ACQUITY PREMIER Fluoreszenzdetektor - Übersicht und Wartungsanleitung - 715006949DE - Waters Corporation
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ACQUITY PREMIER Fluoreszenzdetektor Übersicht und Wartungsanleitung 715006949DE Copyright © Waters Corporation 2020 Version 00 Alle Rechte vorbehalten
Allgemeine Informationen
Hinweis zu den Urheberrechten
© 2020 WATERS CORPORATION. GEDRUCKT IN DEN VEREINIGTEN STAATEN VON
AMERIKA UND IRLAND. ALLE RECHTE VORBEHALTEN. DIESES DOKUMENT, ODER TEILE
DAVON, DÜRFEN NICHT REPRODUZIERT WERDEN OHNE SCHRIFTLICHE ERLAUBNIS
DES HERAUSGEBERS.
Die in diesem Dokument enthaltenen Informationen können ohne vorherige Ankündigung
geändert werden und sind für die Waters Corporation nicht verbindlich. Die Waters Corporation
übernimmt für eventuelle Fehler in dieser Dokumentation keine Verantwortung. Zum Zeitpunkt
der Veröffentlichung gilt dieses Dokument als vollständig und richtig. Die Waters Corporation ist
nicht haftbar für Neben- oder Folgeschäden, die in Zusammenhang mit diesem Leitfaden oder
durch dessen Verwendung entstehen. Die neueste Version dieses Handbuchs finden Sie auf der
Waters Website (www.waters.com).
Marken
ACQUITYTM ist eine Marke der Waters Corporation.
EmpowerTM ist eine Marke der Waters Corporation.
MassLynxTM ist eine Marke der Waters Corporation.
TeflonTM ist eine Marke von E.I. du Pont de Nemours and Company oder seiner
Tochtergesellschaften.
THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLETM ist eine Marke der Waters Corporation.
TritonTM X-100 ist eine Marke Dow Chemical Company oder einer Tochtergesellschaft von Dow.
UPLCTM ist eine Marke der Waters Corporation.
WatersTM ist eine Marke der Waters Corporation.
Waters Quality PartsTM ist eine Marke der Waters Corporation.
Alle anderen Marken sind Eigentum der entsprechenden Inhaber.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite iiKundenkommentare
Hinweise zu fehlerhaften Angaben in diesem Handbuch und weitere Verbesserungsvorschläge
nimmt die Abteilung Customer Experience and Knowledge Management von Waters gern
entgegen. Wir unternehmen alle Anstrengungen, Ihren Erwartungen gerecht zu werden, um die
Genauigkeit und die Benutzerfreundlichkeit stetig zu verbessern.
Jeder Kundenkommentar wird von uns sehr ernst genommen. Schicken Sie uns eine E-Mail an:
tech_comm@waters.com.
Kontakt mit Waters aufnehmen
Wenden Sie sich bitte an Waters, wenn Sie Verbesserungswünsche oder technische Fragen zu
Verwendung, Transport oder Entsorgung eines Waters Produkts haben. Sie können uns über das
Internet, telefonisch oder auf dem Postweg kontaktieren.
Waters Kontaktdaten
Art der Kontaktaufnahme Informationen
Internet Auf der Waters Website sind
Kontaktinformationen der weltweiten Waters
Vertretungen zu finden.
Besuchen Sie unsere Website unter
www.waters.com.
Telefon und Fax Kunden in Deutschland wenden sich an
unseren technischen Kundendienst unter der
Telefonnummer 06196 400600; für Kunden in
Österreich gilt die Nummer 01877 1807 und für
Kunden in der Schweiz die Nummer 062 889
2030. Kunden in den USA und Kanada
wenden sich an die Nummer 800-252-4752
oder schicken ein Fax an 508 -872 -1990.
Auf der Waters Website finden Sie
Telefonnummern und E-Mail-Adressen unserer
weltweiten Vertretungen.
Postanschrift Waters GmbH
Kundendienst
Helfmann-Park 10
65760 Eschborn
Deutschland
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite iiiSicherheitshinweise
Einige Reagenzien und Proben, die für Waters Geräte und Vorrichtungen verwendet werden,
können chemische, biologische oder radiologische Gefahren (oder eine beliebige Kombination
dieser) darstellen. Sie müssen daher stets das Gefährdungspotenzial der von Ihnen eingesetzten
Substanzen kennen. Befolgen Sie stets die Richtlinien der Guten Laborpraxis (GLP) und
informieren Sie sich über die Standardarbeitsanweisungen (SOP) Ihres Unternehmens und die
örtlichen Sicherheitsvorschriften.
Sicherheitshinweis zum Gefahrensymbol
Das Symbol gibt eine potenzielle Gefahr an. Wichtige Informationen über die Gefahr und
die entsprechenden Maßnahmen zur Verhinderung und Eindämmung der Gefahr finden Sie in
der Dokumentation.
Spezifische Hinweise zum Gerät
Warnung: Um Stromschläge zu vermeiden, sollten Sie die Schutzabdeckungen des
Geräts nicht entfernen. Die Geräteteile im Inneren des Geräts sind nicht dafür
vorgesehen, vom Benutzer gewartet zu werden.
Hinweise zu Strahlungsemissionen gemäß FCC
Änderungen müssen ausdrücklich durch die für die Einhaltung der vorgeschriebenen Normen
verantwortliche Instanz genehmigt werden. Anderenfalls kann dem Anwender die
Bedienungsbefugnis für das System entzogen werden. Dieses Gerät entspricht Abschnitt 15 der
Richtlinien der FCC (Federal Communications Commission). Der Betrieb des Systems unterliegt
folgenden beiden Bedingungen: (1) Dieses Gerät darf keine Interferenzen verursachen und (2)
dieses Gerät muss jegliche Interferenz aufnehmen, einschließlich Interferenzen, die
Betriebsstörungen des Geräts zur Folge haben können.
Sicherheitshinweise zum Umgang mit Strom
Das Gerät muss so aufgestellt werden, dass das Abziehen des Netzkabels keine Schwierigkeiten
bereitet.
Hinweise zum Missbrauch des Geräts
Wird das Gerät anders verwendet als vom Hersteller vorgesehen, können die
Schutzvorrichtungen des Geräts beeinträchtigt sein.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite ivSicherheitshinweise
Eine ausführliche Liste mit Warnhinweisen und Hinweisen finden Sie im Anhang
„Sicherheitshinweise“ in dieser Veröffentlichung.
Betrieb des Geräts
Halten Sie sich beim Betrieb des Geräts an die Standardverfahren zur Qualitätskontrolle sowie an
die Richtlinien in diesem Abschnitt.
Verwendete Symbole
Die folgenden Symbole können am Gerät, System oder der Verpackung vorhanden sein.
