Applikationsarten und tierschutzkonformes Töten von Tieren - Routes of application und methods of killing laboratory animals humanely

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Applikationsarten und tierschutzkonformes Töten von Tieren - Routes of application und methods of killing laboratory animals humanely
Applikationsarten und tierschutzkonformes Töten
                     von Tieren

Routes of application und methods of killing laboratory
                    animals humanely
Applikationsarten und tierschutzkonformes Töten von Tieren - Routes of application und methods of killing laboratory animals humanely
Applikationsarten / Routes of application
Applikationsarten und tierschutzkonformes Töten von Tieren - Routes of application und methods of killing laboratory animals humanely
Voraussetzungen                  Prerequisites

• sicherer Umgang mit dem Tier   • safe handling of the species
• eigene Ruhe                    • own calmness
• eigenes Zeitmanagement         • good time management
• alle Vorbereitungen            • all preparations made in advance
  abgeschlossen                  • safe and secure fixation of the
• sichere Fixation des Tieres      animal
• Kenntnisse der anzuwendenden   • knowledge of the technique(s) to
  Technik(en)                      apply
• ggf. geeignete Hilfspersonen   • if necessary, additional person at
                                   hand
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Wahl der                                     Choice of
       Applikationsart                             application route

•   Versuchszweck                           •   purpose of the experiment
•   Tierart                                 •   species
•   zu applizierende Substanz               •   substance to apply
•   erforderlicher Wirkungseintritt         •   onset of the effect
•   Anzahl der Applikationen                •   number of applications
•   Haltbarkeit der eingesetzten Substanz   •   stability of the substance
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Aerogene Applikation              Aerogenic application

• Vernebeln (Inhalationskammer)   • inhalation (chamber)
• lokales Aufbringen auf die      • local administration to the
  Nasenschleimhäute mit             nasal mucosa (animal awake or
  Pipette am wachen oder            under anesthesia)
  narkotisierten/sedierten Tier
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intratracheale Applikation   application into the trachea
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enterale Applikation           enteral application

• oral über Futter oder       • orally via food or drinking
  Trinkwasser; Substanz         water; substance must be
   muss schmackhaft sein,       palatable,
   Entmischung vermeiden        no demixing / segregation
   auf ausreichende Futter-     check animals for
   und Wasseraufnahme           sufficient food- and
   achten                       water intake
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enterale Applikation          enteral application

• oral über Schlundsonde      • orally via feeding tube
  Knopfsonde neben den          introduce the feeding
                                tube next to the incisor
  Schneidezähnen am oberen
                                teeth,
  Gaumen entlang Richtung       move it along the upper
  Kehlkopf vorführen            palate to the larynx
  Kopf des Tieres gerade        head of the animal has
  richten                       to be stretched
                                feeding tube can care-
  Knopfsonde bis zum Magen
                                fully be driven into the
  vorführen                     stomach

  max. Applikationsvolumen:     max. volume to apply:
  10 ml / kg KGW                10 ml / kg body weight
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Applikation per os
application per os
enterale Applikation            enteral application

• oral über Schlundsonde       • orally via feeding tube
   Knopfsonde neben den          introduce the feeding
   Schneidezähnen am oberen      tube next to the incisor
                                 teeth,
   Gaumen entlang Richtung       move it along the upper
   Kehlkopf vorführen            palate to the larynx
   Kopf des Tieres gerade        head of the animal has
   richten                       to be stretched
   Knopfsonde bis zum Magen      feeding tube can care-
                                 fully be driven into the
   vorführen
                                 stomach
   max. Applikationsvolumen:     max. volume to apply:
  10 ml / kg KGW                 10 ml / kg body weight

• rektal                       • rectally (suppository)
parenterale Applikationen   parenteral forms of
     durch Injektion             injection

