SARS-COV-2 RNA STAR COMPLETE - GEBRAUCHSANWEISUNG - LUMIRADX
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SARS-CoV-2
RNA STAR Complete
Gebrauchsanweisung
L018180501096
SD-COM-ART-00106 Rev. 1 2021/06
1
BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30213 Rev. 1| SD-COM-ART-00103 Rev. 1| JUNI2021
Inhalt
1. Bestimmungsgemäße Verwendung .................................................................................................................. 5
2. Zusammenfassung und Erläuterung .................................................................................................................. 5
3. Grundsätze des Verfahrens................................................................................................................................ 5
4. Erforderliche Materialien (mitgeliefert)............................................................................................................ 6
5. Erforderliche (aber nicht mitgelieferte) Materialien ........................................................................................ 6
6. Warnung und Vorsichtsmaßnahmen ................................................................................................................ 7
7. Reagenzienlagerung, -handhabung und -stabilität ........................................................................................... 7
8. Entnahme, Handhabung und Lagerung von Proben ......................................................................................... 8
8.1 Sammeln von Proben ................................................................................................................................... 8
8.2 Proben transportieren ................................................................................................................................. 8
8.3 Aufbewahrung von Proben .......................................................................................................................... 8
9. LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Vorbereitung ............................................................................... 9
9.1 Qualitätskontrollen ...................................................................................................................................... 9
9.2 Probenvorbereitung ..................................................................................................................................... 9
9.3 qSTAR-Richtlinien ......................................................................................................................................... 9
9.4 qSTAR Reagenzvorbereitung ..................................................................................................................... 10
9.5 Eigenständige Anweisungen für die Verarbeitung eines einzelnen Tupferformats ................................ 10
9.6 Eigenständige Anleitung zur Probenverarbeitung im Deepwell-Format ................................................. 11
10. RNA STAR Complete-Setup für RocheTM LightCycler 480 II......................................................................... 12
10.1 Programmieren des Run Templates und desSample Templates............................................................ 12
10.2 Programmierung des Ersten Laufs ........................................................................................................... 14
10.3 Analyse- Template erstellen .................................................................................................................... 15
10.4 Verwenden des Run- / Sample- / Analysis-Template ............................................................................. 16
11. RNA STAR Complete-Setup für Applied BiosystemsTM 7500 Fast Dx.......................................................... 17
11.1 Programmieren dessRun-Templates ....................................................................................................... 17
11.2 Programmierung der Läufe und Analyse mittels einesTemplates ......................................................... 20
12. RNA STAR Complete-Setup für Applied BiosystemsTM QuantStudio 5....................................................... 21
12.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 21
12.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 24
13. RNA STAR Complete-Setup für Applied BiosystemsTM QuantStudio 7 Flex ............................................... 25
13.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 25
13.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 27
14. RNA STAR Complete-Setup für Applied BiosystemsTM QuantStudio 7 Pro ................................................ 28
14.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 28
14.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 30
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
15. RNA STAR Complete-Setup für Bio-Rad CFX96 Touch System ..................................................................... 32
15.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 32
15.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 35
16. RNA STAR Complete-Setup für AgilentTM AriaMx ....................................................................................... 36
16.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 36
16.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 38
17. RNA STAR Complete-Setup für AgilentTM Stratagene Mx3005P................................................................. 40
17.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 40
17.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 42
18. RNA STAR Complete-Setup für Analytic Jena qTOWER3 G........................................................................... 44
18.1 Programmieranleitung für PC/Laptop-verbundenes Gerät .................................................................... 44
18.2 Analyse-Anweisungen.............................................................................................................................. 47
19. Interpretation der Ergebnisse und Berichterstattung .................................................................................. 48
19.1 LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Completekontrollen .......................................................................... 48
19.2 Interpretation der Ergebnisse von Patientenproben.............................................................................. 49
20. Limitierungen ................................................................................................................................................. 49
21. Leistungsmerkmale ........................................................................................................................................ 50
21.1 Nachweisgrenze (LoD).............................................................................................................................. 50
21.1.1 Zweck ................................................................................................................................................. 50
21.1.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 50
21.1.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 50
21.2 Validierung von RT-PCR-Geräten............................................................................................................. 51
21.2.1 Zweck ................................................................................................................................................. 51
21.2.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 51
21.2.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 51
21.3.1 Zweck ................................................................................................................................................. 51
21.3.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 51
21.3.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 51
21.4 Ausschließlichkeit / Kreuzreaktivität: ..................................................................................................... 52
21.4.1 Zweck ................................................................................................................................................. 52
21.4.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 52
21.4.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 52
21.5 Untersuchungen zu endogenen Störsubstanzen .................................................................................... 53
21.5.1 Zweck ................................................................................................................................................. 53
21.5.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 53
21.5.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 53
21.5 Reproduzierbarkeit .................................................................................................................................. 55
21.5.1 Zweck ................................................................................................................................................. 55
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
21.5.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 55
21.5.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 55
21.6.1 Zweck ................................................................................................................................................. 55
21.6.2 Ablauf ................................................................................................................................................ 55
21.6.3 Ergebnisse und Schlussfolgerungen ................................................................................................. 55
22. Kontaktinformationen, Bestellung und Produktsupport.............................................................................. 57
22.1 Bestellung ................................................................................................................................................. 57
22.2 Produktinformation ................................................................................................................................. 57
22.3 Technische Unterstützung ....................................................................................................................... 57
22.4 Rückgabebedingungen............................................................................................................................. 57
22.5 Eingeschränkte Garantie .......................................................................................................................... 57
22,6 Geistiges Eigentum ................................................................................................................................... 57
22.7 Rechtliche Hinweise ................................................................................................................................. 57
23. Referenzen ................................................................................................................................................. 58
24. Glossar mit Symbolen ................................................................................................................................ 58
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1. Verwendungszweck
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete ist ein schnelles, nicht-isothermes Nukleinsäure-Amplifikationsverfahren qSTAR (Selective
Temperature Amplification Reaction) für den qualitativen Nachweis von Nukleinsäure von SARS-CoV-2 in Proben der oberen Atemwege
(wie z. B. nasale, mittlere, nasopharyngeale und oropharyngeale Abstriche), die von Personen mit Verdacht auf COVID-19 von ihrem
Gesundheitsdienstleister entnommen wurden.
Die Ergebnisse dienen der Identifizierung von SARS-CoV-2-RNA. Die SARS-CoV-2-RNA ist im Allgemeinen in Proben der oberen
Atemwege während der akuten Phase der Infektion nachweisbar. Positive Ergebnisse sind ein Hinweis auf das Vorhandensein von SARS-
CoV-2-RNA; eine klinische Korrelation mit der Krankengeschichte und anderen diagnostischen Informationen ist notwendig, um den
Infektionsstatus des Patienten zu bestimmen. Positive Ergebnisse schließen eine bakterielle Infektion oder eine Koinfektion mit anderen
Viren nicht aus. Der nachgewiesene Erreger ist möglicherweise nicht die eindeutige Ursache der Erkrankung. Laboratorien innerhalb
der USA und ihrer Territorien sind verpflichtet, alle Ergebnisse an die zuständigen Gesundheitsbehörden zu melden.