Symbol Definition
Hersteller
Herstellungsdatum
Bestätigt, dass ein hergestelltes Produkt alle
anwendbaren Richtlinien der Europäischen
Union erfüllt
Erfüllt die Anforderungen der australischen
EMV-Richtlinie
Bestätigt, dass ein hergestelltes Produkt alle
anwendbaren Sicherheitsanforderungen der
USA und Kanadas erfüllt
Umweltfreundliche Nutzungszeit (China
RoHS): Gibt die Anzahl der Jahre ab
Herstellungsdatum an, nach denen das
Produkt oder Komponenten im Produkt
wahrscheinlich weggeworfen werden oder sich
in der Umgebung verschlechtern.
Die Gebrauchsanweisung beachten
Wechselstrom
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite vSymbol Definition
Elektrische und elektronische Ausrüstung mit
diesem Symbol kann gefährliche Stoffe
enthalten und darf nicht als normaler Abfall
entsorgt werden.
Wenden Sie sich zur Einhaltung der EU-
Richtlinie für Elektro- und Elektronikaltgeräte
(WEEE) 2012/19/EU an die Waters
Corporation, um Angaben zur korrekten
Entsorgung und Anweisungen für das
Recycling zu erhalten.
Nur zur Verwendung in Innenräumen
Nicht schieben
Gibt die maximale Last an, die auf dieses
10kg
max Element gestellt werden kann (zum Beispiel 10
kg).
Seriennummer
Teilenummer, Katalognummer
REF
Zielgruppe und bestimmungsgemäße Verwendung
Dieses Handbuch richtet sich an Benutzer, die den ACQUITY PREMIER Fluoreszenzdetektor
(FLR) installieren, bedienen oder warten. Es liefert einen Überblick über die Technologie und den
Betrieb dieses Geräts.
Vorgesehener Verwendungszweck des Produkts
Waters hat den ACQUITY PREMIER FLR Detektor zur Analyse vieler Verbindungen
einschließlich diagnostischer Indikatoren und therapeutisch überwachter Verbindungen
entwickelt.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite viKalibrierung
Verwenden Sie zur Kalibrierung von LC-Systemen allgemein anerkannte Kalibrierungsverfahren
mit mindestens fünf Standards, um eine Kalibrierkurve zu erstellen. Der Konzentrationsbereich
der Standards muss den Bereich der Qualitätskontrollproben sowie den Bereich typischer und
atypischer Proben abdecken.
Anleitungen zum Kalibrieren von Massenspektrometern finden Sie im Online-Hilfesystem des
Geräts.
Qualitätskontrolle
Analysieren Sie regelmäßig drei Qualitätskontrollproben, die mittlere sowie unter bzw. über dem
Normalbereich liegende Konzentrationen einer Verbindung enthalten. Wenn Probentabletts
identisch oder einander sehr ähnlich sind, variieren Sie die Stellen der Tabletts, in die Sie die
Qualitätskontrollproben geben. Stellen Sie sicher, dass die Ergebnisse für die
Qualitätskontrollprobe innerhalb eines akzeptablen Bereichs liegen, und beurteilen Sie deren
Präzision täglich sowie nach jedem Probenlauf erneut. Die erfassten Daten können ungültig sein,
wenn die Testergebnisse der Qualitätskontrollprobe außerhalb des akzeptablen Bereichs liegen.
Berichten Sie Daten erst dann, wenn Sie sicher sind, dass das Gerät zufriedenstellend arbeitet.
EMV-Hinweise
Kanada: Hinweise zum Emissionsbereich
Dieses digitale Produkt der Klasse A entspricht der kanadischen Vorschrift ICES-001.
Cet appareil numérique de la classe A est conforme à la norme NMB-001.
ISM-Klassifikation: ISM-Gruppe 1, Klasse B
Diese Klassifizierung wurde gemäß CISPR 11, Anforderungen an industrielle, wissenschaftliche
und medizinische Geräte (ISM), zugewiesen.
Bei Produkten der Gruppe 1 kommt es zur absichtlichen Erzeugung und/oder leitenden
Koppelung von Radiofrequenzenergie, die für die interne Funktion des Geräts notwendig ist.
Produkte der Klasse B können sowohl in kommerziellen Einrichtungen als auch in
Wohnbereichen betrieben werden, die direkt an öffentliche Niederspannungsversorgungsnetze
angeschlossen sind.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite viiInhaltsverzeichnis
Allgemeine Informationen .............................................................................................ii
Hinweis zu den Urheberrechten............................................................................................................. ii
Marken ................................................................................................................................................... ii
Kundenkommentare...............................................................................................................................iii
Kontakt mit Waters aufnehmen..............................................................................................................iii
Sicherheitshinweise .............................................................................................................................. iv
Sicherheitshinweis zum Gefahrensymbol....................................................................................... iv
Spezifische Hinweise zum Gerät.................................................................................................... iv
Hinweise zu Strahlungsemissionen gemäß FCC ........................................................................... iv
Sicherheitshinweise zum Umgang mit Strom ................................................................................. iv
Hinweise zum Missbrauch des Geräts ........................................................................................... iv
Sicherheitshinweise......................................................................................................................... v
Betrieb des Geräts ................................................................................................................................. v
Verwendete Symbole....................................................................................................................... v
Zielgruppe und bestimmungsgemäße Verwendung ....................................................................... vi
Vorgesehener Verwendungszweck des Produkts .......................................................................... vi
Kalibrierung ....................................................................................................................................vii
Qualitätskontrolle............................................................................................................................vii
EMV-Hinweise.......................................................................................................................................vii
Kanada: Hinweise zum Emissionsbereich......................................................................................vii
ISM-Klassifikation: ISM-Gruppe 1, Klasse B ..................................................................................vii
1 Überblick ...................................................................................................................12
1.1 Features ........................................................................................................................................ 12
2 Theoretische Grundlagen des Betriebs .................................................................13
2.1 Theoretische Grundlagen der Fluoreszenz................................................................................... 13
2.1.1 Überblick über die Fluoreszenzerkennung .......................................................................... 14
2.1.2 Messung der Fluoreszenz ................................................................................................... 15
2.2 Literaturhinweise ........................................................................................................................... 17
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite viii3 Grundlagen des Betriebs .........................................................................................19
3.1 Detektoroptik ................................................................................................................................. 19
3.2 Anordnung des Lichtwegs in der optischen Einheit ...................................................................... 21
3.2.1 Lichtquelle............................................................................................................................ 21
3.2.2 Anregungsmonochromator .................................................................................................. 21
3.2.3 Emissionsmonochromator ................................................................................................... 21
3.2.4 Axial beleuchtete Flusszelle ................................................................................................ 21
3.3 Hinweise zur Photomultiplierröhre ................................................................................................ 22
3.3.1 Kalibrierung der Photomultiplierröhre .................................................................................. 22
3.3.2 Empfindlichkeit der Photomultiplierröhre ............................................................................. 23
3.4 Rauschfilterung ............................................................................................................................. 23
3.5 Elektronik ...................................................................................................................................... 24
3.6 Überprüfen und Testen der Wellenlängen..................................................................................... 25
3.7 Betriebsmodi ................................................................................................................................. 25
3.7.1 Einzelkanalmodus................................................................................................................ 25
3.7.2 Multikanalmodus.................................................................................................................. 26