 •   i.c. intracutan         •   i.c. intracutaneous
 •   s.c. subcutan           •   s.c. subcutaneous
 •   i.m. intramuskulär      •   i.m. intramuscular
 •   i.p. intraperitoneal    •   i.p. intraperitoneal
 •   i.v. intravenös         •   i.v. intravenous
 •   i.a. intraarteriell     •   i.a. into the artery
 •   intraartikulär          •   into the joint
 •   intracerebral           •   intracerebral
 •   epidural                •   epidural
requirements for injectable solutions:

- isotonic
- bodytemperature (never inject „directly from the fridge“)
- neutral pH
  tolerance for varying pH is
  oral > intravenous > intramuscular > subcutaneous
- non-irritating
Applikationsarten               routes of application
      subkutan (s.c.)                 subcutaneous (s.c.)

     Applikationsvolumen              application volume
     bis zu 10 ml/kg KGW              up to 10 ml/kg body weight

1. in Nackenfalte               1. into the scruff
   parallel zur Körperachse        parallel to the body axis
2. seitliche Bauchwand          2. lateral abdominal wall
   sehr flach einstechen und       angle of injection has to
   die subkutane Position der      be very flat
   Nadel überprüfen
Applikationsarten               routes of application
    intraperitoneal (i.p.)            intraperitoneal (i.p.)

Tier leicht kopfüber geneigt halten   hold the animal head first

Einstechen                                   inject
• im 45°-Winkel                              • in a 45°- angle
• paramedian im                              • paramedian into the
   unteren                                      lower third of the
   Bauchdrittel                                 abdominal cavity

Applikationsvolumen                           application volume up to
bis zu 10 ml/kg KGW                           10 ml/kg body weight
Applikationsarten              routes of application
 intravenös (i.v.)                intravenous (i.v.)

 Schwanzvene:                      tail vein:

• Restrainer                     • restrainer
• Schwanz erwärmen               • warming the tail
  (Hyperämisierung)                (Hyperämisierung)
• evtl. leichter Stau            • squeeze off the vessel
  an der Schwanz-                  at the base of the tail
  wurzel                         • flat angle of injection
• Einstich flach (10°)             (10°)
• seitliche Venen im             • lateral tail veins
  mittleren Drittel

   Applikationsvolumen bis zu        application volume up to
   5 ml/kg KGW (als Bolus)           5 ml/kg body weight
Applikationsarten                                                                  routes of application
     intravenös (i.v.)                                                                      intravenous (i.v.)
in den retrobulbären Venenplexus:                                                              retro-orbital injections:

• nur in Narkose!!!                                                                              • only under anesthesia!!!
• langsame Injektion                                                                             • slow injection
• keine reizenden                                                                                • no irritating
  Substanzen                                                                                       substances
• keine Tumorzellen                                                                              • no tumor cells
• max. 1 Injektion /                                                                             • max. 1 injection / day
  Tag                                                                                            • if repeated injections
• bei wiederholten                                                                                 are necessary,
  Injektionen immer                                                                                alternate the eye
  alternierend in beide                                                                          • max. 0,15 ml / 30g
  Augen                                                                                            body weight
• max. 0,15 ml / 30g       Aus: Weiss et. al „Tierpflege in Forschung und Klinik“ 3. Auflage

  KGW
Stellungnahme der GV-SOLAS zur            statement of the german society of
retrobulbären Injektion bei Mäusen:       laboratory animal science (GV-SOLAS):
Grundsätzlich nicht empfohlen, wegen      not recommended because of the local
traumatisch bedingter lokaler             tissue damage, and possible local
Veränderungen, lokalen Reizungen, nicht   irritations, not strictly i.v.
sicher intravenös.
Applikationsarten                  routes of application
    intramuskulär (i.m.)                 intramuscular (i.m.)