Negative Ergebnisse schließen eine SARS-CoV-2-Infektion nicht aus und sollten nicht als alleinige Grundlage für Entscheidungen zum
Patientenmanagement verwendet werden. Negative Ergebnisse müssen mit klinischen Beobachtungen, der Patientengeschichte und
epidemiologischen Informationen kombiniert werden.
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete ist für die Verwendung durch qualifiziertes klinisches Laborpersonal bestimmt, das speziell in
den Techniken der Realtime-PCR und in vitro-diagnostischen Verfahren unterwiesen und geschult ist.
2. Zusammenfassung und Erläuterung
Die Weltgesundheitsorganisation (WHO) hat die durch das SARS-CoV-2-Virus verursachte Krankheit als Coronavirus 2019 oder COVID-
19 bezeichnet 1. Die häufigsten Symptome von COVID-19 sind Fieber, Müdigkeit und trockener Husten. Einige Patienten können auch
Schmerzen, verstopfte Nase, Fließschnupfen, Halsschmerzen oder Durchfall haben. Diese Symptome sind in der Regel mild und
beginnen allmählich. Manche Menschen infizieren sich, entwickeln aber keine Symptome und fühlen sich nicht unwohl
(asymptomatische Infektion). Die Krankheit kann sich jedoch schnell entwickeln und in bestimmten Bevölkerungsgruppen,
insbesondere bei Menschen mit gesundheitlichen Vorbelastungen, eine hohe Morbidität aufweisen. Die Krankheit kann von Mensch zu
Mensch durch kleine Tröpfchen aus der Nase oder dem Mund übertragen werden, die verbreitet werden, wenn eine Person mit COVID-
19 hustet oder ausatmet. Die meisten Schätzungen der Inkubationszeit für COVID-19 reichen von 2-14 Tagen 2.
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete wurde entwickelt, um eine Region in ORF1a aus Nukleinsäuresequenzen innerhalb des
Genoms der SARS-CoV-2 RNA nachzuweisen.
3. Verfahrensgrundsätze
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete ist ein schnelles, nicht-isothermes Nukleinsäure-Amplifikationsverfahren unter Verwendung
der qSTAR-Technologie, welche virale SARS-CoV-2-Nukleinsäure in weniger als zwanzig Minuten nachweist, ohne dass eine
Probenaufreinigung oder -extraktion erforderlich ist. Der LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Internal Control & Primer (IC/P)
Mix ist für den qualitativen Nachweis von Nukleinsäure aus SARS-CoV-2 in Proben der oberen Atemwege (Abstriche aus dem vorderen
Nasenraum, dem mittleren Rachenraum, dem Nasopharynx und dem Oropharynx) bestimmt, die von Personen mit Verdacht auf
COVID-19 von ihrem Gesundheitsdienstleister entnommen wurden.
In einer einzigen Reaktion kann das SARS-CoV-2-Virus aus Proben der oberen Atemwege (Abstriche der vorderen Nase, des mittleren
Rachens, des Nasopharynx und des Oropharynx) lysiert und amplifiziert werden. Die SARS-CoV-2-Virionen werden durch die
Anwesenheit von Detergenzien im LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete 10X Extraction Buffer lysiert. Die in der lysierten
Tupferprobe vorhandenen Nukleinsäuren werden revers transkribiert, um cDNA zu bilden, die anschließend durch qSTAR unter
Verwendung von Primern, die auf eine spezifische Region im SARS-CoV-2-Genom abzielen, amplifiziert wird. Die Amplifikation der
cDNA durch qSTAR unterliegt einem mehrmaligen Pendeln zwischen einer oberen Temperatur, bei der die Aktivität eines der Enzyme,
der Polymerase, relativ begünstigt wird, und einer unteren Temperatur, bei der die Aktivität des Nicking-Enzyms relativ begünstigt
wird.
Durch die Steuerung der Enzymaktivität mittels "Temperatur-Gating" und die Optimierung der Reaktionskinetik hat die qSTAR-
Amplifikationsmethode in Verbindung mit einem Extraktionspuffer eine konsistente und kontrollierte Amplifikation bei gleichzeitiger
Beibehaltung der Sensitivität der Detektion gezeigt, um einen zuverlässigen und genauen Nachweis von Infektionskrankheiten ohne
Durchführung einer Extraktion innerhalb von Minuten zu ermöglichen. Die erzeugten Produkte werden spezifisch mit molekularen
Beacons detektiert, die so konzipiert sind, dass sie sich an das Zielamplikon anlagern, und zwar mit einem der folgenden Geräte: Roche
LightCycler 480 II (Software-Version SW 1.5.1), Applied Biosystems 7500 Fast Dx (Software-Version 1.4.1), Applied Biosystems
QuantStudio 5 (Software-Version 1.5.1), Applied Biosystems QuantStudio 7 Flex (Software-Version 1.3), Applied Biosystems
QuantStudio 7 Pro (Software Version 2.4.3), Bio-Rad CFX96 Touch System (Software Version 3.1), Agilent AriaMx (Software Version
1.71), Agilent Stratagene Mx3005P (Software Version 4.10) oder die Analytik Jena qTOWER3 (Software Version 4.1) RT-PCR
Instrumente.
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
4. Erforderliche Materialien (mitgeliefert)
Komponente Beschreibung Band Lagerung
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete SARS-CoV-2 Positivkontrolle
500 μL < 8°C
Positive Control Media (Pos. Ctrl. Med.) (ZeptoMetrix 50.000cp/mL)
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Negative Kontrolle (Wasser in
1,5 mL -25°C bis -15°C
Negative Control Media (Neg. Ctrl. Med.) molekularbiologischer Qualität)
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete
Salz-Mischung 1 mL -25°C bis -15°C
Salt-Mix
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete
Nukleinsäure-Extraktionspuffer 500 μL -25°C bis -15°C
Extraction Buffer
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete
Interne Kontrolle & Primer-Mix 120 μL -25°C bis -15°C
Internal Control & Primer-Mix (IC/P-Mix)
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete
Master-Mix 2x 1 mL -25°C bis -15°C
Master-Mix
5. Erforderliche (aber nicht mitgelieferte) Materialien
Verbrauchsmaterial Quelle U.S. Katalog #
Geeignete persönliche Schutzausrüstung Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Aerosol-Barriere-Pipettenspitzen mit Filtern Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Mikrozentrifugenröhrchen (DNase/RNase frei), 0,6 bis 5mL Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Puderfreier Nitril-Handschuh Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Deep Well 96-Well-Platten (U-Boden) Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Reagenzienreservoirs (für minimales Totvolumen) Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Verschließbarer Abwurfbeutel oder Container Allgemeiner Laborlieferant k.A.
