REPRODUKTION PFERD 4. Fortbildung des Graf Lehndorff Instituts für Pferdewissenschaften
←
→
Transkription von Seiteninhalten
Wenn Ihr Browser die Seite nicht korrekt rendert, bitte, lesen Sie den Inhalt der Seite unten
REPRODUKTION PFERD
4. Fortbildung des
Graf Lehndorff‐Instituts für
Pferdewissenschaften
16. Februar 2013
Programm 1. Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Ursachen und Behandlungsansätze (Dr. Juliane Kuhl, Wien) 2. Möglichkeiten und Grenzen der Zuchttauglichkeitsuntersuchung bei der Stute (Dr. Maximiliane Merkl, Neustadt/Dosse und Wien) 3. Zyklusmanipulation bei der Stute: aktueller Stand (Prof. Dr. Christine Aurich, Wien und Neustadt/Dosse) 4. Herstellung und Einsatz von Tiefgefriersamen in der Pferdezucht (Dr. Mareike von Lewinski, Neustadt/Dosse)
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
Geschlechterverteilung von Pferden im
Wilder Hengst und zickige Stute? Leistungssport
Dressur Springen
- 100 100
Hengste
Geschlechtsspezifische 80 Wallache 80
Rittigkeitsprobleme 60
Stuten
60
%
%
40 40
20 20
0 0
Juliane Kuhl
49
59
69
79
89
99
10
49
9
9
9
9
9
0
95
96
97
98
99
01
9
9
9
9
9
9
0
19
-1
-1
-1
-1
-1
-1
-2
-1
-1
-1
-1
-1
-2
8-
28
50
60
70
80
90
00
50
60
70
80
90
00
2
19
19
19
19
19
19
20
19
19
19
19
19
19
20
Besamungs- und Embryotransferstation
Vetmeduni Vienna Geschlechterverteilung der an Finalprüfungen des CHIO in
Aachen startenden Pferde (1928-2010)
Spicker 2010
Pferde in freier Wildbahn
Geschlechterverteilung in Springprüfungen
Haremgruppe Junggesellengruppe
Haremshengst und Stuten/Fohlen Hengste oder
Hengste und Stuten
Wallache
Hengste
Stuten
Jungpferde
CHIO Aachen Landesmeisterschaften
(2000-2010) BB (Finalprüfung 2012)
Spicker 2010; Pferdezuchtverband Brandenburg-Anhalt 2012
Hengst Wallach
Hypothalamus Hypothalamus
GnRH GnRH
LH FSH Hypophyse LH FSH Hypophyse
Inhibin
Östrogene
Testosteron
Leydig Sertoli- Hoden
-Zellen Zellen
Chirurgische Kastration
• Vorteil: effektiv, wenn bei jungen Tieren durchgeführt
• Nachteile: irreversibel
Testosteron bei adulten Tieren nicht immer gewünschte
Hengst- Spermato- Verbesserung der Verhaltensprobleme
verhalten genese
1
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
Alternativen zur chirurgischen Kastration beim Hengst
GnRH
Hypothalamus GnRH Impfung
GnRH Antikörper • Improvac/Equity
LH FSH Hypophyse • Dosis 2 ml
• Applikationsform laut Hersteller
Inhibin
Östrogene i.m., besser subcutan
Testosteron
Leydig Sertoli-
• 2x im Abstand von 4 Wochen
Hoden
-Zellen Zellen
• Cave: lokale Nebenwirkungen
• Zusätzlich Behandlung mit
Testosteron NSAID (bei Impfung und bis 7
Hengst- Spermato- Tage danach)
verhalten genese
GnRH Vakzine beim Hengst
Hypothalamus
GnRH
GnRH Antikörper
LH FSH Hypophyse
Inhibin
Hengst- Leydig Sertoli- Hoden
-Zellen Zellen
verhalten
Antikörperbildung bei jungen Antikörperbildung bei adulten Hengsten
Ponyhengsten (3-4 J.) (6-15 J.)
? Spermato-
genese
Turkstra et al. 2005 Janett et al. 2009
GnRH Vakzine beim Hengst GnRH Vakzine beim Hengst
• Wirkdauer sehr variabel
• Individuell und altersabhängig unterschiedlich
starke Immunantwort
• ältere Hengste → weniger Antikörper
(evtl. 3. Impfung)
• Samenproduktion und Plasma Testosteron
hängen nicht zusammen → Messung
Testosteron keine Aussage über Fruchtbarkeit
• Fruchtbarkeit im Anschluss u.U. reduziert
Plasma Testosteron Spermiengesamtzahl
Janett et al. 2009
2
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
Altrenogest beim Hengst
Hypothalamus
GnRH • Inhibition LH-Sekretion durch Gestagene
↓ LH Konzentration nach etwa 8 Tage
Verhaltensänderungen:
Gestagene LH FSH Hypophyse
↑ Dauer bis Erektion
↑ Dauer bis Ejakulation bzw.