3.7.3 3D-Modus ............................................................................................................................ 27
3.7.4 Spektrum-Scanmodus ......................................................................................................... 27
3.7.5 Spektrum Lambda-Lambda-Modus ..................................................................................... 27
3.8 Lampenenergieleistung................................................................................................................. 28
3.9 Auto-Optimize Gain (Automatische Optimierung der Verstärkung)............................................... 29
3.9.1 Methodenoptimierung .......................................................................................................... 30
3.9.2 Beispiel für den empfohlenen Ansatz zur Methodenentwicklung ........................................ 30
3.9.3 Sicherstellen der Verstärkungsoptimierung für alle interessierenden Peaks....................... 32
3.10 Diagnosetests beim Starten ........................................................................................................ 32
3.11 Entgasen der mobilen Phase ...................................................................................................... 33
3.12 Auswahl der Wellenlänge............................................................................................................ 33
4 Vorbereitung..............................................................................................................34
4.1 Bevor Sie anfangen....................................................................................................................... 34
4.2 Installieren des Detektors.............................................................................................................. 34
4.3 Anschließen des Detektors ........................................................................................................... 36
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite ix4.3.1 Einbauen der Multidetektorauffangschale ........................................................................... 39
4.4 Anschließen der Ethernet-Verbindung .......................................................................................... 43
4.4.1 E/A-Signalanschlüsse.......................................................................................................... 43
4.4.2 Einzelne Anschlüsse............................................................................................................ 45
4.5 Anschluss an die Stromversorgung .............................................................................................. 47
5 Bedienung des Detektors ........................................................................................49
5.1 Starten des Detektors ................................................................................................................... 49
5.1.1 Beobachten der LED-Anzeigen des Detektors .................................................................... 50
5.1.2 Steuerungsfeld des Detektors ............................................................................................. 51
5.2 Ausführen eines Laufs .................................................................................................................. 53
5.2.1 Erstellen der Testmethode ................................................................................................... 53
5.3 Einbauen der Küvettenzelle .......................................................................................................... 54
5.4 Abschalten des Detektors ............................................................................................................. 55
5.4.1 Abschalten zwischen den Analysen .................................................................................... 56
5.4.2 Abschalten für weniger als 72 Stunden ............................................................................... 56
5.4.3 Abschalten für mehr als 72 Stunden.................................................................................... 57
6 Wartung .....................................................................................................................58
6.1 Wartungsfaktoren .......................................................................................................................... 58
6.1.1 Sicherheitshinweise ............................................................................................................. 58
6.1.2 Ordnungsgemäße Arbeitsabläufe........................................................................................ 58
6.2 Routinemäßige Wartungsarbeiten................................................................................................. 59
6.3 Warten des Lecksensors............................................................................................................... 59
6.3.1 Beheben einer vom Detektorlecksensor gemeldeten Störung ............................................ 59
6.3.2 Austauschen des Detektorlecksensors................................................................................ 64
6.4 Wartung der Flusszelle.................................................................................................................. 65
6.4.1 Spülen der Flusszelle .......................................................................................................... 66
6.4.2 Rückspülen der Flusszelle................................................................................................... 67
6.4.3 Flusszelle wird ausgetauscht............................................................................................... 68
6.5 Austauschen der Lampe ............................................................................................................... 69
6.5.1 Ausbau der Lampe .............................................................................................................. 70
6.5.2 Einbauen der Lampe ........................................................................................................... 72
6.6 Austauschen der Sicherungen ...................................................................................................... 74
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite x6.7 Reinigen der Außenseiten des Detektors ..................................................................................... 75
A Sicherheitshinweise ................................................................................................76
A.1 Warnsymbole ................................................................................................................................ 76
A.1.1 Spezielle Warnhinweise ...................................................................................................... 77
A.2 Hinweise ....................................................................................................................................... 79
A.3 Symbol „Flaschen verboten“......................................................................................................... 79
A.4 Erforderlicher Schutz .................................................................................................................... 79
A.5 Warnungen, die sich auf alle Geräte von Waters beziehen.......................................................... 80
A.6 Warnungen, die den Ersatz von Sicherungen betreffen ............................................................... 84
A.7 Elektrische Symbole ..................................................................................................................... 85
A.8 Transportsymbole ......................................................................................................................... 86
B Technische Daten.....................................................................................................88
B.1 Anforderungen an die Umgebung................................................................................................. 88
B.2 Elektrische Daten.......................................................................................................................... 88
B.3 Leistungsdaten ............................................................................................................................. 89
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite xi1 Überblick
Der ACQUITY PREMIER Fluoreszenzdetektor (FLR) ist ein abstimmbarer Mehrkanal-Detektor,
der für ACQUITY PREMIER Systemapplikationen entwickelt wurde.
1.1 Features
Der ACQUITY PREMIER FLR Detektor arbeitet im Bereich von 200 bis 900 nm. Die verwendete
Optik weist eine verbesserte Lichtintensität auf und ist für ACQUITY PREMIER Systeme
optimiert. Die folgenden Konstruktionsmerkmale erhöhen sowohl den optischen Durchsatz als
auch die Empfindlichkeit und führen insgesamt zu einer Verbesserung des Signal/Rausch-
Verhältnisses.
• Hohe Datenraten – Gewährleistung der Kompatibilität mit schmalen UPLC-Peaks.
• Geringes Zellvolumen – Vermeidet Bandenverbreiterung und hält die Konzentration aufrecht.
• Einzel- oder Multikanalmodus – Misst die Fluoreszenz bei einem oder mehreren diskreten
Wellenlängenpaaren.
• Integrierte Erbium-Kalibrierreferenz – Gewährleistet Wellenlängengenauigkeit.
• Automatischer Filter zweiter Ordnung – Wird automatisch für Wellenlängen von 400 nm und
größer aktiviert und bei Wellenlängen von 399 nm oder weniger deaktiviert.
• Anzeige für Spektrenscan und -speicherung – Unterstützt auch Scan, Anzeige und
Subtraktion von Spektren neben den abstimmbaren Standardfluoreszenzfunktionen.