KimWipes Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Reagenzien Quelle U.S. Katalog #
Natriumhypochlorit-Lösung (Bleichmittel) ThermoFisher Scientific SS290-1
70 % Isopropanol (oder 70 % Ethanol) VWR 89499-420
DNAZapTM (oder gleichwertig) ThermoFisher Scientific AM9890
RNaseZapTM (oder gleichwertig) ThermoFisher Scientific AM9782
Wasser in molekularbiologischer Qualität Corning 46-000-CM
Kompatible Transportmedien* Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Transport Medium Corning 25-500-CM
Kochsalzlösung, 0,85 %. Hardy Diagnostik U157
PBS (pH 7,4), 1X ThermoFisher Scientific 10010023
Ausrüstung Quelle U.S Katalog #
-80ºC Labor-Gefrierschrank Allgemeiner Laborlieferant k.A.
-25ºC bis -15ºC Labor-Gefrierschrank Allgemeiner Laborlieferant k.A.
2ºC bis 8ºC Labor-Kühlschrank Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Einstellbare Mehrkanalpipetten (2-20μL, 20-200μL) Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Einstellbare Mikropipetten (0,5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 100-1000μL) Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Zentrifugen (für 0,6 bis 5mL-Gefäße und 96-Well-Platten) Allgemeiner Laborlieferant k.A.
PCR-Haube Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Vortex Allgemeiner Laborlieferant k.A.
Kühlblöcke Allgemeiner Laborlieferant k.A.
IsoFreeze PCR-Racks Thomas Scientific 1148D61
Racks für Mikrozentrifugenröhrchen Allgemeiner Laborlieferant k.A.
USB-Flash-Laufwerk Allgemeiner Laborlieferant k.A.
*Eine Matrixäquivalenzstudie wurde durchgeführt, um die Leistung des LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Tests für die Verwendung mit
kompatiblen Probentransportmedien zu bewerten. SARS-verwandtes Coronavirus 2 Isolat wurde in NP-Abstrichmatrix nahe LoD für jede der
folgenden verdünnt und getestet: Corning Transportmedium, Kochsalzlösung, 0,85%, und 1X PBS (pH 7,4), mit entsprechender NTC in einer NP-
Matrix. Die Studienergebnisse zeigen, dass die evaluierten Probentransportmedien bei der Durchführung mit dem LumiraDx SARS-CoV-2 RNA
STAR Complete Test vergleichbar sind.
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
Option für PCR-Geräte2 & Verbrauchsmaterial Quelle U.S Katalog #
Roche LightCycler 480 II (Software-Version SW 1.5.1) Roche Life Science 5015278001
LightCycler 480 Multiwell-Platte 96, klar Roche Life Science 5102413001
Applied Biosystems 7500 Fast Dx (Software-Version 1.4.1) ThermoFisher Scientific 4406984
Applied Biosystems MicroAmp Schnell Optisch ThermoFisher Scientific 4346906
Applied Biosystems QuantStudio 5 (Software-Version 1.5.1) ThermoFisher Scientific A28574
Applied Biosystems QuantStudio 7 Flex (Software-Version 1.3) ThermoFisher Scientific 4485698
Applied Biosystems Optische Klebeabdeckungen ThermoFisher Scientific 4360954
Applied Biosystems MicroAmp Optical 96-Well-Platte ThermoFisher Scientific 4306737
Agilent Aria Mx (Software-Version 1.71) Agilent Technologies G8830A
AriaMx 96 Klebedichtungen Agilent Technologies 401492
AriaMx 96 Well-Platten, skirted, LP Agilent Technonolgies 401490
Agilent Stratagene Mx3005P (Software-Version 4.10) Agilent 401511
Applied Biosystems MicroAmp Clear Adhesive Film ThermoFisher Scientific 4306311
Eppendorf twin.tec Real-Time PCR Plate 96-Well Semi-Skirted Eppendorf 951022043
Bio-Rad CFX96 Touch System (Software Version 3.1) BioRad 785BR09328 / CT003265
Eppendorf twin.tec Real-Time PCR-Platte 96-Well Skirted Eppendorf 951022003
Analytik Jena qTOWER3G (Software-Version 4.1) Analytik Jena 844-00554-4
Eppendorf twin.tec Real-Time PCR Plate 96-Well Semi-Skirted Eppendorf 951022043
Universal-Dichtungsfolien* Allgemeiner Laborlieferant
Research Products
ThermalSeal A Sealing Film 202545
International
Hitzebeständige Polypropylenfolie für Platten mit erhöhtem
VWR 89087-690
Rand
Utility-Versiegelungsfolie
VWR Klebefolie für Mikrotiterplatten VWR 60941-070
*Diese universellen Dichtungsfolien haben sich als kompatibel mit allen oben aufgeführten Geräten erwiesen.
6. Warnung und Vorsichtsmaßnahmen
• Für die in-vitro-diagnostische Anwendung (IVD).
• Der Salt Mix und der Master Mix enthalten Rinderserumalbumin.
• Dieser LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Test ist nur für den Nachweis von Nukleinsäure des SARS-CoV-2-Virus und
nicht für andere Viren oder Erreger zugelassen.
• In Bereichen, in denen mit Reagenzien und menschlichen Proben umgegangen wird, darf nicht gegessen, getrunken,
geraucht, Kosmetika aufgetragen oder mit Kontaktlinsen hantiert werden.
• Behandeln Sie alle Proben so, als ob sie infektiös wären, indem Sie sichere Laborverfahren anwenden.
• Weitere Informationen zur Entnahme, Lagerung und zum Transport von Proben finden Sie in den Leitlinien der
Weltgesundheitsorganisation. Leitlinien zur biologischen Sicherheit im Labor im Zusammenhang mit der Coronavirus-
Krankheit (COVID-19): Leitlinien, 28. Januar 2021.
Weltgesundheitsorganisation..https://www.who.int/publications/i/item/WHO-WPE-GIH-2021.1
• Die Leistungsmerkmale wurden mit menschlichen Proben der oberen Atemwege von Personen mit Anzeichen und
Symptomen einer Infektion bestimmt, bei denen ein Verdacht auf COVID-19 besteht.
• Verwenden Sie persönliche Schutzausrüstung wie z. B. Handschuhe und Laborkittel, wenn Sie während der Durchführung
dieses Tests mit Kit-Reagenzien und Materialien wie Proben, Reagenzien, Pipetten und anderen Geräten und Reagenzien
arbeiten.