Östrogene
Inhibin ↑ Inzidenz Ausbleiben der Ejakulation
Testosteron ↓ Hodengröße
Leydig Sertoli- Hoden
↓ tägliche Spermienproduktion
-Zellen Zellen
↓ morphologisch intakte Spermien
• Langzeitfolgen?
Testosteron
Hengst- Spermato-
verhalten genese
Brady et al. 1997; Squires et al. 1997
Altrenogest beim Hengst
• Regumate
• 0,044 mg/kg sid
• Einfach zu applizieren, dafür täglich notwendig
• Reversibel
• Dopingrelevant
Auszug aus der FEI Dopingliste 2013
Fragen an den Stutenbesitzer Besonderheit bei Pferden
• Wie äußern sich die Probleme genau? • Auch Stuten ohne aktives Ovargewebe
– Nimmt den Schenkel nicht an, buckelt, geht (Anöstrus, Ovarektomie) zeigen häufig
durch… Rosse
– Benimmt sich wie ein Hengst, ist aggressiv… • Grund: Steroidproduktion in der
– Wiederkehrende milde Kolik Nebennierenrinde
• Wann treten die Probleme auf? • Sinn: wahrscheinlich Festigung der
– Immer gleich sozialen Beziehung zw. Haremshengst
– Zu bestimmten Jahreszeiten (Frühjahr/Herbst) und seinen Stuten
– Wenn die Stute rosst
Asa et al. 1980; Ginther 1992
3
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
Rittigkeitsprobleme durch schlechten
Vulvaschluß?
• Schmerzreiz innerem
Organ →schmerzhaftes
Empfinden auf der
Körperoberfläche
• Schmerzsignale aus
Hautareal häufiger
→Gehirn assoziiert
Aktivierung des Pfades mit
Schmerzen im Hautareal
• Beispiel Mensch:
Herzinfarkt →
schmerzhaftes
Empfinden linke Schulter
bis Arm
• Stuten mit schlechter
Vulvakonformation
→häufig erhöhte
Empfindlichkeit in der
Flankengegend
Christoffersen et al. 2007
Studie Vulvaschluss Behandlung zyklusabhängiger Probleme
Rosseunterdrückung
• Verbesserung von
• Oxytocingabe in der
Rittigkeitsproblemen
Lutealphase
nach Caslick-OP • Luteolyse blockieren – Tag 8-14 p.ov.
• 6 Monate nach OP – 1x tgl. 60 IE Oxytocin
Probleme deutlich • Gelbkörperaktivität i.m.
besser oder simulieren
• Einsetzen von
verschwunden bei 12 Glasmurmeln in die
von 14 Stuten • Immunisieren gegen
GnRH Gebärmutter
– Sollen Conceptus
simulieren
Christoffersen et al. 2007
4
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
Glasmurmeln Oxytocingabe in Lutealphase
• Idee: Trächtigkeit simulieren
• 1-3 Glasmurmeln
(ø 30-35mm)
intrauterin
• Beginn Behandlung
24 Std. nach Ovulation
• Bei ca. 40% der Stuten persistierender • Oxytocin reguliert PGF2α Sekretion aus dem
Gelbkörper für 57-120 Tage Endometrium während der spontanen Luteolyse
• Feldstudie in der Schweiz: bei 12 von 30 Stuten • Dagegen ist Oxytocingabe während der frühen
berichten Besitzer von einer Verbesserung der Lutealphase effektiv, die Luteolyse zu blockieren
Verhaltensprobleme
Nie et al.2001; Burger et al. 2008 Abb. Aurich 2011
Oxytocingabe in Lutealphase Oxytocingabe in Lutealphase
• ↓PGF2α
• ↓ COX-2 Expression am Endometrium
• Effektiv zur Unterdrückung des Rosseverhaltens
• ↑ Progesteron über 30 Tage
Keith et al. 2013 Keith et al. 2013
Oxytocingabe in Lutealphase
Bindung verschiedener Gestagene an den
• Wirkdauer?
• Keith et al. 2013: uterinen Progesteronrezeptor
Min. 30 Tage p.ov. Rind
Bei 13 Stuten 1000
relative Bindung (%)
Pferd
• Vanderwall et al. 2007: Schwein
30-40 Tage p.ov.
bei 2 von 6 Stuten 500
≥ 40 Tage
bei den anderen 4 Stuten
Saisonale Effekte? 0
Progest. Norgest. Chlormad. Altrenogest
• Reversibel durch Applikation von PGF2α
Relative Bindung verschiedener Gestagene an den uterinen
Progesteronrezeptor bei Rind, Pferd und Schwein (nach Frey 1999, mod.)