• wegen geringer Muskelmasse ist    • not recommended in mice
  eine i.m.-Injektion bei Mäusen      and other small rodents
  nicht empfohlen                     because of the small muscle
• max. 0,03 ml / Injektionsstelle     mass
• bei größeren Tierarten sind       • max. 0,03 ml / injection site
  größere Injektionsvolumina        • no problem in larger animals,
  problemlos möglich                  larger volumes possible
www.gv-solas.de   → Literatur → Tierschutzbeauftragte
der Wirkungseintritt / die     onset of the effect
Resorptionsgeschwindigkeit         / duration of
   der zu applizierenden         absorption of the
 Substanzen im Tierkörper       applied substances
     ist abhängig vom             depends on the
     Applikationsweg!          route of application!

           i.v. > i.p. > i.m. > s.c > oral
Alzet Pumpen                        Alzet pumps
zur kontinuierlichen                for continuous application
Applikation                         diffferent sizes /
verschiedene Größen /               volumes
Volumina

Zweikammersystem:                   Two-chamber-system:
äußere Kammer mit hochosmolarer     outer chamber filled with a
Substanz gefüllt → entzieht dem     substance of high osmolarity →
Körper Wasser → Volumenzunahme      draws water from the body →
innere Kammer mit zu                increase in volume inner chamber
applizierender Substanz gefüllt →   filled with substance to apply → is
wird durch Volumenzunahme der       emptied by the increasing volume
äußeren Kammer entleert.            of the outer chamber.
Pumpenmodelle   pump models
chirurgischer Eingriff für             implantation demands surgery
Implantation nötig;
Substanz zur Befüllung muss            substance must be very stable
ausreichend lange haltbar sein;
verschiedene Applikationswege          different routes of application
sind möglich (s.c., i.p., i.v., i.c.   are possible (s.c., i.p., i.v., i.c.
etc.)                                  etc.)
Tierschutzkonformes Töten von
           Versuchstieren

 Methods of killing laboratory animals
humanely in agreement with the animal
             welfare law
§ 4 Tierschutzgesetz         § 4 Animal Welfare Law

  Töten von Tieren              Killing of animals

 • Wirbeltiere nur nach        • vertebrates only
   vorheriger Betäubung           under anesthesia
   oder unter Vermeidung          or under avoidance
   von Schmerzen                  of pain
 • nur durch Personen, die     • only by people with
   die notwendigen Kennt-        the appropriate
   nisse und Fähigkeiten         knowledge and
   haben                         practical skills
§ 18 Tierschutzgesetz      § 18 Animal Welfare Law

  Töten von Tieren             Killing of animals

 § 18 (1) Nr. 5:              § 18 (1) Nr. 5:
 ordnungswidrig handelt,      killing of vertebrates
 wer… entgegen § 4 ein        without the appropriate
 Wirbeltier tötet             knowledge and practical
 Die Ordnungswidrigkeit       skills is a regulatory
 kann mit einer Geldbuße      offence and can be
 … geahndet werden            fined
§ 2                                 § 2 Decree on
  Tierschutzversuchs-                       laboratory animal
     tierverordnung                               welfare
    (TierSchVersV)                            (TierSchVersV)
  Anforderungen an die                    Requirements for the
       Tötung von                         killing of vertebrates
    Wirbeltieren und                                and
       Kopffüßern                               cephalopodes

(1) … nur von einer Person, die        (1) … only by a person, who
die Anforderungen nach                 fulfills the requirements of
Anlage 1 Abschnitt 2 erfüllt           Appendix 1 section 2

unter Betäubung oder sonst nur unter   under anesthesia or under

größtmöglicher Vermeidung von          avoidance of pain and suffering

Schmerzen und Leiden
§ 2                             § 2
  Tierschutzversuchs-            Decree on laboratory
     tierverordnung                   animal welfare
    (TierSchVersV)                   (TierSchVersV)
  Anforderungen an die           Requirements for the
       Tötung von                killing of vertebrates
    Wirbeltieren und                       and
       Kopffüßern                      cephalopodes