• Entsorgen Sie unbenutzte Kit-Reagenzien und Humanproben gemäß den örtlichen, staatlichen und bundesstaatlichen
Vorschriften.
• Negative Ergebnisse schließen eine SARS-CoV-2-Infektion nicht aus und sollten nicht als alleinige Grundlage für
Entscheidungen zum Patientenmanagement verwendet werden. Negative Ergebnisse müssen mit klinischen Beobachtungen,
der Patientengeschichte und epidemiologischen Informationen kombiniert werden.
• Laboratorien sind verpflichtet, alle Ergebnisse an die zuständigen Gesundheitsbehörden zu melden.
• Die mit diesem Test verwendeten Reagenzien enthalten Guanidin-haltige Materialien. In Verbindung mit Natriumhypochlorit
(Bleichmittel) können sich hochreaktive und/oder toxische Verbindungen bilden.
• Verwenden Sie nur die aufgeführten Komponenten, die für LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete vorgesehen sind;
andere LumiraDx-Produkte enthalten möglicherweise nicht die gleichen Formulierungen, die für diesen Test benötigt werden.
7. Reagenzienlagerung, -handhabung und -stabilität
• Lagern Sie das LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Kit nach Erhalt zwischen - 15 °C und - 25 °C.
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
• Lagern Sie den LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Kit nach dem ersten Gebrauch zwischen - 15 °C und - 25 °C.
• Die LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Positive Control Media (Pos. Ctrl. Med.) kann nach dem ersten Gebrauch
optional bei < 8 °C gelagert werden.
• Prüfen Sie vor der Verwendung immer das Verfallsdatum. Verwenden Sie keine abgelaufenen Reagenzien.
• Schützen Sie die fluorogenen Sonden vor Licht - die Sonden sind ein Bestandteil des LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR
Complete Internal Control & Primer Mix (IC/P Mix).
• Der Extraktionspuffer, der interne Kontroll-/Primer-Mix und der Master-Mix müssen während der Vorbereitung und
Verwendung immer aufgetaut und auf einem Kälteblock aufbewahrt werden.
• Die externen Kontrollen, Pos. Ctrl. Med. und Neg. Ctrl. Med. müssen ebenfalls aufgetaut und während der Vorbereitung und
Verwendung stets kalt gehalten werden.
8. Entnahme, Handhabung und Lagerung von Proben
Die korrekte Entnahme von Proben ist der wichtigste Schritt in der Labordiagnose von Infektionskrankheiten. Eine nicht korrekt
entnommene Probe kann zu falsch negativen Testergebnissen führen. Alle Tests auf das SARS-CoV-2-Virus sollten in Absprache mit
einem Gesundheitsdienstleister durchgeführt werden. Die Proben sollten so schnell wie möglich entnommen werden, sobald die
Entscheidung getroffen wurde, einen Test durchzuführen, unabhängig vom Zeitpunkt des Auftretens der Symptome. Aufgrund der
Bedeutung der Probenqualität wird eine Schulung zur Probenentnahme dringend empfohlen.
8.1 Sammeln von Proben
• Tupferproben sollten nur mit Tupfern mit einer synthetischen Spitze, wie Nylon oder Dacron®, und einem Aluminium- oder
Kunststoffschaft entnommen werden. Calciumalginat-Tupfer sind inakzeptabel und Wattestäbchen mit Holzstiel werden
nicht empfohlen.
• Für die Entnahme von feuchten Abstrichen: Respiratorische Proben sollten entnommen und in ein geeignetes
Transportmedium gegeben werden, wie z. B. Corning Transportmedium, 0,85%ige Kochsalzlösung oder
Phosphatpuffersalzlösung (PBS - kalzium- und magnesiumfrei), wie unten beschrieben, basierend auf den Richtlinien der CDC
und der WHO. Abstriche in bis zu 3 mL kompatiblen Transportmediums sind akzeptabel, aber um Reagenzien zu sparen und
die Leistung zu verbessern, wird ein (1) mL Puffer empfohlen.
• Für die trockene Abstrichentnahme: Atemwegsproben sollten gesammelt und in ein steriles, trockenes Transportröhrchen,
wie z. B. ein standardmäßiges 15-mL-Falcon-Röhrchen, gegeben werden. Zur Elution einer trockenen Abstrichprobe fügen Sie
1 mL eines kompatiblen Transportmediums (Corning Transportmedium, 0,85%ige Kochsalzlösung oder PBS) hinzu, tränken
Sie den Tupfer 30 Sekunden lang und verrühren Sie die Lösung dann gründlich, indem Sie den Tupfer 5 Mal gegen die Seite
des Röhrchens drehen (achten Sie auf Kreuzkontamination durch Spritzer). Entsorgen Sie den Tupfer im Bioabfall.
• Weitere Informationen zur Entnahme, Lagerung und zum Transport von Proben finden Sie in
• den Leitlinien der Weltgesundheitsorganisation. Leitlinien zur biologischen Sicherheit im Labor im Zusammenhang mit der
Coronavirus-Krankheit (COVID-19): Leitlinien, 28. Januar 2021. Weltgesundheitsorganisation.
https://www.who.int/publications/i/item/WHO-WPE-GIH-2021.1
8.2 Transport von Proben
• Die Proben müssen gemäß der aktuellen Ausgabe der Gefahrgutvorschriften der International Air Transport Association
(IATA) verpackt, versendet und transportiert werden. Befolgen Sie die Versandvorschriften für UN 3373 Biologische Substanz,
Kategorie B, wenn Sie potenzielle SARS-CoV-2-Proben versenden.
• Wenn feuchte Abstriche in einem kompatiblen Puffer (z. B. Corning Transportmedien, 0,85%ige Kochsalzlösung oder
Phosphatpuffersalzlösung (PBS - kalzium- und magnesiumfrei)) ausgedrückt werden, lagern Sie die Proben bis zu 72 Stunden
nach der Entnahme bei 2 bis 8 °C. Wenn eine Verzögerung beim Testen oder Versand zu erwarten ist, lagern Sie die Proben
bei -20 °C oder darunter und versenden Sie diese auf Trockeneis.
• Trockene Abstriche können in einem trockenen Röhrchen ohne Kühlkette versendet werden, wobei eine Stabilität von bis zu
3 Tagen für trockene Polyesterabstriche nachgewiesen ist. Zusätzlich können trockene Abstriche in Kochsalzlösung (1 mL)
ausgedrückt und für eine längere Lagerung eingefroren werden, wenn eine Verzögerung beim Testen oder Versand zu
erwarten ist. Lagern Sie gefrorene Proben bei -20 °C oder darunter und versenden Sie diese auf Trockeneis.