• Normalisierte Emissionseinheiten – Verbesserte geräteübergreifende Reproduzierbarkeit.
• Wartezustand – Schließt eine Verschlussblende, um eine Verschlechterung der Optik zu
vermeiden.
• 3D-Modus – Scannt das Emissionsgitter, das Anregungsgitter oder beides dynamisch über
einen auswählbaren Wellenlängenbereich, um die Fluoreszenz einer Reihe von Wellenlängen
zu überwachen, wodurch die Produktion von 3D-Daten ermöglicht wird.
• Modus Spektrum λ-λ – Erzeugt ein Spektrum, das die Analytenfluoreszenz über die
Anregungs-/Emissionsachsen hinweg charakterisiert.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 122 Theoretische Grundlagen des
Betriebs
In diesem Abschnitt werden Theorie und Technologie erklärt, die dem Betrieb des ACQUITY
PREMIER FLR Detektors zugrundeliegen.
2.1 Theoretische Grundlagen der Fluoreszenz
Fluoreszenz tritt auf, wenn bestimmte Moleküle Licht bestimmter Wellenlängen absorbieren und
dadurch in einen Zustand höherer Energie versetzt werden. Bei der Rückkehr in den normalen
Energiezustand setzen die angeregten Moleküle die absorbierte Energie als Photonen frei.
Viele organische Verbindungen absorbieren Licht, jedoch nur wenige fluoreszieren. LC-Systeme,
die mit einem Fluoreszenzdetektor ausgestattet sind, können polyaromatische
Kohlenwasserstoffe, Aflatoxine, Vitamine, Aminosäuren usw. effektiv identifizieren. Mithilfe von
Methoden zur chemischen Derivatisierung kann die Fluoreszenzdetektion auch auf einige nicht
fluoreszierende Verbindungen wie z.B. Carbamatpestizide ausgeweitet werden.
Die Fluoreszenzdetektion erfordert beide Anregungs-/Emissionswellenlängen, was zu einer
höheren Empfindlichkeit führt. Daher ist diese Technik bei Analysen sinnvoll, die niedrige
Nachweisgrenzen erfordern.
Bestimmte Bedingungen können die Fluoreszenzeigenschaften einer Verbindung beeinträchtigen
und die Analyseleistung schmälern:
• Änderungen des pH-Werts – Der Verlust oder Gewinn von Protonen und die damit
einhergehende Zunahme oder Abnahme der Ladung beeinflussen die Elektronenstruktur
eines Analyten und können die Fluoreszenz verstärken oder herabsetzen.
• Temperaturänderungen – Die Fluoreszenz nimmt mit steigender Probentemperatur ab.
• Änderungen der Menge gelösten Sauerstoffs – Bei manchen Molekülen findet in Gegenwart
gelösten Sauerstoffs ein Quenching (eine Abnahme) der Fluoreszenz statt.
Fluoreszenzdetektoren können auch zur Messung von Chemilumineszenz eingesetzt werden.
Hierbei gibt ein Molekül Strahlung niedriger Intensität ab, ohne einer Anregungsenergie
ausgesetzt zu sein. Dieser Detektionstyp wird durchgeführt, indem entweder die Lichtquelle
ausgeschaltet oder (wie beim 2475 Detektor) eine Verschlussblende aktiviert wird, die verhindert,
dass Anregungslicht die Flusszelle erreicht.
Neben der Anregungsquelle, die für die Fluoreszenzdetektion benötigt wird, finden im Gerät die
folgenden Prozesse statt:
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 13• Filtern des Anregungslichts
• Anregung der Probe mit gefiltertem Licht
• Sammeln und Filtern der emittierten Fluoreszenzstrahlung
• Messung der emittierten Fluoreszenzstrahlung
• Verstärkung des emittierten Signals
2.1.1 Überblick über die Fluoreszenzerkennung
Während des Scanvorgangs wird eine Probe im Fluoreszenzdetektor mit Licht schmaler
Bandbreite und hoher Intensität bestrahlt. Der Detektor misst dann die geringe
Fluoreszenzstrahlung, die von der Probe emittiert wird. Das emittierte Licht wird gefiltert, verstärkt
und in elektrische Signale umgewandelt, die dann aufgezeichnet und analysiert werden können.
2.1.1.1 Anregungsquellen
Eine Lampe, die ein intensives, stabiles Lichtspektrum im ultravioletten (UV) und sichtbaren
Bereich liefert, ist die typische für den Fluoreszenznachweis verwendete Energiequelle. Die
resultierende Fluoreszenzintensität steht in direktem Verhältnis zur Intensität des
Anregungsspektrums. Deshalb wird bei hochempfindlichen Detektoren die stärkste, verfügbare
Anregungsquelle verwendet.
2.1.1.2 Arten der Lichtquellen
Gebräuchliche Breitband-Anregungslichtquellen sind unter anderem Xenon- und Quecksilber-
Xenon-Lampen. Xenonlampen sind die bevorzugte Quelle für Universal-Fluoreszenzdetektoren.
Die Quecksilber-Xenon-Bogenlampe im FLR Detektor hat den zusätzlichen Vorteil einer höheren
Intensität bei bestimmten Emissionsbändern.
2.1.1.3 Auswahl der Anregungswellenlänge
Zur Einstellung der gewünschten Anregungswellenlänge muss das Licht der Anregungsquelle
gefiltert werden. Moderne Detektoren verwenden für den gleichen Zweck üblicherweise einen
Monochromator.
Ein Monochromator lässt sich so einstellen, dass Wellenlängen über einen weiten Bereich des
Spektrums ausgewählt werden können. In einem Gittermonochromator wird ein Beugungsgitter
verwendet, das nur einen kleinen Wellenlängenbereich - eine kleine Bandbreite - passieren lässt.
Durch Bewegen des Gitters können Wellenlängen innerhalb eines bestimmten
Wellenlängenbereichs gewählt werden. Außer der gewählten Wellenlänge lässt der
Gittermonochromator außerdem noch Licht höherer Ordnung passieren. Wenn der
Monochromator beispielsweise so eingestellt ist, dass er Licht einer Energie entsprechend
600 nm passieren lässt, so lässt er außerdem auch Energie der Wellenlänge zweiter Ordnung
von 300 nm passieren. Diese von einem Monochromator generierte Energie höherer Ordnung
kann mithilfe eines Langpassfilters absorbiert werden. Ebenso wie der Monochromator die
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 14Anregung wählt, kann er auch die Emission (abgestrahlte Energie) auswählen. Detektoren mit
Anregungs- und Emissionsmonochromatoren können Messungen durchführen, bei denen ein
Monochromator bei einer konstanten Einstellung gehalten wird, während die Einstellung des
anderen variiert wird. Diese Betriebsart wird bei der Auswertung von Gemischen oder der
Analyse chemischer Strukturen benötigt.
