationen im Produk-            Potential in Lebensmitteln sicher und    hängt die Gefahr, dass ein Lebens-     Durch derartige Maßnahmen wird
tionsprozess sicher zu erken-         zuverlässig nachweisen zu können.        mittel versteckte Allergene enthal-    nicht nur die Gefahr der Rückstands-
nen, ist zwingender Bestand-          Gefragt sind namentlich schnelle         ten kann, erheblich von der Art        Verschleppung von Keimen (Patho-
teil der Qualitätssicherung und       und leicht handhabbare diagnos-          des Produktes und dem Herstel-         gen-Problematik), Bakterien-Toxi-
Produkthaftung.                       tische Teste, um Kontaminationen zu      lungsprozess ab. In vielen Fällen      nen, Produktresten (Verfälschung)
                                      vermeiden und Lebensmittel ohne          könnten Hersteller bei einem ent-      und anderen unerwünschten Sub-
Vor dem Hintergrund, dass             großen Laboraufwand zu testen.           sprechenden Allergenmanagement         stanzen in nachfolgenden Produkt-
versteckte, nicht deklarierte                                                  erheblich geringere Kontaminations-    Chargen reduziert, sondern auch
Inhaltsstoffe in Lebensmitteln        Allergikertaugliche                      mengen zusichern oder sogar den        der Eintrag von Allergen-haltigen
für Allergiker ein großes ge-         Lebensmittel                             Idealfall „frei von“ erreichen. Un-    Bestandteilen. Für verantwortungs-
sundheitliches Problem dar-                                                    absichtliche Kontaminationen müs-      bewusste Produzenten ist die Inte-
stellen, zielt ein Allergenma-        „Kann Spuren von Nüssen enthal-          sen durch entsprechende Maßnah-        gration der Allergenproblematik
nagement auf die Verringe-            ten“ dieser oder ähnliche Warn-          men ausgeschlossen werden. Mit         innerhalb von HACCP-Konzepten
rung unbeabsichtigter ver-            hinweise auf Lebensmittelverpa-          Hilfe entsprechender Lebensmittel-     aufgrund der hohen Brisanz un-
steckter Inhaltsstoffe durch          ckungen werden all zu oft inflati-       managementsysteme können Be-           abdingbar. Die übliche industriel-
eine Verbesserung der Abläufe.        onär benutzt. Schränken derartige        triebe den Schutz von Leben und        le Reinigungspraxis ist allzu häufig
Dies beinhaltet eine Überwa-          pauschale Hinweise doch Allergi-         Gesundheit zum Gegenstand der          nicht effizient genug, um empfind-
chung der Ausgangsmateria-            ker unnötig ein und beeinträchti-        Unternehmenspolitik und damit          liche Allergiker zu schützen.
lien, eine Überwachung der            gen in einem nicht unerheblichen         zum konkreten Gestaltungs- und
Herstellungsprozesse sowie            Maße deren Lebensqualität.               Entwicklungsziel ihrer Organisati-     Letztlich bleibt als Maßnahme, um
die Überprüfung der Reini-                                                     on machen.                             eine Verunreinigung mit allergenen
gungseffizienz.                       Nichtsdestoweniger stellt die Herstel-                                          Bestandteilen auszuschließen oder
                                      lung allergietauglicher Lebensmittel     Verringerung des                       doch zumindest zu minimieren bzw.
Einleitung                            die Unternehmen häufig vor große         Kontaminationsrisikos                  zu überwachen, nur die Prüfung auf
                                      Probleme. Vornehmlich kleinere Fir-                                             derartige Bestandteile. Eine umfas-
Pestizidrückstände, Gifte und Keime   men stellen unterschiedlichste Pro-      Maßnahmen zur Verringerung des         sende Qualitätssicherung in der
werden allzu oft mit Gesundheits-     dukte auf ihren Produktionsanlagen       Kontaminationsrisikos beinhalten ne-   Lebensmittelindustrie, aber auch
schäden in Verbindung gebracht,       her. Aus diesem Grund kann bei-          ben der Prüfung von Herstellungs-      im Rahmen der allgemeinen Pro-
wenn es um unsere Ernährung geht.     spielsweise die Schokolade ohne          methoden bei den Rohstoffliefe-        dukthaftung, bedingt daher Ver-

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fahren, mit denen versteckte Aller-      Testverfahren                          Enzymimmunoassay (ELISA) unter            gen Verwandten zu differenzieren.
gene in Lebensmitteln und in Um-                                                den immunchemischen Methoden              Beispielsweise umfasst die Familie
weltproben zuverlässig und präzise       Wie kann die Lebensmittelindus-        und zur sequenzspezifischen Nu-           der Apiaceen sowohl die allergene
identifiziert und quantifiziert wer-     trie konkret sowohl die Einhaltung     kleinsäureamplifikationstechnik in        Spezies Sellerie als auch nicht al-
den können.                              der neuen Kennzeichnungspflicht        Echtzeit (real-time PCR) unter den        lergene Spezies wie Petersilie oder
                                         als auch ungewollte Einträge all-      molekularbiologischen Techniken.          Kümmel. Ebenfalls eng verwandt
Spurenanalytik – Allergen-               ergieauslösender Lebensmittelbe-                                                 sind die beiden kennzeichnungs-
Detektion in Lebensmitteln               standteile während der Produkti-       Neben dem Enzymimmunoassay                pflichtigen Schalenfrüchte Walnuss
                                         on überprüfen?                         (z. B. ELISA) und der Polymerase-         und Pekannuss, die es analytisch zu
Die Notwendigkeit, allergene Zu-                                                Kettenreaktion (PCR) wurden alter-        unterscheiden gilt.
taten in Lebensmitteln nachzuwei-        In den letzten Jahren wurde eine       native Methoden, wie etwa Biosen-
sen, ergibt sich daraus, dass sie eine   Vielzahl von Testverfahren zum         soren oder massenspektrometrische         Überdies ist zu berücksichtigen, dass
nicht zu unterschätzende Gefahr für      Nachweis von allergenen Lebens-        Verfahren entwickelt. Ihr Entwick-        es sich bei den zu untersuchenden
allergische Konsumenten darstellen       mitteln entwickelt. Unter der Viel-    lungsstand und Praktikabilität liegt      Lebensmitteln um Naturprodukte
und die Nachweisbarkeit die Vo-          zahl möglicher Nachweisverfahren       jedoch deutlich hinter den ELISA-         mit natürlich bedingten und verar-
raussetzung dafür ist, diese Konsu-      für allergene Lebensmittelbestand-     oder PCR-Anwendungen.                     beitungsbedingten Schwankungen
menten davor warnen und schützen         teile haben sich für routinemäßige                                               in der Zusammensetzung handelt.
zu können. Darüber hinaus kann im        Nahrungsmittelprüfung immunolo-        Test-Anforderungen                        Ein wesentliches Kriterium für die
Rahmen der Lebensmittelüberwa-           gische und molekularbiologische                                                  Beurteilung derartiger Tests ist die
chung nur durch geeignete Nach-          Analysentechniken als die Metho-       Unabhängig von der eingesetzten           Sensitivität. Schließlich vermögen
weismethoden die gesetzlich fest-        den der Wahl erwiesen. Dabei ba-       Methode sollten die Nachweisver-          bereits kleinste Mengen eines Al-
gelegte Kennzeichnung allergener         sieren die immunologischen Verfah-     fahren in erster Linie spezifisch für     lergens allergische Reaktionen aus-
Nahrungsmittelbestandteile über-         ren auf dem Nachweis von spezi-        das gesuchte Lebensmittel sein.           zulösen. Da diese bereits bei weni-
prüft werden. Ferner ist auch der        fischen Proteinen und die moleku-      Schließlich gilt die unglaubliche         gen ppm liegen können, sind Nach-
Nachweis unbeabsichtigter Einträ-        larbiologischen Methoden auf der       Vielfalt der Lebensmittelallergene        weisgrenzen in diesen Bereich not-
ge in der Lebensmittelproduktion         Detektion von charakteristischen Nu-   als eine der größten Herausforde-         wendig.
für den Produzenten von besonde-         kleinsäuresequenzen. In den aller-     rungen für die Analytiker. Die Vielfalt
rem Interesse. Aus diesem Grunde         meisten Fällen wird nicht das aus-     der Allergene ergibt sich nicht nur,      Lebensmittel stellen darüber hinaus
begrenzt sich die Allergenanalytik       lösende allergene Protein oder die     weil so viele einzelne Lebensmittel       ein wahres Sammelsurium an un-
nicht nur auf aufwendige Labor-          kodierende Nukleinsäure detektiert,    entsprechende Inhaltsstoffe aufwei-       terschiedlichen Substanzen dar und
methoden, sondern umfasst auch           sondern ein für das jeweilige Nah-     sen, sondern auch, weil ein Lebens-       setzen sich, besonders im Falle ver-
so genannte „Schnelltests“, die ein-     rungsmittel charakteristisches Pro-    mittel mehrere Allergene aufweisen        arbeiteter Lebensmittel, aus einer
fach in der Handhabung sind und          tein bzw. dessen kodierende Nukle-     kann. Zusätzlich müssen derartige         Vielzahl unterschiedlichster Zutaten
ein breites Anwendungsspektrum           insäure. Gegenwärtig besteht ein       Nachweismethoden in der Lage              zusammen. Daher sollten derartige
aufweisen.                               klarer Trend hin zum Festphasen-       sein zwischen phylogenetisch en-          Tests in allen relevanten Matrices,