8.3 Aufbewahrung von Proben
• Trockene Abstrichproben sind entweder bei Raumtemperatur bis zu 48 Stunden oder gekühlt (2-8 °C) bis zu 72 Stunden vor
der Verarbeitung stabil. Feuchte Abstrichproben sollten vor der Verarbeitung bis zu 72 Stunden lang gekühlt (2-8 °C) gelagert
werden. Wenn eine Verzögerung des Tests zu erwarten ist, lagern Sie die Proben bei -20 °C oder darunter.
• Wenn Proben nicht innerhalb von 72 Stunden nach der Entnahme getestet werden können, sollten sowohl Trockenabstriche
(ausgedrückt in Corning-Transportmedien, 0,85 %iger Kochsalzlösung oder PBS) als auch Nassabstriche bis zum Test bei < -20
°C eingefroren werden.
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
9. LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Vorbereitung
9.1 Qualitätskontrollen
• Die Qualitätskontrollanforderungen müssen in Übereinstimmung mit den örtlichen, staatlichen und bundesstaatlichen
Vorschriften oder Akkreditierungsanforderungen und den Standard-Qualitätskontrollverfahren des Anwenderlabors
durchgeführt werden.
• Qualitätskontrollverfahren dienen der Überwachung der Reagenzien- und Assayleistung.
• Testen Sie alle Positiv- und Negativkontrollmedien bei der Durchführung diagnostischer Proben und mit jeder neuen Charge
des LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Kits, um sicherzustellen, dass alle Reagenzien und Kitkomponenten
ordnungsgemäß funktionieren.
• Die gute Laborpraxis (GLP) empfiehlt die Durchführung einer Positivkontrolle (Pos. Ctrl. Med.) und einer Negativkontrolle
(Neg. Ctrl. Med.) in jeder Amplifikationsreaktion.
• Alle Proben enthalten eine interne Kontrolle zur Validierung der Enzym-, Primer- und Sondenstabilität.
9.2 Probenvorbereitung
Der LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete macht die Probenreinigung und -extraktion vollständig überflüssig, da er Lyse und
Amplifikation in einem einzigen Schritt kombiniert. Dieser Assay ist kompatibel mit Abstrichen, die in einem leeren (trockenen)
Röhrchen gelagert werden, oder mit Abstrichen, die in kompatiblen Transportmedien gelagert werden (Corning Transport Media,
0,85%ige Kochsalzlösung oder PBS). Es ist wichtig, dass die LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Positive Control Media (Pos.
Ctrl. Med.) und die LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Negative Control Media (Neg. Ctrl. Med.) als Patientenproben
behandelt werden und beide als externe Kontrollen in jede Platte aufgenommen werden müssen.
HINWEIS: Bitte behandeln Sie die Pos. Ctrl. Med. mit Vorsicht, da es bei versehentlichem Verschütten oder unvorsichtiger
Handhabung zu falsch positiven Ergebnissen führen kann. Um Kreuzkontaminationen zu vermeiden, verwenden Sie für alle
Materialien separate Pipettenspitzen.
1. Tauen Sie LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Positive Control Media (Pos. Ctrl. Med.) und LumiraDx SARS-CoV-2 RNA
STAR Complete Negative Control Media (Neg. Ctrl. Med.) auf einem Kälteblock auf, vortexen Sie die Pos. Ctrl. Med. und Neg.
Ctrl. Med. 5 Sekunden lang und zentrifugieren diese dann anschließend für 5 Sekunden , um die Reagenzien am Boden des
Röhrchens zu sammeln.
2. Um das 1x PCM (Positive Control Media) zusammenzustellen, verdünnen Sie frisch 20,0 µL Pos. Ctrl. Med. mit 60,0 µL Neg.
Ctrl. Med. in einem vorgekühlten Mikrozentrifugenröhrchen. Um die 1x NCM (Negative Control Media) zusammenzustellen,
pipettieren Sie immer frisch 80,0 µL Neg. Ctrl. Med. in ein vorgekühltes Mikrozentrifugenröhrchen.
3. Proben der oberen Atemwege (24 μL) werden direkt in die in Abschnitt 9.4 vorbereitete Probenplatte gegeben. Wenn die
Tupferproben trocken bereitgestellt werden, überführen Sie den Tupfer in ein Vial, wie z. B. ein 5-mL-Röhrchen oder eine
Deep-Well-Platte, die 1 mL kompatibles Transportmedium enthält, und tränken Sie den Tupfer mindestens 30 Sekunden
lang. Verrühren Sie den Tupfer gründlich, indem Sie ihn 5 Mal gegen die Seite des Röhrchens drehen, und drücken Sie den
Tupfer vor dem Entfernen an der Seite des Röhrchens außerhalb der Flüssigkeit aus (achten Sie auf Kreuzkontamination
durch Spritzer). Entsorgen Sie den Tupfer im Bioabfall.
9.3 qSTAR-Richtlinien
HINWEIS: Amplifikationstechnologien wie der qSTAR sind wie die PCR empfindlich gegenüber einer versehentlichen Überführen
von Produkten aus früheren Amplifikationsreaktionen. Falsche Ergebnisse können auftreten, wenn entweder die klinische Probe
oder die im Amplifikationsschritt verwendeten qSTAR-Reagenzien durch versehentliche Überführung von Amplifikationsprodukt
(Amplikon) kontaminiert werden. Der Arbeitsablauf im Labor sollte immer in einer unidirektionalen Weise ablaufen, um solche
Kontaminationsereignisse zu minimieren.
• Halten Sie getrennte Bereiche für das Assay-Setup und die Handhabung von klinischen Proben vor.
• Wechseln Sie die Pipettenspitzen mit Aerosolbarriere zwischen allen manuellen Flüssigkeitstransfers.
• Bei der Vorbereitung der Proben ist die Einhaltung guter Labortechniken unerlässlich, um das Risiko einer
Kreuzkontamination zwischen den Proben und die versehentliche Einführung von Nukleasen in die Proben während und
nach dem Extraktionsverfahren zu minimieren. Bei der Arbeit mit Nukleinsäuren sollte immer eine ordnungsgemäße
aseptische Technik angewendet werden.
• Halten Sie separate, dedizierte Geräte (z. B. Pipetten, Mikrozentrifugen) und Verbrauchsmaterialien (z. B.
Mikrozentrifugenröhrchen, Pipettenspitzen) für das Assay-Setup und die Handhabung von klinischen Proben bereit.
• Tragen Sie beim Einrichten von Assays einen sauberen Laborkittel und puderfreie Einweghandschuhe (die Sie vorher nicht
getragen haben).
• Wechseln Sie die Handschuhe häufig und immer dann, wenn eine Kontamination vermutet wird.
• Halten Sie Gefäße und Platten so weit wie möglich verschlossen, abgedeckt oder versiegelt.