2.1.1.4 Anregung der Probe
Der von der Lampe erzeugte breite Bereich von Licht hoher Intensität wird durch einen Filter oder
Monochromator geleitet, der einen schmalen Wellenlängenbereich auswählt. Dieser schmale
Wellenlängenbereich wird dann zur Flusszelle geleitet, wo er die Analyten beim Durchlaufen der
Flusszelle anregt. Die Anregungswellenlängen stimmen häufig mit den Absorptionswellenlängen
der entsprechenden Analytmoleküle überein.
2.1.1.5 Flusszelle
Die Quarz-Flusszelle minimiert die Streulichtmenge, die die Messung beeinträchtigen kann.
Dadurch wird die Intensität des Fluoreszenzsignals maximiert. Der Probenraum ist so
angeordnet, dass die Fluoreszenzenergie im rechten Winkel zum Anregungsstrahl (der Lampe)
gesammelt wird. Durch diese Anordnung wird der Effekt der Rayleigh-Streuung auf die Intensität
des Hintergrundlichts minimiert.
2.1.1.6 Küvettenzelle
Der PREMIER FLR Detektor mit der Quecksilber-Xenon-Lampe kann eine höhere Empfindlichkeit
liefern, als dies mit herkömmlichen Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographiesystemen (HPLC)
möglich ist. Jedoch kann es aufgrund des neuen Energieprofils erforderlich sein, das
Anregungsspektrum der Analyten erheblich zu verschieben, um es mit den Energiebändern der
Quecksilber-Xenon-Lampe in Einklang zu bringen. Daher muss eine traditionelle HPLC-
Detektionsmethode für den PREMIER FLR Detektor optimiert werden. Um optimierte Werte zu
bestimmen, können Sie den Anregungs- und Emissionswellenlängenbereich mit der
Küvettenzelle scannen und die Spektrumdarstellung in der ACQUITY PREMIER Konsole oder in
der Empower Software mithilfe der Funktion Spectrum λ-λ plot (Spektrum λ-λ Plot) anzeigen.
2.1.2 Messung der Fluoreszenz
Zur Fluoreszenzmessung in der Flusszelle muss der Detektor einen guten Kompromiss aus der
Anforderung an eine hohe Selektivität (Auflösungsvermögen von stark unterschiedlichen
Fluoreszenzwellenlängen) und Empfindlichkeit (Messung von Fluoreszenz niedriger Intensität)
bieten.
2.1.2.1 Quantifizierung
Bei niedrigen Konzentrationen verhält sich die Fluoreszenz linear, kann jedoch bei hohen
Konzentrationen Nichtlinearitäten aufweisen.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 152.1.2.2 Auswahl der Emissionswellenlänge
Ein Monochromator wählt die Emissionswellenlänge aus.
2.1.2.3 Photomultiplierröhre
Die Photomultiplierröhre (PMT) erzeugt einen Strom, der proportional zum Photonenfluss ist, der
von den Molekülen in der Flusszelle emittiert wird.
2.1.2.4 Scannen
Detektoren, die mit Anregungs- und Emissionsmonochromatoren ausgestattet sind, können einen
Bereich an Anregungs- oder Emissionswellenlängen scannen. Die entsprechenden Wellenlängen
werden durch eine Änderung der Monochromatoreinstellungen ausgewählt. Während eines
Scans wird die Einstellung des einen Monochromators konstant gehalten, während der andere
einen Wellenlängenbereich scannt.
2.1.2.5 Multikanalbetrieb
Detektoren, die mit Anregungs- und Emissionsmonochromatoren ausgestattet sind, können die
Wellenlänge der Anregungs- und Emissionseinstellungen ändern. Im Multikanalbetrieb bewegen
sich beide Monochromatoren schnell zwischen den ausgewählten Wellenlängenpaaren und
erzeugen auf diese Weise mehrere Chromatogrammsignale. Mithilfe dieser verschiedenen
Signale können dann zusätzliche Informationen aus einer einzigen Trennung abgeleitet werden.
2.1.2.6 Fluoreszenzdaten
Die Detektoren geben ihre Daten in Einheiten der Fluoreszenzintensität (Emission) oder -energie
aus. Zusätzlich gibt der PREMIER FLR Detektor die Intensität auch als normalisierte Einheiten
aus, um Unterschiede zwischen unterschiedlichen Detektoren zu kompensieren und eine
altersbedingte Abnahme der Lampenintensität auszugleichen. Bei Verwendung normalisierter
Einheiten wird das Signal/Rausch-Verhältnis durch eine Änderung der Verstärkung verbessert.
Da durch diesen Vorgang das Peaksignal jedoch nicht verändert wird, ergibt sich bei
Fluoreszenzsignalmessungen mit unterschiedlichen Geräten ein hohes Maß an
Reproduzierbarkeit.
2.1.2.6.1 Emissionseinheiten und Normalisierung
Der PREMIER FLR Detektor bietet die Möglichkeit Messsignale in zwei unterschiedlichen
Einheiten auszugeben: Emission und Energie. Emissionseinheiten werden auf Wasser als
Referenzstandard normalisiert, so dass diese so unabhängig wie möglich von der jeweiligen
PMT-Verstärkung sind. Auch Veränderungen, die normalerweise die Signalstärke von
Fluoreszenzmessungen beeinflussen wie Verschlechterungen der Lampe oder Optik, können
durch eine regelmäßige Normalisierung auf Wasser als Referenzstandard kompensiert werden.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 16Die regelmäßige Normalisierung reduziert die Schwankungen der Fluoreszenzsignalstärke, die
zwischen unterschiedlichen Detektoren auftreten.
Mit folgender Gleichung lässt sich der Wert in Emissionseinheiten (Emission Units; EU) zu einem
beliebigen Zeitpunkt (t) berechnen:
Dabei gilt:
• VerstärkungRaman und ZählimpulseRaman = Werte, die bei der letzten Normalisierung ermittelt
wurden
• PMT-Zählimpulset und Verstärkungt = Werte zum Zeitpunkt der Datensammlung
Die Normalisierung der Emissionseinheiten ergibt eine Wasser/Raman-Signalstärke, bei Ex
365 nm/Em 416 nm, von 100 Emissionseinheiten. Die Spektralleistung der Quecksilber-
Xenonlampe ist nicht über den gesamten Betriebsbereich des Detektors gleichförmig und
Wellenlängen im niedrigen UV-Bereich können sich schneller verschlechtern als
Normalisierungswellenlängen.