Abb. 1: Testprinzip der Veratox® Allergen ELISA Teste. Bei den Veratox®-Allergen Testen handelt es sich um Sandwich-ELISAs, bei welchen die
Vertiefungen der Mikrotiterstreifen mit spezifischen Fänger-Antikörpern gegen das gesuchte Protein beschichtet sind. Die in der Probe bzw.
im Standard enthaltenen Antigene binden sich während der 10minütigen Inkubation an die gebundenen Antikörper. Alle nicht gebundenen
Bestandteile werden durch sorgfältiges Waschen entfernt. Anschließend werden mit Peroxidase (HRP) konjugierte Antikörper (zweiter Anti-
körper bzw. Detektions-Antikörper) hinzugegeben, die sich an die gebundenen Antigene anlagern. Nach einer weiteren Inkubation von 10
Minuten wird im anschließenden Waschvorgang überschüssiges Konjugat entfernt. Durch Zugabe des Substrats (TMB) entsteht eine blaue
Farbreaktion, deren Intensität proportional zur Toxinmenge ist, d.h. je stärker die Färbung, desto höher ist die Konzentration des gesuchten
Antigens. Die Auswertung erfolgt nach Zugabe der Stopplösung mit Hilfe eines Mikrostreifen-Fotometers bei einer Wellenlänge von 650nm.
Der tatsächliche Gehalt der Probe ergibt sich direkt aus der Standardkurve. Der Test lässt sich jedoch alternativ auch qualitativ durchführen.
Die Auswertung kann in diesem Falle visuell erfolgen.