• Es wird empfohlen, einen Kälteblock zu verwenden, da lose Tubes auf Eis zu Kontaminationen führen können.
• Der LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Salt Mix, der LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Extraction Buffer, der
LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete IC/P Mix und der LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Master Mix müssen
aufgetaut und während der Vorbereitung und Verwendung stets auf einem auf 4 °C äquilibrierten Kühlblock aufbewahrt
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI2021
werden. Sofern die Reagenzien bei der ersten Verwendung nicht vollständig verbraucht werden, dürfen die Reagenzien
maximal dreimal wieder eingefroren werden.
• Arbeitsflächen, Pipetten und Zentrifugen sollten mit Reinigungsmitteln (z. B. 10%ige Bleiche, "DNAZapTM", "RNaseZap®"
oder "RNase AWAY®", etc.) gereinigt und dekontaminiert werden, um das Risiko einer Nukleinsäurekontamination zu
minimieren. Reste der Bleiche sollten mit Nuklease-freiem Wasser und 70%igem Ethanol entfernt werden.
9.4 qSTAR-Reagenzvorbereitung
Es ist notwendig, einen Überschuss an Reaction Mix herzustellen, um Pipettierfehler auszugleichen. Zusätzlich wird empfohlen,
die folgenden Anweisungen durchzulesen, bevor Sie versuchen, den Reaktionsmix herzustellen. Alle Komponenten sollten
aufgetaut und auf einem Kühlblock aufbewahrt werden, der zwischen 2 und 8 °C äquilibriert ist, um die Integrität der Reagenzien
zu erhalten. Darüber hinaus wird empfohlen, den validierten Thermocycler (d. h. Roche LC 480 II, ABI 7500 Fast Dx, ABI QS 5, ABI
QS 7 Flex, ABI QS 7 Pro, Bio-Rad CFX96, Agilent AriaMx, Agilent Stratagene Mx3005P oder den Analytik Jena qTOWER3) vor der
Durchführung der folgenden Anweisungen bereits ein zu schalten, um sicherzustellen, dass die Leistung dieses Assays erhalten
bleibt.
1. Tauen Sie die Komponenten des LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Kits in einem Kühlblock auf, der zwischen 2 und 8
°C äquilibriert ist; d. h. LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Salt Mix, LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete
Extraction Buffer, LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Internal Control & Primer Mix (IC/P Mix) und LumiraDx SARS
CoV-2 RNA STAR Complete Master Mix.
2. Übertragen Sie 24,0 μL der in Schritt 3 von Abschnitt 9.2 vorbereiteten Abstrichproben und 24,0 μL der in Schritt 2 von
Abschnitt 9.2 vorbereiteten externen Kontrollen in eine geeignete, vorgekühlte 96-Well-Platte. Geben Sie 4,8 µL
Extraktionspuffer pro Vertiefung je der Probe und der externen Kontrollen hinzu und mischen Sie, indem Sie 10-mal langsam
auf- und abpipettieren und dabei Blasenbildung vermeiden. Die Zugabe und das Mischen des Extraktionspuffers kann durch
die Verwendung einer Mehrkanalpipette und eines gekühlten Reagenzienreservoirs vereinfacht werden. Verschließen Sie bei
Bedarf die 96-Well-Platte und zentrifugieren Sie diese, um die Probe am Boden der Vertiefung aufzufangen.
3. Bestimmen Sie die Anzahl der Reaktionen (N), die pro Assay vorbereitet werden sollen:
Aufbau der 1 Reaktion 100 Reaktionen N Reaktionen
Reaktionsmischung
Salt-Mix 10,0 µL 1000 µL N x 10,0 µL
IC/P-Mix 1,2 µL 120 µL N x 1,2 µL
Master-Mix 20,0 µL 2000 µL N x 20,0 µL
Gesamtvolumen 31,2 µL 3120 µL N x 31,2 µL
4. Invertieren Sie den IC/P-Mix und den Master-Mix, um diese zu mischen, und zentrifugieren Sie dann 5 Sekunden lang, um die
Reagenzien am Boden des Röhrchens zu sammeln (Proben nicht vortexen).
5. Schütteln Sie den Salt-Mix 20 Sekunden lang kräftig und zentrifugieren Sie diesen 5 Sekunden lang, um das Reagenz am
Boden des Röhrchens zu sammeln.
6. Unter der Annahme, dass eine Reaktion benötigt wird, gehen Sie wie folgt vor, um den Reaktionsmix herzustellen:
a. 10,0 µL Salt-Mix und 1,2 µL IC/P-Mix in einem vorgekühlten Mikrozentrifugenröhrchen vereinigen, durch 4-maliges
langsames Auf- und Abpipettieren blasenfrei mischen, kurz zentrifugieren (nicht vortexen und nicht zu lange
schleudern), dann Röhrchen wieder auf den Kälteblock stellen.
b. 20,0 µL Master Mix zum Finalisieren des Reaction Mix zugeben, durch 10-maliges Auf- und Abpipettieren blasenfrei
mischen, kurz zentrifugieren, dann Röhrchen wieder auf den Kühlblock stellen.
7. Übertragen Sie 31,2 µL der Reaktionsmischung in jede Vertiefung zu der Probe und den externen Kontrollen. Mischen Sie,
indem Sie 10-mal langsam auf und ab pipettieren, ohne Blasen zu erzeugen. Die Zugabe und das Mischen des Reaction Mix
kann durch Verwendung einer Mehrkanalpipette und eines gekühlten Reagenzienreservoirs vereinfacht werden.
Verschließen Sie die 96-Well-Platte mit einer geeigneten optisch klaren Folie und zentrifugieren Sie die Platte bei 2000 U/min
für 10 Sekunden, um den Inhalt am Boden der Platte zu sammeln.
8. Legen Sie die 96-Well-Platte in einen validierten Thermocycler und befolgen Sie die unten aufgeführten gerätespezifischen
Protokolle und Analyseverfahren.
9.5 Eigenständige Anweisungen für die Verarbeitung eines einzelnen Tupferformats
Die folgenden Anweisungen sind ein Beispiel für die Verarbeitung von sowohl trockenen als auch feuchten Abstrichproben,
einzeln, bis hin zur endgültigen Einrichtung der Probenplatte. Abstriche, die in bis zu 3 mL kompatiblen Transportmediums
bereitgestellt werden, sind akzeptabel, aber zur Verbesserung der Leistung wird ein (1) mL Puffer empfohlen.