2.1.2.6.2 Energieeinheiten
Die Alternative zu Emissionseinheiten sind Energieeinheiten, die den Einheiten entsprechen, die
bei herkömmlichen HPLC-Fluoreszenzdetektoren verwendet werden. Sie korrelieren direkt mit
dem Anodenstrom der Photomultiplierröhre und werden daher direkt von der
Verstärkungseinstellung beeinflusst. Alle Gerätevariablen, wie Lampenintensität, Effizienz der
Optik und Verstärkung, beeinflussen die Stärke des Fluoreszenzemissionssignals direkt. Daher
sind Energieeinheiten weniger zuverlässig. Wenn zur Einhaltung anerkannter Protokolle jedoch
Energieeinheiten berechnet werden müssen, können Sie die folgende Gleichung anwenden:
wobei der Faktor K das maximale messbare Fluoreszenzsignal auf 10000 Einheiten normiert.
2.2 Literaturhinweise
Weitere Informationen zur Fluoreszenzdetektion finden Sie in den folgenden Veröffentlichungen:
N. Ichinose, G. Schwedt, F. M. Schnepel, and K. Adachi, Fluorometric Analysis in Biomedical
Chemistry, Chapter 5, Wiley-Interscience: New York, 1991.
E. S. Yeung, ed., Detectors for Liquid Chromatography, Chapter 5, Wiley: New York, 1986.
W. R. Seitz, in Treatise on Analytical Chemistry, 2nd ed., P. J. Elving, E. J. Meehan, I. M. Kolthoff,
eds., Part I, Vol. 7, Chapter 4, Wiley: New York, 1981.
J. R. Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy, Plenum: New York, 1983.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 17S. G. Schulman, Fluorescence and Phosphorescence Spectroscopy : Physicochemical Principles
and Practice, Pergamon Press: New York, 1977.
J. D. Winefordner, S. G. Schulman, and T. C. O’Haver, Luminescence Spectroscopy in Analytical
Chemistry, Wiley-Interscience: New York, 1972.
20. Oktober 2020, 715006949DE Version 00
Seite 183 Grundlagen des Betriebs
Um den Detektor erfolgreich zu bedienen, machen Sie sich mit der optischen und elektronischen
Ausführung des Detektors sowie mit der Theorie und den Grundlagen des Betriebs vertraut.
Dieser Abschnitt beschreibt unter anderem die Optik des Detektors und den
Wellenlängenüberprüfungsprozess und -test.
3.1 Detektoroptik
Die Optik basiert auf zwei abstimmbaren Monochromatoren und beinhaltet folgende
Komponenten:
• Quecksilber-Xenon-Bogenlampe
• Zwei ellipsenförmige Spiegel und ein Parabolspiegel
• Verschlussblende, Wellenlängenkalibrierfilter und Filter zweiter Ordnung
• Eintrittspalten
• Austrittspalten
• Ebene und konkave holographische Blaze-Beugungsgitter
• PMT
• Axial beleuchtete Flusszelle von Waters
Die folgenden Diagramme zeigen die Lichtwege und Komponenten der optischen Einheit.
Abbildung 3–1: Optische Einheit des Anregungsmonochromators
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Seite 19Quecksilber-Xenon-Lampe
Filterrad
Gitter
Parabolspiegel
Austrittspalt
Flusszelle
Eintrittspalt
Ellipsenförmiger Spiegel
Abbildung 3–2: Optische Einheit des Emissionsmonochromators
PMT
Ellipsenförmiger Spiegel
Austrittsmaske der Flusszelle
Flusszelle
Eintrittspalt
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Seite 20Gitter
Austrittspalt
3.2 Anordnung des Lichtwegs in der optischen Einheit
Der ACQUITY PREMIER FLR Detektor, optimiert für ACQUITY PREMIER Systeme, zeigt
überragende Leistung dank mehrerer einzigartiger Designelemente. Die neuartige Konstruktion
der Flusszelle minimiert das Hintergrundstreulicht und verbessert die Detektion von Signalen
geringer Intensität. Durch eine bewusst einfach gehaltene Optik lässt sich der Signalverlust
minimieren und der Durchsatz maximieren.
3.2.1 Lichtquelle
Bei dem Detektor wird eine sehr starke Quecksilber-Xenon-Bogenlampe mit 150 W als
Lichtquelle verwendet. Das emittierte Licht durchläuft den Anregungsmonochromator und fällt auf
die Blende der Flusszelle. Das Licht der Lampe wird hinter der Lampe von einem elliptischen
Spiegel gesammelt, dessen Krümmungsmittelpunkt auf den hellsten Punkt der Lampe gerichtet
ist.
3.2.2 Anregungsmonochromator
Der Detektor arbeitet mit einem Monochromator, um die geeigneten, durch seine Geometrie
definierten Anregungswellenlängen auszuwählen. Das Gitter kann schnell rotieren und so auf
multiple Anregungswellenlängen, Scanning oder beides reagieren.
3.2.3 Emissionsmonochromator
Das von der Probe emittierte Licht tritt aus der Oberseite der Flusszelle aus und gelangt in die
Emissionsoptik. Die Emissionsoptik ist rechtwinklig zur Anregungsquelle ausgerichtet, um
möglichst auszuschließen, dass Streulicht die Photomultiplierröhre (PMT) erreicht. Der
Emissionsmonochromator wählt die geeigneten Emissionswellenlängen aus.
3.2.4 Axial beleuchtete Flusszelle
Die Konstruktion umfasst eine axial beleuchtete Flusszelle aus Quarzglas.
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Seite 21Abbildung 3–3: Axial beleuchtete Flusszelle
Linse
Emissionsenergie
Quarzfenster
Spiegel
Flüssigkeitsaustritt
Spiegel
Flüssigkeitseintritt
Anregungsenergie
Die Anregungsenergie wird auf einen geometrisch angepassten Spiegel fokussiert, dessen Form
das Gegenstück zur Form der Eintrittslinse für die Anregungsenergie bildet. Die
Anregungsenergie wird entlang der Achse der Flusszelle und zurück reflektiert, sodass die
Weglänge der Zelle praktisch verdoppelt wird. Die erhöhte Weglänge führt im Vergleich zu
herkömmlichen Fluoreszenzdetektoren zu einer ausgezeichneten Empfindlichkeit.
3.3 Hinweise zur Photomultiplierröhre
3.3.1 Kalibrierung der Photomultiplierröhre
Die Empfindlichkeit des Detektors wird durch die Verstärkungseinstellung gesteuert, wodurch die
Spannung zur Photomultiplierröhre erhöht und so das Signal verstärkt wird. Durch die Steuerung
der Hochspannungsversorgung der Photomultiplierröhre wird die Verstärkung erreicht. Nach der
Montage und Einrichtung des Detektors sowie nach einem Austausch der Photomultiplierröhre
oder einer PC-Platine wird die Kalibrierung der Photomultiplierröhre von Waters Mitarbeitern
mithilfe integrierter Service-Diagnosefunktionen vorgenommen.