1 2011                                                                                                                                                      5
in denen das gesuchte allergene           ELISA                                   Der sogenannte Fängerantikörper           von Produktionsanlagen nach er-
Lebensmittel versteckt vorhanden                                                  wird auf der Festphase gebunden           folgter Reinigung. Diese Tests er-
sein könnte, anwendbar sein. Zu-          Aufgrund der einfachen Handha-          und „fängt“ den Analyten aus der          möglichen eine laborunabhängige
sätzlich sollten auch für thermisch       bung und der Möglichkeit, in re-        Probe. Der enzymmarkierte De-             Aussage über den Allergengehalt
oder auf andere Weise verarbeite-         lativ kurzer Zeit viele Proben paral-   tektionsantikörper bindet sich an-        über einem bestimmten Schwel-
te Bestandteile, beispielsweise für       lel unter zeitgleichen Bedingungen      schließend an den gebundenen              lenwert und können somit eine
rohe und geröstete Nüsse, die er-         und mit relativ geringen Mengen         Analyten. Je mehr Analyt gebun-           ideale Anwendung in der Überprü-
forderlichen Spezifitäten und Sen-        an Verbrauchsmitteln analysieren zu     den wird, umso mehr Detektions-           fung einer Kontamination mit All-
sitivitäten erzielt werden.               können, einhergehend mit einem          antikörper und somit Enzym wird           ergenen finden. Derartige Verfah-
                                          hohen Automatisierungspotenzi-          gebunden, wodurch das Signal di-          ren werden in erster Linie als qua-
Weitere Anforderungen an Nach-            al, haben sich ELISA-Verfahren in       rekt proportional zur Analytkonzen-       litative Teste eingesetzt.
weismethoden für Allergene sind           der Praxis durchgesetzt. Im ELI-        tration in der zu messenden Probe
deren Robustheit, Routinefähigkeit        SA, dem enzymgekoppelten Im-            ist (s. Abbildung 1).                     Die technologische Basis für die
und kurze Testdauer. Doch auch            munadsorptionstest, wird die di-                                                  Entwicklung von immunlogischen
wirtschaftliche und ökonomische           rekte Bindung von Analyt (so ge-        Die NEOGEN Allergenkits Alert® und        Lateral-Flow Assays wurde im Jah-
Aspekte stehen im Focus, denn sie         nanntes Antigen, im konkreten Fall      Veratox® (Casein, Ei, Erdnuss, Ge-        re 1980 durch die Entwicklung von
garantieren die Bewältigung eines         das gesuchte Lebensmittelallergen)      samt-Milch, Gliadin, Haselnuss, Man-      kolloidalen Partikeln zur Markierung
hohen Probendurchsatzes. Aus den          und Antikörper nachgewiesen. Das        del, Senf & Soja) werden in enger         gegründet. Die erste und gleichzei-
genannten Gründen werden in den           Prinzip beruht dabei auf der Bin-       Kooperation mit einem der führen-         tig eine der populärsten Applika-
allermeisten Fällen immunologische        dung eines Markermoleküls mit-          den Institutionen in dem Bereich der      tionen dieses Testformates ist der
Verfahren bevorzugt, da sie im Ver-       tels eines spezifischen Antikörpers     Lebensmittelallergene, dem FARRP          Nachweis von menschlichem Chori-
gleich zur PCR deutlich robuster,         an das nachzuweisende Antigen.          (Food Allergy Re-search & Resour-         ongonadotropin (hCG), einem Pep-
günstiger, in der Durchführung ein-       Durch das Markermolekül, in den         ce Program der University of Ne-          tidhormon, dessen Nachweis im
facher und weniger störungsanfäl-         meisten Fällen ein Enzym, wird ein      braska-Lincoln) Institut, entwickelt.     Blut oder Urin einer Frau ein sehr
lig sind. Ferner liegt der Einsatz im-    Signal erzeugt, welches detektiert                                                wichtiger Indikator für eine beste-
munologischer Verfahren näher, da         und quantifiziert werden kann. Bis      Kapillardiffusions-                       hende Schwangerschaft ist. 1997
es sich bei den Allergie auslösenden      heute wurde eine Vielzahl von un-       (Schnell-) Test                           wurde von Mills und Co-Autoren
Agenzien schließlich auch um Pro-         terschiedlichen Assaytypen beschrie-                                              der erste Streifentest zum Nach-
teine handelt.                            ben, denen jedoch einige generel-       Der Allergen-Streifentest, synonym        weis von Erdnuss-Allergen (Cona-
                                          le Prinzipien zugrunde liegen, die      häufig auch als Kapillardiffusionstest,   rachin) in Lebensmitteln beschrie-
Immunologische Methoden                   je nach Bedarf und speziellen An-       Immunfiltrationstest, flowthrough         ben. In den letzten Jahren hat sich
                                          forderungen modifiziert werden.         Test, Lateral-Flow device oder Dip-       sowohl die akademische wie auch
Immunologische Verfahren zum                                                      stick bezeichnet, eignet sich auf-        die industrielle Forschung auf die
Nachweis von Allergenen beru-             Sandwich-ELISA                          grund seiner einfachen und schnel-        Entwicklung von schnellen und ein-
hen auf der Erkennung eines Ana-                                                  len Durchführbarkeit besonders gut        fachen Allergentesten fokussiert.
lyten durch spezifische Nachweis-         Mittlerweile sind verschiedene ELI-     als Screening- bzw. Suchtest. Der-
moleküle, den sogenannten Anti-           SAs für die wichtigsten allergenen      artige Verfahren sind dazu geeig-         Beim Kapillardiffusions-(Schnell-)
körpern. Dabei erfolgt diese Erken-       Lebensmittel kommerziell erhältlich.    net schnell, einfach und mit ge-          Test handelt es sich meist um ei-
nung hoch spezifisch, nach dem            Gemessen an der Anzahl der Publi-       ringem Kostenaufwand etwaige              nen 1-Schritt Nachweis. Der wäss-
Schlüssel-Schloss-Prinzip. Die weite      kationen und der verfügbaren ELI-       Kontaminationen auszuschließen.           rige Probenextrakt wandert durch
Verbreitung von immunologischen           SAs ist der „Sandwich“-ELISA das        Sie ermöglichen eine Trennung der         eine Reagenzzone, die farbmar-
Verfahren in der Labordiagnostik          am häufigsten angewandte Test-          einwandfreien Ware von der kon-           kierte Allergen-spezifische Antikör-
ist im Wesentlichen durch zwei            prinzip. Die Bezeichnung rührt vom      taminierten, oder bieten eine Ent-        per enthält. Bei Anwesenheit der
Eigenschaften begründet: Die in           prinzipiellen Aufbau des Assays her:    scheidungshilfe bei der Freigabe          gesuchten Proteine (Antigene) bil-
vielen Fällen relativ einfache und        Das Antigen befindet sich zwischen
schnelle Durchführung der Assays          zwei spezifischen Antikörpern, ähn-
sowie die Fähigkeit, die gesuchte         lich wie beim klassischen Sandwich
Substanz aus einer Vielzahl unter-        der Belag zwischen zwei Brotschei-
schiedlicher Stoffe, die im millio-       ben. Diese Art des ELISAs eignet
nenfachen Überschuss gegenüber            sich insbesondere zum Nachweis
der gesuchten Substanz vorliegen,         von größeren Peptiden und Prote-
nachzuweisen.                             inen, die mindestens zwei Epitope
                                          aufweisen. Das heißt, das Antigen
Unter den immunologischen Ver-            muss eine gewisse Größe haben,
fahren zum Nachweis von Aller-            welche die Bindung zweier Antikör-
genen finden speziell Enzyme-Lin-         per sterisch ermöglicht. Durch die-
ked Immunosorbent Assays (ELI-            sen zweiseitigen Nachweis der Ziel-
SAs) und Lateral Flow Tests, auch         proteine kann zum einen die Spe-
Kapillardiffusions(Schnell-)Tests, oder   zifität erhöht und zum anderen die
Dipstick-Tests genannt, ein breites       Störanfälligkeit gegenüber Matrix-      Abb. 2: Einzigartiges Design. Die Reveal® 3-D Allergen Testkits verfü-
Anwendungsgebiet.                         bestandteilen verringert werden.        gen über eine 3-zeilige Anzeige.

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det sich ein Antigen-Antikörperkom-       Reaktionspartner durch den Strei-
                                                                        plex. Prinzipiell handelt es sich bei     fen von großer Bedeutung ist. Die
                                                                        diesen Testen um eine vereinfachte        chromatographische Fließgeschwin-
                                                                        ELISA-Version, bei denen die Anti-        digkeit beeinflusst die Verweildauer
                                                                        körper oder die Antigene auf einer        und Reaktionsfähigkeit der einzel-
                                                                        Membran anstelle einer Mikrotiter-        nen Komponenten untereinander
                                                                        platte immobilisiert sind.                und kann dementsprechend das
                                                                                                                  Ergebnis verfälschen. Die visuelle
                                                                        Hinsichtlich der Probenmatrices und       Auswertung bedingt, im Vergleich
                                                                        der Sensitivität ist jedoch der Streif-   zur hauptsächlich fotometrischen
                                                                        entest eingeschränkter als der ent-       Auswertung der ELISA, meist eine
                                                                        sprechende ELISA. Dieser Tatbe-           geringere Sensitivität. Gleichwohl
                                                                        stand ist bedingt durch die Funk-         konnte gezeigt werden, dass mo-
                                                                        tionsweise des Tests und der visu-        derne Lateral-Flow-Teste den ELI-
                                                                        ellen Auswertung. Schließlich han-        SA-Verfahren in Puncto Spezifität
                                                                        delt es sich hier um eine Kombina-        und Sensitivität nicht wesentlich
                                                                        tion aus chromatographischen und          nachstehen. Dadurch, dass die La-
Abb. 3: Aufbau der Reveal® 3-D Allergen Testkassetten aus einem Plas-   immunologischen Verfahren, bei            teral-Flow-Tests sehr einfach in ihrer
tikgehäuse und verschiedenen mit einander verklebten Membranen.         der die Fließgeschwindigkeit der          Handhabung sind und relativ rasche
                                                                                                                  Ergebnisse liefern, können sie das
                                                                                                                  Allergenscreening für lebensmittel-
                                                                                                                  produzierende Betriebe erleichtern.