HINWEIS: Es wird empfohlen, die folgenden Anweisungen durchzulesen, bevor Sie versuchen, den Reaktionsmix herzustellen. Alle
Komponenten sollten aufgetaut und auf einem Kühlblock aufbewahrt werden, der zwischen 2 und 8 °C äquilibriert ist, um die
Integrität der Reagenzien zu erhalten. Außerdem wird empfohlen, den validierten Thermocycler (d. h. Roche LC 480 II, ABI 7500
Fast Dx, ABI QS 5, ABI QS 7 Flex, ABI QS 7 Pro, Bio-Rad CFX96, Agilent AriaMx, Agilent Stratagene Mx3005P oder den Analytik Jena
qTOWER3) vor der Durchführung der folgenden Anweisungen bereits ein zu schalten, um sicherzustellen, dass die Leistung dieses
Assays erhalten bleibt.
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI20211. Tauen Sie die Komponenten des LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Kits in einem zwischen 2 und 8 °C äquilibrierten
Kühlblock auf; d.h. LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Positive Control Media (Pos. Ctrl. Med.), LumiraDx SARS CoV-2
RNA STAR Complete Negative Control Media (Neg. Ctrl. Med.), LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Salt Mix, LumiraDx
SARS CoV-2 RNA STAR Complete Extraction Buffer, LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Internal Control & Primer Mix
(IC/P Mix), und LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Master Mix. Invertieren Sie jedes Röhrchen, um es zu mischen,
und zentrifugieren Sie diese dann 5 Sekunden lang, um die Reagenzien am Boden des Röhrchens zu sammeln (Proben nicht
vortexen).
2. Wenn der Tupfer trocken bereitgestellt wird, übertragen Sie einen (1) mL eines kompatiblen Transportmediums in ein
geeignetes Röhrchen (z. B. Mikrozentrifugenröhrchen aus Polypropylen). Platzieren und tränken Sie den Tupfer für
mindestens 30 Sekunden und verrühren Sie ihn dann gründlich, indem Sie den Tupfer bis zu 5 Mal gegen die Seite des
Röhrchens drehen. Drücken Sie den Tupfer an der Seite des Röhrchens, außerhalb der Flüssigkeit, aus, bevor Sie ihn
entfernen (achten Sie auf Kreuzkontamination durch Spritzer). Entsorgen Sie den Abstrichtupfer im Bioabfall. Wenn die
Abstrichprobe feucht bereitgestellt wird, sind bis zu 3 mL eines kompatiblen Transportmediums (Corning Transportmedium,
0,85%ige Kochsalzlösung oder PBS) akzeptabel, aber dieses höhere Volumen kann die Empfindlichkeit beeinträchtigen.
3. Stellen Sie frisches 1x PCM (Positive Control Media) durch Verdünnen von 20,0 µL Pos. Ctrl. Med. mit 60,0 µL Neg. Ctrl. Med.
in einem vorgekühlten Mikrozentrifugenröhrchen her. Stellen Sie das 1x NCM (Negative Control Media) her, indem Sie 80,0
μL Neg. Ctrl. Med. in ein vorgekühltes Mikrozentrifugenröhrchen pipettieren.
4. Übertragen Sie 24,0 μL der in Schritt 2 vorbereiteten Abstrichprobe und 24,0 μL der in Schritt 3 vorbereiteten externen
Kontrollen mit einer Einkanalpipette in eine geeignete, vorgekühlte 96-Well-Platte.
5. Geben Sie 4,8 µL Extraktionspuffer pro Vertiefung in die 96-Well-Platte und mischen Sie, indem Sie 10-mal langsam auf- und
abpipettieren, ohne Blasen zu erzeugen. Die Zugabe und das Mischen des Extraktionspuffers kann durch die Verwendung
einer Mehrkanalpipette und eines gekühlten Reagenzienreservoirs vereinfacht werden. Verschließen Sie bei Bedarf die 96-
Well-Platte und zentrifugieren Sie diese, um die Probe am Boden der Vertiefung aufzufangen.
6. Bestimmen Sie die Anzahl der Reaktionen (N), die pro Assay vorbereitet werden sollen, und bereiten Sie den Reaktionsmix in
einem geeigneten vorgekühlten Röhrchen in der Reihenfolge der folgenden Tabelle vor. Schütteln Sie den Salzmix vor dem
Pipettieren 20 Sekunden lang kräftig und zentrifugieren Sie ihn 5 Sekunden lang, um das Reagenz am Boden des Röhrchens
zu sammeln. Mischen Sie zwischen den einzelnen Reagenzien langsam durch 4- bis 6-maliges Auf- und Abpipettieren, ohne
dass Blasen entstehen, und Impulszentrifugieren Sie kurz.
Reaktion Mix 1 Reaktion N Reaktionen
Salt-Mix 10,0 µL N x 10,0 µL
IC/P-Mix 1,2 µL N x 1,2 µL
Master-Mix 20,0 µL N x 20,0 µL
Gesamtvolumen 31,2 µL N x 31,2 µL
7. Übertragen Sie 31,2 μL des Reaction Mix in jede Vertiefung mit der Probe und den externen Kontrollen. Mischen Sie, indem
Sie 10-mal langsam auf und ab pipettieren, ohne Blasen zu erzeugen. Verschließen Sie die 96-Well-Platte mit einem
geeigneten optisch klaren Klebstoff und zentrifugieren Sie die Platte bei 2000 rpm für 10 Sekunden, um den Inhalt am Boden
der Platte zu sammeln.
8. Legen Sie die 96-Well-Platte in einen validierten Thermocycler und befolgen Sie die unten aufgeführten gerätespezifischen
Protokolle und Analyseverfahren.
9.6 Eigenständige Anweisungen für die Probenverarbeitung in einem Deepwell-Format
Die folgende Anleitung ist ein Beispiel für die Abarbeitung von trockenen Abstrichproben unter Verwendung einer Deepwell-
Platte bis hin zum endgültigen Aufbau der Probenplatte. Im Folgenden wird davon ausgegangen, dass 94 trockene Abstrichproben
und zwei externe Kontrollen bearbeitet werden, bei denen die gesamten im LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Kit
enthaltenen Reagenzien verbraucht werden.
HINWEIS: Es wird empfohlen, die folgenden Anweisungen durchzulesen, bevor Sie versuchen, den Reaction Mix herzustellen. Alle
Komponenten, einschließlich des hergestellten Reaction Mix, sollten aufgetaut und auf einem Kühlblock aufbewahrt werden, der
zwischen 2 und 8 °C äquilibriert ist, um die Integrität der Reagenzien zu erhalten. Darüber hinaus wird empfohlen, den validierten
Thermocycler (d. h. Roche LC 480 II, ABI 7500 Fast Dx, ABI QS 5, ABI QS 7 Flex, ABI QS 7 Pro, Bio-Rad CFX96, Agilent AriaMx,
Agilent Stratagene Mx3005P oder den Analytik Jena qTOWER3) vor der Durchführung der nachstehenden Anweisungen bereits an
zu schalten, um sicherzustellen, dass die Leistung dieses Assays erhalten bleibt.