(2) … töten nur nach der        (2) … killing only in
Maßgabe der Anlage 2;           accordance with Appendix 2;
dabei ist das Verfahren         the chosen method has to be
anzuwenden, das
1. für das Tier die geringste   1. the least stressfull one
    Belastung bedeutet
                                2. compatible with the
2. mit dem Versuchszweck           purpose of the experiment
    vereinbar ist.
Anlage 1                   Appendix 1
 Abschnitt 2 TierSchVersV     section 2 TierSchVersV
Anforderungen an Personen,   Requirements for persons
      die Tiere töten              killing animals
Anlage 2 / appendix 2 TSchVersV
Anlage 2 / appendix 2 TSchVersV
Euthanasie                      Euthanasia

kommt aus dem griechischen:   derived from the Greek terms:
     eu bedeutet gut                 eu meaning good
  thanatos bedeutet Tod          thanatos meaning death

      „ein guter Tod“             „ a good death“

    Ein Tod, der unter          A „good death“ would be
     weitestgehender             one that occurs with a
  Vermeidung von Streß,
                                 minimum of pain, fear
 Angst und Schmerzen für
     das Tier eintritt               and distress
Anforderungen an die Euthanasie:   prerequisites for euthanasia

• Schmerzfreiheit                  • painless method
• schnelles Eintreten von          • rapid achievement of
 Bewußlosigkeit und Tod             unconsciousness and death
• minimale Fixation                • minimum of restraint
• schonend, ohne Angst und          required
 Erregung auszulösen               • minimum of fear and excitement
•Methode angepasst an Alter,       • method appropriate for the
 Tierart und Gesundheitsstatus      age, species and health status
• zuverlässig, reproduzierbar,     • method reliable, reproducible,
 irreversibel                       irreversible
• einfach anzuwenden               • simple to administer
• (sicher und akzeptabel für den   • (safe and acceptable for the
 Anwender)                          operator)
In Tierhaltungen und Laboratorien       In laboratories and breeding
 gibt es mehrere Gründe für das        facilities animals are killed for
        Töten von Tieren:                       various reasons:
  • Gewinnung von Blut und/oder          • to provide blood and /or other
  Organen für wissenschaftliche          organs for scientific purposes
  Untersuchungen
  • Erreichen bestimmter Abbruch-        • when levels of pain, distress and
  kriterien innerhalb eines              suffering are likely to exeed the
  Versuchsvorhabens                      designated level (humane endpoints!)

  • Zuchttiere die nicht mehr in der     • when they are no longer
  Zucht einsetzbar sind                  suitable for breeding
  • Nachkommen mit unerwünschten         • unwanted stock or those with
  Eigenschaften (Geschlecht,             unsuitable character-istics
  Genotyp etc.)                          (sex, genotype etc.)
Das Töten von Wirbeltieren darf nur     vertebrates are only allowed to
  durch Personen erfolgen, die die         be killed by people with the
notwendigen Fachkenntnisse besitzen           appropriate knowledge
Euthanasie                        Euthanasia

   mechanische Tötungsmethoden:         mechanical / physical methods:

• führen bei korrekter Ausführung    • correct application causes
  innerhalb weniger Sekunden zur       immediate loss of consciousness
  Bewusstlosigkeit und zum Tod         with subsequent death through
                                       physical trauma to the brain
• die Anwendung erfordert hohes
  persönliches Engagement,           • application requires personal
  Handfertigkeit, Geschicklichkeit     engagement and skills, it takes
  sowie die Überwindung der            strong efforts to overcome the
  natürlichen Abneigung gegenüber      natural aversion to actively
  dem aktiven Tötungsvorgang.          killing an animal
Euthanasie                                        Euthanasia
a) Zervikale Dislokation                         a) cervical dislocation
   (Genickbruch, „Strecken“)                         recommended for mice;
                                                     in rats < 150 g only
   empfehlenswerte Methode bei der Maus; bei
   Ratten nur unter 150 g KGW                    b) decapitation
                                                    guillotine in mice, rats and
b) Dekapitation
                                                    hamsters after sedation
   mit Guillotine bei Maus,                         in newborns with scissors
   Ratte, Hamster nach vorheriger Sedierung         without sedation
                                                                       c) shooting (free bullet
  bei Neugeborenen / Feten mit der Schere ohne
                                                                           or captive bolt)
  vorherige Sedierung
                                                                          for large mammals;
c) Bolzenschuss (zur Betäubung                                            with the bolt
                                                                           exsanguination
   mit anschließendem Entbluten)
                                                                          is required
   nur für größere Tierarten, mit den
   für die Tierart passenden Geräten
Euthanasie                      Euthanasia