                                                                                                                  Reveal®
                                                                                                                  3-D Allergen Testkit
                                                                                                                  Einzigartiges Design

                                                                                                                  Durch das einzigartige Design verfü-
                                                                                                                  gen die Reveal® 3-D Allergen Test-
                                                                                                                  kits über eine 3-zeilige Anzeige (s.
                                                                                                                  Abbildung 2). Diese Tests können
                                                                                                                  praktisch überall zum qualitativen
                                                                                                                  Nachweis von Allergenrückstän-
                                                                                                                  den in Oberflächen(Umwelt-)pro-
                                                                                                                  ben (Abstrichtupfer) und “clean-in-
                                                                                                                  place” Spülwasser eingesetzt wer-
                                                                                                                  den. Der Test kann, abhängig von
                                                                                                                  der Matrix und gegebenenfalls nach
                                                                                                                  entsprechender Validierung, auch
                                                                                                                  zum Screening von Lebensmitteln
                                                                                                                  verwendet werden. Die einmalige
                                                                                                                  3-D Technologie des Tests gewähr-
                                                                                                                  leistet eine große Prüfzuverlässlich-
                                                                                                                  keit beim Allergen Screening.

                                                                                                                  Funktionsweise

                                                                                                                  Bei den Reveal® 3-D Allergen Testen
                                                                                                                  handelt es sich um 1-Schritt Kapillar-
                                                                                                                  diffusions-(Schnell-)Teste. Der wäss-
                                                                                                                  rige Probenextrakt wandert dabei
                                                                                                                  durch eine Reagenzzone (Reagenz-
                                                                                                                  membran), die mit spezifischen An-
                                                                                                                  tikörpern (den Detektions-Antikör-
                                                                                                                  pern) beschichtete blaue Polystyrol-
                                                                                                                  Latexpartikel enthält (siehe Abbil-
                                                                                                                  dung 3). Bei Anwesenheit der ge-
                                                                                                                  suchten Allergene bildet sich ein
                                                                                                                  Antigen-Antikörperkomplex (s. Ab-
Abb. 4: Funktionweise der Reveal® 3-D Allergen Testkassetten.                                                     bildung 4). Ein zweiter spezifischer

1 2011                                                                                                                                               7
Abb. 6: Mäanderförmige Tupferführung. Falls möglich für eine best-
                                                                              mögliche Reproduzierbarkeit eine repräsentative Fläche von 10 x 10
                                                                              cm gleichmäßig mit einem sterilen Allergen-freien Tupfer (Swab) bepro-
                                                                              ben. Der Tupfer wird dabei unter Drehen mäanderförmig über die zu
                                                                              untersuchende Fläche geführt. Anschließend wird dieser Vorgang im
                                                                              rechten Winkel zum ersten Durchgang, ein weiteres Mal wiederholt.

                                                                              dung des Tests mit Allergenprote-      Lösungen gebrauchsfertig dem Kit
                                                                              inen an (Antikörpermenge aufge-        bei. Dies erlaubt eine Testdurch-
Abb. 5: Bestandteile des Kits: Jeder der Reveal® 3-D Allergen Teste
                                                                              braucht). An der Position C, der       führung, einschließlich Extraktion,
enthält neben einer Gebrauchsanleitung, 10 Reveal® 3-D Testkasset-
                                                                              Kontrolllinie, findet eine physika-    direkt Vor-Ort in Echtzeit (s. Ab-
ten für das gesuchte Allergen (entweder Casein, Ei, Erdnuss, Gluten,
                                                                              lische Bindung der Latexpartikel       bildung 5).
Haselnuss, Krebstiere (Crustacea), Mandel oder Soja), 10 vorportio-
                                                                              statt. Ohne die „Overflow“-Linie
nierte Tütchen mit der geeigneten gebrauchsfertigen Extraktionslö-
                                                                              würde eine Probe mit sehr hohen        Probenvorbereitung
sung, 10 Probenröhrchen mit passenden Deckeln sowie 10 individuell
                                                                              Allergenkonzentrationen fälschlich
verpackte sterile Abstrichtupfer mit abbrechbarer Spitze.
                                                                              als negativ interpretiert werden.      In Abhängigkeit von der Natur der
                                                                                                                     Probe existieren verschiedene Pro-
Antikörper (Fänger-Antikörper) ist     kann und die Linie T damit nicht       Testvorbereitung und                   tokolle für die Testdurchführung (s.
in einer weiteren Zone der Mem-        bzw. nur schwach erscheint. An         Probennahme                            Abbildung 7). Grundsätzlich ist zu
bran immobilisiert (T-Position), in    der Position O findet eine Kompe-                                             beachten, dass lediglich eine ge-
der dann der Antigen-Antikörper-       tition zwischen freiem und gebun-      Die Probenvorbereitung nimmt nur       ringe Probenmenge (0,25 g oder
Komplex konzentriert und gebun-        denem Antigen statt. Sobald freies     wenige Minuten in Anspruch und         0,25 ml) benötigt wird, daher ist es
den wird. Durch das Herausfan-         Antigen im Überschuss vorhan-          erfordert weder Laborschüttler, Was-   besonders wichtig, eine proportio-
gen der farbmarkierten Latexpar-       den ist, erscheint die Linie O nicht   serbad noch sonstige Laborgerät-       nale und repräsentative Menge an
tikel entsteht eine sichtbare blaue    mehr und zeigt damit die Überla-       schaften. Des Weiteren liegen alle     Probe zu testen.
Bande (s. Abbildung 4B). Bei Ab-
wesenheit der gesuchten Allergen-
proteine können sich die ungebun-
denen Latexpartikel nicht an der
Position T binden und folglich fehlt
diese Testbande (s. Abbildung 4A).
Ungebundene Latexpartikel fließen
weiter und werden an den Positi-
onen O (= mit gesuchtem Allergen-
protein beschichtet) und C (=phy-
sikalische Bindung der Latexparti-
kel) gebunden (s. Abbildung 4B).

Die Reveal® 3-D Technologie hat
mit dem sogenannten „Overflow“-
Signal das Ziel, den sogenannten
„High Dose Hook Effekt“ abzubil-
den, der im Sandwich Lateral-Flow-
Verfahren (Linie T) auftreten kann,
wenn die Antigenmenge die An-
tikörpermenge übersteigt (s. Ab-
bildung C & D). In diesem Fall bin-
den sich die Antigene nicht nur an
den freien Antikörper-Latex-Kom-
plexen, sondern auch an den ge-
bundenen Antikörpern, so dass der
Antikörper-Antigen-Antikörper-La-      Abb. 7: Testdurchführung in Abhängigkeit von der Beschaffenheit der Probe: Beprobung von Spülwasser,
texkomplex nicht mehr entstehen        Oberflächen oder einer soliden Lebensmittelprobe.