1. Tauen Sie die Komponenten des LumiraDx SARS-CoV-2 RNA STAR Complete Kits in einem zwischen 2 und 8 °C äquilibrierten
Kühlblock auf; d.h. LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Positive Control Media (Pos. Ctrl. Med.), LumiraDx SARS CoV-2
RNA STAR Complete Negative Control Media (Neg. Ctrl. Med.), LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Salt Mix, LumiraDx
SARS CoV-2 RNA STAR Complete Extraction Buffer, LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Internal Control & Primer Mix
(IC/P Mix), und LumiraDx SARS CoV-2 RNA STAR Complete Master Mix. Invertieren Sie jedes Röhrchen um, um es zu mischen,
und zentrifugieren Sie dann 5 Sekunden lang, um die Reagenzien am Boden des Röhrchens zu sammeln (Proben nicht
vortexen).
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BEDIENUNGSANLEITUNG | SD-QMS-SPEC-30216 Rev. 1| SD-COM-ART-00106 Rev. 1| JUNI20212. Gießen Sie 100 mL eines kompatiblen Transportmediums (Corning Transport Media, 0,85%ige Kochsalzlösung oder PBS) in
ein geeignetes Reagenzienreservoir. Übertragen Sie mit einer Mehrkanalpipette einen (1) mL in jedes Deepwell. Lassen Sie
zwei vorgesehene Vertiefungen, A1 und A12, für die in Schritt 4 zusammengestellten externen Kontrollen leer.
3. Geben Sie eine einzelne trockene Tupferprobe in jedes verwendete Deepwell. Weichen Sie den Tupfer mindestens 30
Sekunden lang ein und verrühren Sie ihn dann gründlich, indem Sie den Tupfer 5 Mal gegen die Seite des Deepwells drehen.
Drücken Sie den Tupfer an der Seite des Deepwells außerhalb der Flüssigkeit aus, bevor Sie ihn entfernen (achten Sie auf
Kreuzkontamination durch Spritzer). Entsorgen Sie den Tupfer im Bioabfall.
4. Stellen Sie das 1x PCM (Positive Control Media) durch Verdünnen von 200 µL Pos. Ctrl. Med. mit 600 µL Neg. Ctrl. Med. in
einem vorgekühlten Mikrozentrifugenröhrchen her. Stellen Sie das 1x NCM (Negative Control Media) zusammen, indem Sie
800 µL Neg. Ctrl. Med. in ein vorgekühltes Mikrozentrifugenröhrchen. Alternativ kann das PCM und NCM direkt im Deepwell
vorbereitet werden, wobei die Positionen A1 und A12 mit dem NCM bzw. PCM bestückt werden sollten.
5. Mischen Sie die in Schritt 3 vorbereitete Probe und die in Schritt 4 vorbereiteten externen Kontrollen, indem Sie 4 bis 6 Mal
langsam auf- und abpipettieren, ohne dabei Luftblasen einzubringen, und übertragen Sie dann 24,0 μL mit einer
Mehrkanalpipette in eine geeignete, vorgekühlte 96-Well-Platte. Geben Sie 4,8 µL Extraktionspuffer pro Vertiefung hinzu und
mischen Sie, indem Sie 10-mal langsam auf- und abpipettieren, während Sie die Luftblasen minimieren. Falls erforderlich,
versiegeln und zentrifugieren Sie die 96-Well-Platte, um die Probe am Boden der Vertiefung zu sammeln.
6. Unter der Annahme, dass 96 Reaktionen benötigt werden, bereiten Sie den Reaktionsmix in einem vorgekühlten 5-mL-
Röhrchen in der Reihenfolge der folgenden Tabelle vor. Schütteln Sie die Salzmischung vor dem Pipettieren 20 Sekunden lang
kräftig und zentrifugieren Sie sie 5 Sekunden lang, um das Reagenz am Boden des Röhrchens zu sammeln. Mischen Sie
zwischen den einzelnen Reagenzien langsam durch 4- bis 6-maliges Auf- und Abpipettieren, ohne Blasen zu erzeugen.
Reaktion Mix 100 Reaktionen
Salt-Mix 1000µL
IC/P-Mix 120µL
Master-Mix 2x 1000µL
Gesamt 3120µL
7. Übertragen Sie die Reaktionsmischung mit einer Einkanalpipette in ein vorgekühltes Reagenzienreservoir (für minimales
Totvolumen). Übertragen Sie dann mit einer Mehrkanalpipette 31,2 μl des Reaktionsgemischs in jede Vertiefung mit der
Probe und den externen Kontrollen. Mischen Sie durch 10-maliges langsames Auf- und Abpipettieren, ohne Blasen zu
erzeugen. Verschließen Sie die 96-Well-Platte mit einer geeigneten optisch klaren Folie und zentrifugieren Sie die Platte bei
2000 U/min für 20 Sekunden, um den Inhalt am Boden der Platte zu sammeln.
8. Legen Sie die 96-Well-Platte in einen validierten Thermocycler und befolgen Sie die unten aufgeführten gerätespezifischen
Protokolle und Analyseverfahren.
10. RNA STAR Complete-Setup für RocheTM LightCycler 480 II
Weitere Informationen finden Sie im "Benutzerhandbuch Artikelnummer 05152062001 0208". Die Anweisungen zur
Geräteprogrammierung sind für die Einrichtung einer gesamten 96-Well-Platte vorgesehen. Wenn nicht die gesamte Platte verwendet
wird, heben Sie bitte die Auswahl der Wells während der Analyse entsprechend auf.
10.1 Programmieren der Laufvorlage und der Mustervorlage
1. Starten Sie die LightCycler (LC) 480 Desktop Software (Version SW 1.5.1.62). Wenn Sie dazu aufgefordert werden, melden Sie
sich an der "Traceable Database" an.
2. Klicken Sie im Startbildschirm unten rechts in der Software auf das Werkzeugsymbol. Wählen Sie "Detection Formats" und
klicken Sie im sich öffnenden "Tools"-Fenster auf "New". Benennen Sie das neue 'Detection Formats' als "RNA STAR Complete
Template". Im Abschnitt 'Filter Combination Selection' wählen Sie '465-510' (Excitation - Emission) und '533-610'. Im
Abschnitt 'Selected Filter' 'Combination List' unter 'Name' geben Sie 'COVID' für '465-510' und 'IC' für '533-610' ein. Stellen Sie
sicher, dass der 'Melt Factor' für '465-510' auf '1' und für '533-610' auf '1', der 'Quant Factor' für '465-510' auf '1' und für
'533-610' auf '10' und die 'Max Integration Time (Sec)' für '465-510' auf '1' und für '533-610' auf '2' eingestellt ist. Klicken Sie
auf 'Close', um das Fenster 'Tools' zu verlassen.
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