 Injektionsmethoden:               injectable agents:

Barbiturate sind die Mittel    Barbiturates are the first
erster Wahl (Pentobarbital)    choice (Pentobarbital)

wann immer möglich, i.v.-      whenever possible: application
Applikation oder i.p. (bei     i.v. (i.p. in small rodents)
kleinen Versuchstieren)

sehr gut geeignet auch für     suitable for the euthanasia of
die Euthanasie trächtiger      pregnant animals, since it easily
Tiere, da sie plazentagängig   crosses the placenta and the
sind und schnell die Blut-     blood-brain-barrier
Hirn-Schranke passieren
Euthanasie                       Euthanasia
     Inhalationsmethoden:             inhalational methods:
   diese Methoden führen zu       lead to unconsciousness first,
   einer Bewusstlosigkeit vor             then to death
       Eintritt des Todes!

  üblicherweise Isofluran           common agent: isoflurane
bei kleinen Versuchstieren in   are either vaporized or delivered
   Narkosekammer oder in            as a gas into chambers or
  geeigneten Behältnissen.             anaesthetic circuits
Euthanasie                       Euthanasia
    Inhalationsmethoden:             inhalational methods:

                                  also possible as Open–Drop–
geht auch im „Tropfverfahren“:    Exposure:
• Tupfer                          • cotton pad
• geeignetes Behältnis wählen,    • bell jar or small container
  das sicher verschließbar ist       with a secure lid
• Tiere auf ein Gitter o.Ä.       • wire mesh; no direct
  setzen, kein direkter Kontakt      contact with the fluid
  zur Flüssigkeit                 • hood!
• unterm Abzug arbeiten
Euthanasie                     Euthanasia

    Inhalationsmethoden:           inhalational methods:

 Isofluran ist zu bevorzugen,    Isoflurane is to prefer but
weit verbreitet ist immer noch    still very common is the

    Töten mit CO2                    Killing with CO2
Bei Tötung mit CO2                      points to consider when killing
             unbedingt beachten:                             mice with CO2:
1.  nur für adulte Mäuse (NICHT geeinget für     1. for adult mice only (NOT suitable for
    Neugeborene und Jungtiere vor dem               newborns and animals before weaning!!!)
    Absetzen)
2. mögl. nicht im Tierhaltungsraum               2. not within the animal holding room
3. wenn möglich, Tiere im Heimatkäfig belassen   3. homecage preferred
4. andernfalls ausreichend große                 4. otherwise chambers of sufficient size
    Inhalationskammer wählen
5. zwischen einzelnen Tieren Kammer reinigen     5. clean chamber between animals
6. geräuscharmes Einströmen von CO2 in die       6. influx of CO2 without noise
    Kammer
7. kein Vorfüllen der Kammer                     7. no prefilling of the chamber
8. Gaseinstrom nicht zu schnell und nicht zu     8. influx not too slow and not too fast
    langsam                                      9. optimum: exchange 30% of the volume of
9. optimal: Austauschrate 30% des                    the chamber per minute (CO2 against air)
    Kammervolumens pro Minute (CO2 gegen Luft)
10. Flussmesser erforderlich!!!                  10. FLOWMETER
Richtlinie für das     Guideline concerning
  tierschutzkonforme       the humane killing of
Töten von (Labor-)tieren   (laboratory) animals