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Seite 223.3.2 Empfindlichkeit der Photomultiplierröhre
Nach Kalibrierung der Photomultiplierröhre (PMT) muss vor einer chromatographischen Injektion
eine Verstärkungseinstellung für die PMT gewählt werden. Ein wichtiger Punkt ist dabei stets eine
mögliche Sättigung, die auftritt, wenn die Konzentration der Probe zu hoch ist oder die mobile
Phase im Experiment ein starkes Hintergrundrauschen hat - und zwar selbst dann, wenn die
Verstärkung der PMT auf den niedrigsten Wert eingestellt ist. Aus diesem Grund verfügt der
Detektor über die Diagnosefunktion Auto Optimize Gain (Autom. Optimierung der Verstärkung),
mit der Sie den Grad der Verstärkung einstellen können.
3.4 Rauschfilterung
Zur Minimierung des Rauschens verwendet der Detektor einen digitalen Filter.
Niedrigere Einstellungen der Zeitkonstante bewirken Folgendes:
• Schmale Peaks treten mit einer minimalen Peakverzerrung und zeitlichen Verzögerung auf.
• Sehr kleine Peaks sind schwieriger vom Basislinienrauschen zu unterscheiden
• Es wird weniger Basislinienrauschen entfernt.
Höhere Einstellungen der Zeitkonstante bewirken Folgendes:
• Das Basislinienrauschen wird in starkem Maße verringert
• Verkürzte und verbreiterte Peaks
Die Software verfügt bei jeder Datenrate über schnelle, normale oder langsame Filterkonstanten,
die für Anwendungen mit hoher Geschwindigkeit bzw. hoher Empfindlichkeit geeignet sind.
Die folgende Abbildung zeigt die Beziehung zwischen einer erhöhten Zeitkonstante und den
Reaktionszeiten.
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Seite 23Abbildung 3–4: Wirkung der Filterzeitkonstante
Signal
Zeit (Minuten)
3.5 Elektronik
Die Detektorelektronik besteht aus den folgenden Komponenten:
• Vorverstärkerplatine – Sammelt und prozessiert die analogen Eingangssignale der PMT und
Photodiode und leitet sie zur weiteren Signalbearbeitung an den Mikroprozessor. Proben- und
Referenzsignale werden integriert und gleichzeitig wird eine Analog/Digital-Umwandlung
durchgeführt. Diese Komponente gewährleistet eine optimale Beseitigung von
Gleichtaktrauschen in den beiden Strahlen und schafft eine ruhige Basislinie.
• Personality Platine – Empfängt Eingabesignale vom Vorverstärker und externen Ereignissen.
Außerdem steuert sie die Subsysteme zur Steuerung der Optik und die Stromversorgung der
Lampe.
• CPU-Platine – Enthält den Digitalsignalprozessor, die Kommunikationsanschlüsse, den nicht
flüchtigen (batteriegepufferten) RAM-Speicher und den Flash-RAM-Speicherplatz, in dem sich
die Firmware befindet.
• Ethernet-Kommunikationsschnittstelle – Ermöglicht dem Detektor die Kommunikation mit der
Steuerungssoftware.
• Stromversorgung der Lampe – Sorgt für einen stabilen Betrieb der Quecksilber-Xenonlampe.
• Gleichstromversorgung – Versorgt die analogen und digitalen Schaltkreise des Detektors mit
Spannung.
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Seite 243.6 Überprüfen und Testen der Wellenlängen
Die Quecksilber-Xenon-Bogenlampe und der eingebaute Erbiumfilter weisen im
Transmissionsspektrum Peaks bei bekannten Wellenlängen auf. Nach dem Einschalten wartet
der Detektor 5 Minuten, bis sich die Quecksilber-Xenonlampe erwärmt und stabilisiert hat. Dann
überprüft der Detektor die Kalibrierung durch einen Vergleich der Positionen dieser Peaks mit den
gespeicherten Kalibrierungsdaten. Wenn die Ergebnisse dieser Überprüfung um mehr als ±2,0
nm von der gespeicherten Kalibrierung abweichen, zeigt der Detektor eine Fehlermeldung für die
Wellenlängenprüfung an. Mit dieser Meldung wird darauf hingewiesen, dass eine manuelle
Wellenlängenkalibrierung notwendig ist. Der Detektor führt anstatt einer Rekalibrierung eine
Überprüfung durch, um Fehler zu vermeiden, die durch Rückstände in der Flusszelle verursacht
werden. Für die Kalibrierung ist eine saubere Flusszelle und eine transparente mobile Phase
erforderlich. Sie können jederzeit eine manuelle Wellenlängenkalibrierung starten, um die
vorhandenen Kalibrierungsdaten durch neue Daten zu ersetzen.
Hinweis: Die kombinierte Spezifikation für die Wellenlängengenauigkeit des Detektors ist
±3,0 nm, die Wellenlängengenauigkeit der einzelnen Gitter beträgt jedoch ±2,0 nm.
Wenn sich der Detektor im Dauerbetrieb befindet, sollte die Wellenlängenüberprüfung
wöchentlich durchgeführt werden. Schalten Sie hierzu den Detektor aus und wieder ein, oder
führen Sie die Funktion zur Wellenlängenkalibrierung über die Konsole aus. Für die
Überprüfungstests sind 5 Minuten Aufwärmen der Lampe zur Stabilisierung der Lampe
erforderlich.
3.7 Betriebsmodi
Der PREMIER FLR Detektor kann im Einzel- oder Multikanalmodus betrieben werden, gestattet
Spektrenscans unter Verwendung einer Flusszelle und bietet die Funktionen Difference Plot
(Differenzplot) und MaxPlot (Maximaldarstellung).
3.7.1 Einzelkanalmodus
Der Detektor ist auf den Einzelkanalmodus voreingestellt, in dem ein Anregungs-/
Emissionswellenlängenpaar über einen einzelnen Kanal gemessen wird. Die
Anregungswellenlänge kann auf Kanal A zwischen 200 und 890 nm festgelegt werden.
Im Einzelkanalmodus setzt der Detektor automatisch den Filter zweiter Ordnung für
Anregungswellenlängen von 400 nm und darüber ein und deaktiviert ihn für Wellenlängen unter
399 nm. Der Filter zweiter Ordnung ist ein optischer Filter, der unerwünschtes UV-Licht, das die
Fluoreszenzdetektion bei 400 nm und darüber stören kann, am Erreichen des Beugungsgitters
hindert.