 8
Validierung     Parameter       Reveal®3-D           Reveal®3-D         Reveal®3-D          Reveal®3-D        Reveal®3-D          Reveal®3-D           Reveal®3-D         Reveal®3-D
                                 Casein *               Ei *             Erdnuss *           Gluten *         Haselnuss **        Krebstiere *          Mandel *            Soja *
   Target                          Casein            Ovomucoid           Conarachin            Gluten                -            Tropomyosin                -                  -
                                                      (Gal d 1)           (Ara h 1)
 Sensitivität       -         < 0,1 ppm (<           0,5 ppm (<           5 ppm (<           1 ppm (<           0,1 ppm (<         0,5 ppm (<          0,1 ppm (<             1 ppm (<
                               0,00001%)            0,00005 %)           0,0005 %)          0,0001 %)           0,00001%)        0,00005 %) ge-        0,00001%)          0,0001 %) So-
                             Casein, 1 ppm (<        extrahiertes      Erdnuss in pro-      Weizen-Glu-       entfettete Ha-     kochter Garne-       Mandelprote-       japrotein extra-
                                0,0001%)            Gesamteipro-       zessierten Nah-          ten            selnussprote-     len-Extrakt & 1      in, 0,06 ppm         hiert aus Do-
                                Caseinate                tein           rungsmitteln                          ine; 0,06 ppm      ppm (< 0,0001        (< 0,000006          Soy; 2,5 ppm
                                                                                                               (< 0,000006       %) Crustaceen-        %) Gesamt-         (< 0,00025 %)
                                                                                                                %) Gesamt-           protein             Mandel          Sojaprotein ex-
                                                                                                                 Haselnuss                                                  trahiert aus-
                                                                                                                                                                           prozessierter
                                                                                                                                                                            Soja (HiSoy)
 Spezifität     Kreuzreak-   Kreuzreaktivität zu      Kreuzreakti-      keine Kreuzre-      detektiert ne-     Kreuzreakti-       folgende Arten       Kreuzreaktivi-    Kreuzreaktivi-
                  tivität    Schafs- & Ziegen-       vität zu 10 %     aktivität mit an-     ben Weizen        vität zu > 60    ergaben ein posi-      tät zu Apriko-    tät zu 100 %
                                   milch            Enten-Eiklar &      deren Nüssen,       Gluten auch       ppm Gesamt-       tives Signal: Krab-   senkernen; kei-    Hülsenfrüchte
                                                     0,1 % Wach-        Leguminosen,          Roggen &        Walnuss; kei-     ben, Krabe, Hum-       ne Kreuzreak-
                                                    tel-Eigelb; kei-     Dörrgemüse,        Gerste, darü-     ne Kreuzreak-     mer, Nordseegar-        tivität zu an-
                                                      ne Kreuzre-           Samen          ber hinaus sind    tivität mit an-    nele, Riesengar-     deren Nüssen,
                                                      aktivität zu                         keine weiteren     deren Nüssen,       nele, Kaisergra-     Leguminosen,
                                                     Gänse-Eiklar,                          Kreuzreaktivi-    Leguminosen,       nat (Kaiserhum-        Dörrgemüse,
                                                    Strauss-Eiklar,                        täten bekannt,      Dörrgemüse,       mer), Flusskrebs,          Samen
                                                    Wachtel-Eiklar,                           Ausnahme             Samen          Jacobsmuschel,
                                                     Enten-Eigelb,                          brauner Lein-                        Auster, Miesmu-
                                                     Gänse-Eigelb                          samen (jedoch                          schel, Herzmu-
                                                                                             konnte eine                          schel & Tinten-
                                                                                           Gluten-Konta-                        fisch lediglich Ve-
                                                                                           mination nicht                        nusmuscheln er-
                                                                                            ausgeschlos-                         gaben ein nega-
                                                                                            sen werden)                             tives Signal
                Wiederfin-     5 ppm in Milch,       1 ppm Eiklar-             -            10 ppm Wei-        1 ppm Hasel-     5 ppm gekochter         1 ppm Man-        2,5 ppm pro-
                dung nach    Margarine, Cerea-      protein in Mar-                        zen Gluten-Ex-     nuss-Extrakt in   Garnelen-Extrakt       del-Extrakt in     zessierte Soja
                Dotierung    lien, Biskuit, Scho-   garine, Biskuit                        trakt in Würs-       Haselnussöl,     in Pflanzenöl, 10    Mandelöl, Bis-       (HiSoy) ge-
                                kolade, Würst-      & Tomatenket-                           ten & Biskuit,     Biskuit, vege-     ppm in Mayon-         kuit, veteta-    kochten Würs-
                                     chen            chup, 5 ppm                           20 ppm in Ba-      tarischen Sup-       naise & Fisch-       rischen Sup-     ten, 10 ppm in
                                                     Fishcake, Eis-                         bynahrung &         penwürfeln;       Bouillonwürfel,       penwürfeln;      Margarine, 20
                                                    creme & Scho-                            Joghurt, 50       1 ppm Dotie-       40 ppm in fein       1 ppm Dotie-      ppm in Biskuit,
                                                         kolade                             ppm in Scho-       rung in Scho-    gehacktem Fisch,       rung in Scho-      Eiscreme und
                                                                                             koladenku-       kolade und To-    50 ppm in Surimi-     kolade und To-      Milchpulver, 5
                                                                                                chen            matenpaste       Sticks & Seafood       matenpaste       ppm in dunkler
                                                                                                              wird erst nach           Sauce          wird erst nach       Schokolade
                                                                                                              einer 1:10 Ver-                         einer 1:10 Ver-
                                                                                                               dünnung de-                             dünnung de-
                                                                                                                  tektiert                                 tektiert
                  Wieder-     > 62,1 % Präzisi-      > 88 % Präzi-     100 % Präzisi-       > 90 % Präzi-      > 84 % Präzi-    > 69 % Präzision,      > 90 % Präzi-      > 82 % Präzi-
                findung in   on; eventuell Kon-     sion; eventuell    on bei Proben       sion; eventuell    sion; eventuell    eventuell Kon-       sion; eventuell    sion; eventuell
                nicht „ge-    tamination oder       Kontamination        > 5 ppm           Kontamination      Kontamination     tamination oder       Kontamination      Kontamination
                 spikten“      Prozessierungs-      oder Prozessie-                        oder Prozessie-    oder Prozessie-    Prozessierungs-      oder Prozessie-    oder Prozessie-
                 Handels-          effekte           rungseffekte                           rungseffekte       rungseffekte          effekte           rungseffekte       rungseffekte
                  proben
                „gespikte“                            4,6 ppm Ei-       25 ppm NIST        detektiert zwi-        1 ppm          20 ppm gekoch-           1 ppm                 -
                 Handels-                           klarproteine in    SRM 2387 Erd-         schen 15,6                          ter Garnelen-Ex-
                  proben                            verschiedenen        nussbutter        und 89,9 ppm,                         trakt in Weizen-
                                                       Matrices                            detektiert Glu-                          mehl, 50 ppm
                                                                                           ten in verschie-                       in Sojamehl, 20
                                                                                             denen Bier-                        ppm in Milchpul-
                                                                                                sorten                             ver, 20 ppm in
                                                                                                                                gemahlenen Erd-
                                                                                                                                 nüssen, 10 ppm
                                                                                                                                    in Ei, 10 ppm
                                                                                                                                    in Kokosnuss,
                                                                                                                                  10 ppm in Stär-
                                                                                                                                ke, detektiert ge-
                                                                                                                                  kochten Garne-
                                                                                                                                 len-Extrakt nicht
                                                                                                                                   in öligem Fisch
                                                                                                                                (Anchovy), & roh-
                                                                                                                                    em Fisch auf-
                                                                                                                                 grund deren ho-
                                                                                                                                hen Proteingehalt