                    AVMA 2020
Euthanasie                               Euthanasia

Werden Tiere fachgerecht             Under professional anesthesia it is
narkotisiert, können auch Tötungs-   legitimate, to apply methods of
methoden angewendet werden, die      killing animals that woud not be
sonst nicht empfohlen sind.          recommended under other
Dabei muss sichergestellt sein,      circumstances.
dass der Tod unter Narkose           Here it has to be made sure, that
innerhalb kurzer Zeit eintritt       death occurs under this
(z.B. Perfusion, Entbluten,          anesthesia within short time (for
intrakardiale oder intrapulmonale    example: perfusion, bleeding,
Injektion von Narkotika).            intracardial or intrapulmonal
                                     application of anesthetics)
Euthanasie                                  Euthanasia
      Folgende Tötungsmethoden               The following methods are never
    dürfen nie angewendet werden:                      to be applied:

• orale oder rektale Verabreichung on    • oral oder rectal application of
  Narkosemitteln (zu langsam!!!!)          anesthetics (too slow!!)
• Tod durch Kälte, Tieffrieren in        • death by freezing / liquid nitrogen
  flüssigem Stickstoff (zu langsam!!!)     (too slow!!)
• elektrische Tötung (ausser bei         • electric shock, (only allowed in fish);
  Fischen), da Gefahr von Krämpfen         might cause cramps and pain)
  und Schmerzen                          • all methods involving Suffocation
• sämtliche Methoden, die auf dem          drowning, inhalation of helium,
  Prinzip des Erstickens beruhen           application of curare, strychnine,
  (Ertränken, Inhalation von Helium,       hydrocyanoic acid)
  Verabreichen von Curare, Strichnin,      would cause maximum fear and
  Blausäure), würden extreme               distress
  Angstzustände Hervorrufen und zum
  Ersticken bei vollem Bewusstsein
  führen
Euthanasie                  Euthanasia

Tötung von Tieren aus     Killing animals for welfare
 Tierschutzgründen:                  reasons:

ABBRUCHKRITERIEN           HUMANE ENDPOINTS

moribunde (=sterbende)    moribund (=dying) animals
Tiere durch regelmäßige    have to be identified by
   tägliche Kontrollen      regular daily controlls;
frühzeitig erkennen und     adequate action has to
 entsprechend handeln!              follow!
ABBRUCKKRITERIEN können sein:                    HUMANE ENDPOINTS can be:
• starke Gewichtsabnahme (> 20% des              •   weight loss (> 20% of the initial body weight;
  Ausgangsgewichtes; aber Vorsicht: Tumor-,          cave: tumor-bearing mice, ascites-mice)
  Aszitesmäuse)                                  •   apathy
• Apathie                                        •   strong reactions of defence /
• auffallende Abwehrreaktionen /                     aggressiveness when touching (as a
                                                     sign of pain)
  Aggressivität beim Anfassen
                                                 •   low body temperature
  (Schmerzanzeichen)
                                                 •   obvious difficulty in breathing (dyspnoe,
• niedrige Körpertemperatur                          cyanosis)
• auffällige Atembeschwerden (Dyspnoe,           •   centralnervous defects /
  Zyanose)                                           malfunctions or defects in motor
• zentralnervöse Störungen oder motorische           function (paralysis, cramps,
  Auffälligkeiten                                    spasms, compulsive movements)
  (Lähmungen, Krämpfe,                           •   open tumors or tumors of a certain size
  Zwangsbewegungen)                              •   severe injuries, non-healing wounds,
• ulzerierende Tumore oder Tumore ab einer       •   automutilation
  best. Größe                                    •   misapplication (for example orally)
• schwere Verletzungen, nicht heilende Wunden,
• Selbstverstümmelung
• Fehlapplikationen (z.B. per os)
Euthanasie                       Euthanasia

         Wichtig:                        important :
Tierkörper erst beseitigen      removal of the carcasses only
wenn sichergestellt ist, dass   after confirmation of death!!!
    die Tiere tot sind!!!

Todeszeichen:                     signs of death:
- Herzstillstand                  - cessation of heartbeat
- Atemstillstand                  - cessation of respiration
- keine Reflexe auslösbar         - absence of reflexes
- Absinken der Körper-            - lowering of the body
  temperatur auf
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