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Seite 253.7.1.1 Wahl einer geeigneten Abtastrate
Um die Form eines Peaks zu definieren, muss eine ausreichende Anzahl an Datenpunkten
verfügbar sein. Aus diesem Grund geht die Definition der einzelnen Peaks bei sehr niedrigen
Frequenzen der Datenpunktnahme verloren. Die Empower Software verwendet den
Datenpunktindex, der der Endzeit am nächsten liegt, abzüglich des Datenpunktindexes, der der
Anfangszeit am nächsten liegt, um den Wert Points Across Peak (Punkte über Peak) für jeden
integrierten Peak im Chromatogramm zu berechnen.
Tipp: Der Wert für Points Across Peak (Punkte über Peak) wird in der Tabelle Peaks unten im
Hauptfenster Review angezeigt. Wenn das Feld Points Across Peak (Punkte über Peak) nicht
angezeigt wird, klicken Sie mit der rechten Maustaste auf einen beliebigen Bereich innerhalb der
Tabelle und klicken Sie dann auf Table Properties (Tabelleneigenschaften). Klicken Sie auf die
Registerkarte Columns (Spalten) und scrollen Sie nach unten bis zum Feld Points Across Peak
(Punkte über Peak). Deaktivieren Sie das Kontrollkästchen, und klicken Sie dann auf OK.
Wenn der Wert Points Across Peak (Punkte über Peak) für den schmalsten interessierenden
Peak weniger als 25 beträgt, müssen Sie eine höhere Abtastrate in der Instrumentenmethode
auswählen. Wenn der Wert mehr als 50 beträgt, verwenden Sie in der Instrumentenmethode eine
niedrigere Frequenz der Datenpunktnahme.
Legen Sie die Abtastrate auf den niedrigsten Wert fest, der zum Erfassen von 25 oder mehr
Punkten im schmalsten Peak benötigt wird. Zu hohe Abtastraten weisen ein höheres
Rauschniveau auf.
3.7.2 Multikanalmodus
Im Multikanalmodus (Multiwellenlängenmodus) beobachtet der Detektor zwei oder mehr
Anregungs-/Emissionswellenlängenpaare. Die Frequenz der Datenpunktnahme wird reduziert,
wodurch der Einsatz dieses Modus eher auf chromatographische Standardanwendungen
begrenzt ist, bei der die Peaks nicht übermäßig schmal sind. Sie können den Multikanalmodus
einsetzen, um zusätzliche Informationen über einen Analyten zu erhalten, indem Sie einen
Difference Plot (Differenzplot) oder MaxPlot (Maximaldarstellung) ausführen. Es ist möglich bis
zu vier Anregungswellenlängen von 200 bis 890 nm und bis zu vier Emissionswellenlängen von
210 bis 900 nm auszuwählen. Stellen Sie für ein optimales Signal/Rausch-Verhältnis eine
Verstärkung ein, bei der der dynamische Bereich der Elektronik maximiert wird.
Tipp: Eine zu hohe Verstärkung überlastet den Vorverstärker und führt zu oben abgeschnittenen
(gekappten) Peaks und einem Warnalarm.
3.7.2.1 MaxPlot
Im Multikanalmodus können Sie mit dem Detektor einen MaxPlot (Maximaldarstellung) erstellen.
Die Funktion MaxPlot (Maximaldarstellung) erfasst die Fluoreszenz bei den gewählten
Anregungs-/Emissionswellenlängenpaaren und stellt den maximalen Fluoreszenzsignalwert für
jede Probenkomponente dar. Der MaxPlot (Maximaldarstellung) gibt den größeren der
Fluoreszenzwerte auf den gewählten Kanälen aus.
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Seite 26Siehe auch: ACQUITY PREMIER Online-Hilfe der Konsole.
3.7.2.2 Differenzplot
Im Multikanalmodus können Sie mit dem Detektor einen Differenzplot erstellen. Die Funktion
Difference Plot (Differenzplot) erfasst die Fluoreszenz bei vom Benutzer gewählten Anregungs-/
Emissionswellenlängenpaaren und stellt die Signalwertdifferenz zwischen diesen dar.
Siehe auch: ACQUITY PREMIER Online-Hilfe der Konsole.
3.7.3 3D-Modus
Der Detektor sammelt 3D-Daten (entweder Emissions- oder Anregungsscans) und speichert
diese in Dateien, aus denen Sie 2D-Chromatogramme extrahieren, Wellenlängenselektionen für
bestimmte Anwendungen auswählen und optimieren und durchsuchbare Bibliotheken erstellen
können. Die Auflösung ist in der Regel höher als bei den Scanmodi mit angehaltenem Fluss.
3.7.4 Spektrum-Scanmodus
Der PREMIER FLR Detektor kann als Fluorimeter eingesetzt werden, um Spektren aufzunehmen
und in einer Datei zu speichern. Der Hauptunterschied zwischen diesem Detektor und einem
Zweistrahlspektralphotometer besteht darin, dass bei diesem Detektor nur eine Flusszelle
eingesetzt wird anstelle eines Paares aus Proben- und Referenzflusszelle. Zur Messung eines
Fluoreszenzspektrums führt der Detektor die folgenden Scanarten mit der Flusszelle durch:
• Zero scan (Null-Scan) – Misst das Basislinien-Absorptionsspektrum eines Lösungsmittels.
• Excitation sample scan (Anregungsscan der Probe) – Zieht den Nullwertscan ab, so dass als
Ergebnis nur die Anregungsspektren der Probe angezeigt bzw. als Diagramm aufgetragen werden.
• Emission sample scan (Emissionsscan der Probe) – Zieht den Nullwertscan ab, so dass als
Ergebnis nur die Emissionsspektren der Probe angezeigt bzw. angegeben werden.
Um ein Anregungs- oder Emissionsspektrum einer Probe zu erhalten, führen Sie zunächst einen
Nullwertscan aus, gefolgt vom betreffenden Probenscan. In der Regel führen Sie einen Null-Scan
mit reinem Lösungsmittel und einen Probenscan mit dem Analyten, der im gleichen Lösungsmittel
gelöst ist, durch.
3.7.5 Spektrum Lambda-Lambda-Modus
Mithilfe des Spektrum Lambda-Lambda-Modus des PREMIER FLR Detektors (λ-λ) können Sie
Fluoreszenzmaximalwerte für Unbekannte festlegen und diese verwenden, um rasch
herkömmliche retentionszeitbasierte chromatographische Methoden zu entwickeln. Der Modus
Spektrum λ-λ erzeugt ein Spektrum, das die Analytenfluoreszenz über die Anregungs-/
Emissionsachsen hinweg charakterisiert. Unter statische Flussbedingungen scannt der Detektor
einen bestimmten Bereich von Emissionswellenlängen über einen bestimmten Bereich von
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