1 2011                                                                                                                                                                                 9
Inter- und         -         Bandenstärke ver-      Bandenstär-          Bandenstär-       Bandenstär-        Bandenstär-        Bandenstärke ver-      Bandenstär-          Bandenstär-
 Intra-Varia-                    gleichbar zwi-       ke vergleich-        ke vergleich-     ke vergleich-      ke vergleich-        gleichbar zwi-       ke vergleich-       ke vergleich-
     blität                     schen verschie-       bar zwischen         bar zwischen      bar zwischen       bar zwischen        schen verschie-       bar zwischen        bar zwischen
                                denen Chargen        verschiedenen        verschiedenen     verschiedenen      verschiedenen        denen Chargen        verschiedenen       verschiedenen
                                und Anwendern         Chargen und          Chargen und       Chargen und        Chargen und         und Anwendern         Chargen und         Chargen und
                                                      Anwendern          Anwendern bei       Anwendern          Anwendern                                 Anwendern            Anwendern
                                                                         1 ppm Erdnuss-                         bei 0,1 ppm                               bei 0,1 ppm          bei 1 & 2,5
                                                                              protein                          Haselnusspro-                              Mandelpro-           ppm extra-
                                                                                                                     tein                                      tein          hierte Sojapro-
                                                                                                                                                                              teine aus Do-
                                                                                                                                                                               Soy & HiSoy
  Robust-         Konditi-      Probeneinwaage       Probeneinwaa-       Probeneinwaa-         Probenein-      Probeneinwaa-        Probeneinwaage       Probeneinwaa-       Probeneinwaa-
   heit **      onen wel-      +/- 10 %; Extrak-       ge +/- 10 %;        ge +/- 10 %;       waage +/- 10       ge +/- 10 %;      +/- 10 %; Extrak-       ge +/- 10 %;        ge +/- 10 %;
                   che die     tionspuffer +/- 10      Extraktions-        Extraktions-        %; Extrakti-      Extraktions-      tionspuffer +/- 10      Extraktions-        Extraktions-
                Funktiona-     % ; Puffer-Tempe-     puffer +/- 5 %;       puffer +/- 10      onspuffer +/-    puffer +/- 5 %;     % ; Puffer-Tempe-     puffer +/- 5 %;     puffer +/- 5 %;
                 lität nicht   ratur 2-8 °C oder      Puffer-Tempe-      % ; Puffer-Tem-       10 % ; Puf-      Puffer-Tempe-      ratur 2-8 °C oder      Puffer-Tempe-       Puffer-Tempe-
                beeinflus-     RT; Extraktionszeit     ratur 2-8 °C      peratur 2-8 °C       fer-Tempera-       ratur 2-8 °C      RT; Extraktionszeit     ratur 2-8 °C        ratur 2-8 °C
                     sen       1 min +/- 30 sec;       oder RT; Ex-      oder RT; Extrak-   tur 2-8 °C oder      oder RT; Ex-      1 min +/- 30 sec;       oder RT; Ex-        oder RT; Ex-
                               Extraktion: schüt-      traktionszeit     tionszeit 1 min    RT; Extraktions-     traktionszeit     Extraktion: schüt-      traktionszeit       traktionszeit
                               teln oder rühren;       1 min +/- 30       +/- 1 min; Ex-      zeit 1 min +/-     1 min +/- 30      teln oder rühren;       1 min +/- 30        1 min +/- 30
                               Inkubationszeit 5     sec; Extraktion:    traktion: schüt-   30 sec; Extrak-    sec; Extraktion:    Inkubationszeit 5     sec; Extraktion:    sec; Extraktion:
                                  min +/- 1 min      schütteln oder       teln oder rüh-     tion: schütteln   schütteln oder         min +/- 2 min      schütteln oder      schütteln oder
                                                      rühren; Inku-       ren; Inkubati-      oder rühren;      rühren; Inku-                             rühren; Inku-       rühren; Inku-
                                                       bationszeit 5      onszeit 5 min       Inkubations-       bationszeit 5                             bationszeit 5       bationszeit 5
                                                      min +/- 2 min          +/- 2 min        zeit 5 min +/-    min +/- 2 min                             min +/- 2 min       min +/- 2 min
                                                                                                  2 min
  Abstrich           -         detektiert < 5 µg       detektiert 5        detektiert 1      detektiert 20     detektiert 5 µg      detektiert 20 µg     detektiert 5 µg      detektiert 10
                                Casein / 25 cm2      µg Eiklarprote-     ppm NIST SRM       µg Gluten / 25      Haselnusspro-      gekochter Garne-       Mandelprote-        µg Sojaprote-
                                auf Plastik-, Te-    in / 25 cm2 auf      2387 Erdnuss-      cm2 auf Pla-        tein / 25 cm2      len-Extrakt / 25     in / 25 cm2 auf     in / 25 cm2 auf
                                flon- und Edel-      Plastik-, Teflon-   butter im Puffer    stik-, Teflon-    auf Plastik-, Te-   cm2 auf Plastik- &    Plastik-, Teflon-    Plastik- & Te-
                               stahl-Oberfläche       und Edelstahl-                        und Edelstahl-     flon- und Edel-      Edelstahl-Ober-       und Edelstahl-      flon-Oberflä-
                                                       Oberfläche                             Oberfläche          stahl-Ober-      fläche und 10 µg        Oberfläche        che und 20 µg
                                                                                                                     fläche         auf Tefon-Ober-                          auf Edelstahlo-
                                                                                                                                         fläche                                 berfläche

  * detaillierte Validierungsunterlagen sind auf Nachfrage bei Neogen erhältlich.
  ** Robustheit wurde modifiziert nach der Methode von Youden & Steiner, Statistical of the AOAC, 1975 bestimmt.

Tab.: Validierungsdaten.

Beprobung von Spülwasser                      Beprobung von Oberflä-                           Oberflächen. Auf diese Weise kön-                   Oberflächen muss der Tupfer vor
(“Clean-in-place”)                            chen mittels Abstrichtupfern                     nen Oberflächen auf die Anwesen-                    der Probennahme mit dem Ex-
                                              (Swabs)                                          heit von Allergenrückständen getes-                 traktionspuffer benetzt werden.
1. Tütchen mit dem Puffer auf-                                                                 tet werden. Diese Methode kann                      Hingegen entfällt ein befeuch-
   schneiden oder -reißen und                 Die mitgelieferten Abstrichtupfer                zur Validierung und Kontrolle des                   ten auf nassen Oberflächen. Nach-
   anschließend Inhalt komplett in            sind bestimmt zur Beprobung von                  Reinigunsprozesses eingesetzt wer-                  folgend wird eine definierte
   das beiliegende Probenröhrchen                                                              den, wodurch u.a. Problemzonen                      Fläche, meist 10 x 10 cm, mäan-
   überführen.                                                                                 aufgezeigt werden, wie beispiels-                   derförmig mittels Tupfer beprobt.
2. 0,25 ml der Spülwasserprobe in                                                              weise unerwünschte Allergenrück-                    Dieser Vorgang wird im rechten
   das Probenröhrchen geben. Falls                                                             standsansammlungen in und auf                       Winkel zum ersten Durchgang,
   keine Pipette zur Hand ist, so                                                              den Produktionsanlagen.                             ein weiteres Mal wiederholt
   können 0,25 ml grob geschätzt                                                                                                                   (s. Abbildung 6).
   werden, indem einer der wei-                                                                1. Tütchen mit dem Puffer aufschnei-             4. Die Baumwollspitze des Tupfers
   ßen Probenröhrchen-Deckel zur                                                                  den oder -reißen und anschlie-                   wird nach der Beprobung an
   Hälfte befüllt wird. Derartig er-                                                              ßend Inhalt komplett in das                      der vorperforierten Stelle abge-
   zielte Testergebnisse sind jedoch                                                              beiliegende Probenröhrchen                       brochen und in das mit Puffer
   weniger akkurat.                                                                               überführen.                                      gefüllte Probenröhrchen über-
3. Probenröhrchen mit dem wei-                Abb. 8: Die Reveal® 3-D Allergen                 2. Eine Fläche von 10 cm x 10 cm                    führt. In der Folge wird das Röhr-
   ßen Deckel verschließen und die            Testkassette wird mit dem Proben-                   beproben. Alternativ können auch                 chen mit dem weißen Deckel
   Probe eine Minute lang per Hand            auftragsfenster in den mit dem                      Problemzonen mit anderen Ab-                     verschlossen und die Tupferspit-
   schütteln.                                 Probenextrakt gefüllten weißen                      messungen beprobt werden.                        ze eine Minute lang per Hand
Die Proben können nachfolgend                 Deckel des Probenröhrchens ge-                   3. Oberfläche mittels der mitgelie-                 ausgeschüttelt.
direkt in den Test eingesetzt wer-            stellt und nach 5 Minuten visuell                   ferten, sterilen Abstrichtupfer               Die Proben können nachfolgend di-
den.                                          ausgelesen.                                         (Swab) beproben. Auf trockenen                rekt in den Test eingesetzt werden.

 10
3. Die 3-D Kassette in den Deckel
                                                                                                                       solange eintauchen bis die
                                                                                                                       Flüssigkeit im Testfenster auf-
                                                                                                                       steigt.
                                                                                                                    4. Anschließend die 3-D Kassete
                                                                                                                       auf eine ebene Fläche legen
                                                                                                                       und den Test nach 5 Minuten
                                                                                                                       visuell auslesen (s. Abbildung 2).

                                                                                                                    Auswertung

                                                                                                                    Die Reveal® 3-D Allergen Teste wer-
                                                                                                                    den bereits nach 5 Minuten visuell
                                                                                                                    ausgelesen. Dabei steigt die Flüs-
                                                                                                                    sigkeit chromatographisch in dem
                                                                                                                    Testfenster auf. Wenn in Position
                                                                                                                    C keine deutliche Bande sichtbar
Abb. 9: Auswertung der Reveal® 3-D Allergen Testkassetten.                                                          ist, gilt der Test als nicht auswert-
                                                                                                                    bar und muss dem entsprechend
                                                                                                                    wiederholt werden.

                                                                                                                    Eine fehlende Bande in der Posi-
                                                                                                                    tion T (Test Linie) bedeutet, dass
                                                                                                                    keine Allergen-Rückstände detek-
                                                                                                                    tiert wurden (negatives Ergebnis).

                                                                                                                    Hingegen besagt eine Bande in
                                                                                                                    der Position T (Test Linie) – egal
                                                                                                                    wie schwach oder stark die Linie
                                                                                                                    erscheint – dass die untersuchte
                                                                                                                    Probe positiv auf das untersuchte
                                                                                                                    Allergen getestet wurde (posi-
                                                                                                                    tives Ergebnis). Ist in der Position
Abb. 10: Reveal® 3-D Allergen.Test Vielfalt: Casein, Ei, Erdnuss, Gluten, Haselnuss, Krebstiere (Crustacea),        O (“Overload” Linie) keine Bande
Mandel und Soja erhältlich.                                                                                         sichtbar und ist in der Position T
                                                                                                                    (Test Linie) die Bande nur schwach
                                                                                                                    sichtbar oder nicht vorhanden, so
Lebensmittelproben                    Darüber hinaus können analog          z.B. die Alert® oder Veratox® All-      bedeutet dies, dass die Probe mit
                                      auch Lebensmittelproben analy-        ergen Testsysteme.                      dem gesuchten Allergen überla-
Die Proben müssen zunächst mit-       siert werden. Trotz umfangreicher                                             den ist (s. Abbildung 9).
tels Getreidemühle, Mixer oder ähn-   Validierungsarbeiten gibt es u.U.     Bereits durchgeführte Validierungen
lichem zerkleinert werden (s. Ab-     Matrices, die sich nur bedingt zur    von Rohstoffen sollten wiederholt       Einsatzmöglichkeiten
bildung 7).                           Analyse mit diesen Kits eignen. An-   werden, wenn ein Wechsel der            in der Lebensmittel-
                                      wendern wird aus diesem Grunde        Rohstofflieferanten eintritt oder       verarbeitung
1. Zur Extraktion werden 0,25 g       empfohlen, Matrix-spezifische Va-     Veränderungen des Herstellungs-
   vermahlene Probe oder circa        lidierungen durchzuführen, indem      prozesses durchgeführt werden.          Die Reveal® 3-D Allergen Teste sind
   eine halbe Füllung des Proben-     die Wiederfindung von gespikten                                               für die unterschiedlichsten Aspekte
   röhrchendeckels mit einem Beu-     Proben mit einem validierten Lab-     Testdurchführung                        des Allergen-Managements geeig-
   tel Extraktionspuffer versetzt.    ortest, wie z.B. den Veratox® All-                                            net. Im Grunde ermöglichen die-
2. 1 Minute schütteln.                ergen Kits, verglichen wird.          1. Deckel vom Probenröhrchen ent-       se Teste von der Rohwarenanlie-
Die Proben können nachfolgend                                                  fernen und mit der Extraktions-      ferung, Lagerung, Verarbeitung,
direkt in den Test eingesetzt wer-    Diese Vorgehensweise gewährlei-          flüssigkeit aus dem Röhrchen         Transportvorgängen bis hin zur Ver-
den.                                  stet die eindeutige Identifizierung      befüllen. Eventuell vorhandener      packung alle Allergen-relevanten
                                      von problematischen Matrices und         Schaum sollte im Röhrchen ver-       „Hot Spots“ zu überprüfen (s. Ab-
Die Reveal® 3-D Allergentests wur-    ermöglicht auch eine Bestimmung          bleiben.                             bildung 11).
den mit dem Focus entwickelt, Al-     der entsprechenden Nachweisgren-      2. Die 3-D Kassette in den Deckel
lergenrückstände wie Casein, Ei,      ze. Gleichwohl wird im Allgemei-         eintauchen (s. Abbildung 8). Da-     Aufgrund der ebenso schnellen
Erdnuss, Gluten, Haselnuss, Krebs-    nen empfohlen, dass zur Untersu-         bei ist darauf zu achten, dass       wie einfachen Probenvorbereitung
tiere (Crustacea), Mandel und Soja    chung von komplexen Lebensmit-           die Vertiefung mit dem Proben-       und Testdurchführung, ermöglicht
in Spülwässern und Umweltpro-         telproben eine breiter gefächerte        auftragsfenster vollständig in die   dieses Testformat eine Allergenü-
ben nachzuweisen.                     Testmethode eingesetzt wird, wie         Flüssigkeit eintaucht.               berwachung in Echtzeit.

1 2011                                                                                                                                              11
Wareneingang und Lager
                                                                                       7 Verschüttungen
                                                                                           Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Überpfrüfung der Reinigung
  1 Zulieferektte Auditierung
      Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Allergenkontrolle
                                                                                       8 In-Process und „Re-Work“
 2 Wareneingang                                                                            Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Detektion von potenziellen
      Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Bestätigung der Lieferantenspe-              Kreuzkontaminationen
      zifikationen
                                                                                           Endprodukt und Lagerhaus
  3 Lager
      Verwendung von Neogen-Allergen-Kits, um sicherzustellen, dass die un-            9 Fertigware
      terschiedlichen Roh- und Inhaltsstoffe hinsichtlich ihrem Allergen-Potential         Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Überprüfung der Produktions-
      zuverlässig getrennt gelagert werden, sowie dass deren Verpackungen                  kennzeichnung
      unversehrt sind.
                                                                                      10 Lager
      Verarbeitung und Verpackung                                                          Verwendung von Neogen-Allergen-Kits, um sicherzustellen, dass die unter-
                                                                                           schiedlichen Endprodukte hinsichtlich ihrem Allergen-Potential zuverlässig
 4 Oberflächen zur Lebensmittelherstellung                                                 getrennt gelagert werden, sowie dass deren Verpackungen unversehrt
      Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Validierung der Reinigung und                sind.
      Aufdeckung von Kreuzkontaminationen
                                                                                      11 Verschüttungen
 5 Equipment und Gerätschaften                                                             Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Überprüfung der Reinigung
      Verwendung von Neogen-Allergen-Kits zur Validierung der Reinigung und
 6    Aufdeckung von Kreuzkontaminationen                                             12 Endprodukt zu Lieferkette
                                                                                           Verwendung von Neogen-Allergen-Kits für Audits und zur Durchsetzung

Abb. 11: Überwachung der Allergen-relevanten Hot-Spots innerhalb der Wertschöpfungskette in einem Lebensmittelproduzierenden Unter-
nehmen.

Reveal® 3-D Allergenteste                  wendeten Anlagen, noch während            tung einer korrekten Produktkenn-         portfolio umfasst neben den hier
schaffen Abhilfe                           der Produktion bzw. direkt nach           zeichnung und bei der Vermeidung          beschriebenen Lateral Flow Test-
                                           deren Reinigung, auf eventuell vor-       von Kreuzkontaminationen wäh-             kits auch noch ELISAs sowohl zur
Die Reveal® 3-D Allergenteste sind         handene Allergene (s. Abbildung           rend des Produktionsprozesses. Die        qualitativen (Alert®) als auch zur
für den Einsatz in der industriellen       11). Mit diesem einfachen Scree-          Produktpalette von Neogen bein-           quantitativen Bestimmung (Vera-
Lebensmittel-Produktion bzw. -Ver-         ningverfahren liegen die Ergeb-           haltet verschiedene Testsysteme           tox®) der gesuchten Allergene. So-
arbeitung vorgesehen sowie für das         nisse bereits nach wenigen Mi-            zum Nachweis der wichtigsten All-         mit ist Neogen in der Lage, maß-
zum Einhalten der gesetzlichen Vor-        nuten mit hoher Nachweisemp-              ergene. Jedes dieser Verfahren bie-       geschneiderte Lösungen für unter-
schriften nötige Testen hinsichtlich       findlichkeit vor.                         tet viele Vorteile: eine einfache Pro-    schiedlichste analytische Fragestel-
der Lebensmittelkennzeichnung.                                                       benvorbereitung, eine kurze Analy-        lungen zu liefern.
                                           Diese einfach zu handhabende Al-          senzeit und eine denkbar einfache
Die Teste detektieren zuverlässig          lergenanalytik bietet den Herstel-        Auswertung.                               Literaturnachweis und
Allergenrückstände in Spülwäs-             lern die Möglichkeit, versteckte                                                    Referenzen auf Anfrage
sern und Umweltproben bzw. Ab-             Al-lergene durch Identifizierung          In enger Kooperation mit dem Food
strichtupfern. Sie ermöglichen die         kritischer Produktions- und Logistik-     Allergy Research and Resource Pro-
direkte Überprüfung der Lebens-            punkte frühzeitig zu erkennen und         gram (FAARP) entwickelt Neogen
mittelprodukte bzw. des Produk-            dauerhaft zu überwachen.                  bereits seit 1998 routinetaugliche
tionsumfeldes (s. Abbildung 11).                                                     Allergen-Nachweisverfahren, die              NEOGEN Europe Ltd.
Beispielsweise ermöglichen die             Allergen-Testsysteme                      sich im Besonderen durch einheit-            The Dairy School
Reveal® 3-D Allergenteste, auf-            für jeden etwas!                          liche und standardisierte Testfor-           Auchincruive
grund ihrer einfachen und schnel-                                                    mate und -durchführungen für alle            KA6 5HW Ayr, Great Britain
len Anwendbarkeit, die Überprü-            Das Neogen Allergen-Leistungs-            Allergen-Testsysteme auszeichnen.            www.neogen.com
fung bzw. Überwachung der ver-             spektrum hilft bei der Gewährleis-        Neogen´s umfangreiches Produkt-

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