Abb.: www.thelwell.org.uk
5
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
Chlormadinonacetat Altrenogest
• Keine Bindung an
• 0,044 mg/kg p.o. sid
equinen
Progesteronrezeptor - • Effektiv zur Unterdrückung von
daher wirkungslos Rossesymptomen
• Bisher einziges zur • Dauer bis Effekt ca. 3-4 Tage
Rosseunterdrückung bei
der Stute bei nationalen
• Reversibel
Turnieren zugelassenes • Zugelassen bei Stuten im
Präparat Turniereinsatz
• Seit 2013 von der FN – FEI: nach Deklaration (Form2)
nicht mehr zugelassen – FN: seit 2013 erlaubt bei Stuten
GnRH Impfung
• Improvac/Equity
• Dosis 2 ml
• Applikationsform laut Hersteller
i.m., besser subcutan
• 2x im Abstand von 4 Wochen
• Cave: lokale Nebenwirkungen
• Zusätzlich Behandlung mit
NSAID (bei Impfung und bis 7
Tage danach)
Immunreaktion nach GnRH Impfung in Abhängigkeit vom Reversibilität GnRH Impfung in Abhängigkeit vom
Alter der Stuten Alter der Stuten
• Rückkehr zu
regelmäßigen Zyklen
nach Impfung ist
altersabhängig
• Einteilung der Stuten:
– Kat. 1: ≤4 J. (N=25)
– Kat. 2: 5-10 J. (N=16)
– Kat. 3: ≥11 J. (N=10)
Equine Veterinary Journal Equine Veterinary Journal
Volume 45, Issue 1, pages 111-113, 6 MAY 2012 DOI: 10.1111/j.2042-3306.2012.00577.x Volume 45, Issue 1, pages 111-113, 6 MAY 2012 DOI: 10.1111/j.2042-3306.2012.00577.x
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.2042-3306.2012.00577.x/full#f2 http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.2042-3306.2012.00577.x/full#f1
6
Geschlechtsbedingte Rittigkeitsprobleme – Juliane Kuhl
GnRH Impfung Hengstverhalten bei der Stute
• Fazit:
– hoch effektiv Reproduktionsfunktion zu
unterdrücken
– variable Auswirkung auf Verhalten
– Reversibilität kann nicht garantiert werden
Hengstverhalten bei der Stute Smart Cody Joy – Quarterstute 15 J.
• Kann ausgelöst werden durch hohe Dosen an Progesteron Testosteron
– Östrogenen
• 2,2 nmol/l • 3,5 nmol/l
– Androgenen
– Anabolen Steroiden
• Aufspringen bei Eselstuten und Kühen • Referenzwerte: • Referenzwerte:
– Anöstrus:
Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Zuchttauglichkeitsuntersuchung
Gibt Aufschluss über die
Geschlechtsgesundheit
Möglichkeiten und Grenzen der
Fertilitätsprognose
Zuchttauglichkeitsuntersuchung Wird die Stute tragend?
bei der Stute Bleibt die Stute tragend?
Dr. Maximiliane Merkl Mit welchen Problemen ist
Klinik für Gynäkologie, Andrologie und Geburtshilfe zu rechnen?
Veterinärmedizinische Universität Wien
Veterinärmedizinische Universität Wien
Zuchttauglichkeitsuntersuchung Vorbericht
Vorbericht
Allgemeinuntersuchung Alter
Gynäkologische Untersuchung Reproduktionsstatus
Äußere Untersuchung
Bisherige Zuchtnutzung
Innere Untersuchung
rektal Verlauf vorheriger Trächtigkeiten / Geburten
vaginal
Weiterführende Untersuchungen Resorptionen, Aborte
BU Vorbefunde (Tupfer / Biopsie)
Zytologie
Biopsie Erkrankungen / Vorbehandlungen
Trächtigkeitsverluste bei der Stute in
Allgemeinuntersuchung Abhängigkeit von Alter von
Reproduktionsstatus
Trächtigkeitsverluste bis Tag 35 (n=1476)
Ist die Stute in der Lage ein Fohlen % 15
auszutragen? 10 3-8 Jahre
5 9-13 Jahre
> 14 Jahre
0
Bewegungsapparat Maidenstute Güststute Fohlen bei
Fuss
Ernährungszustand Trächtigkeitsverluste ab Tag 35 (n=837)
% 15
Konstitution
10 3-8 Jahre
Herz, Kreislauf 5 9-13 Jahre
> 14 Jahre
0
Maidenstute Güststute Fohlen bei
Fuss
Miyakoshi et al., J. Equ.Vet.Sci, 2012
1Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Trächtigkeitsverluste bei der Stute in Trächtigkeitsverluste bei der
Abhängigkeit vom Ernährungszustand Stute
% 25 Unabhängig von:
Zwillingsreduktion
20 Reproduktionsstatus der Stute
Tendenziell weniger Verluste in der Frühträchtigkeit bei Maidenstuten
15
Schlechter EZ
10 Guter EZ Erhöhtes Risiko bei:
5 Älteren Stuten (>9 Jahre)
Stuten mit schlechtem Ernährungszustand
0
Belegung in der Fohlenrosse
Trächtigkeitsverluste Trächtigkeitsverluste
bis Tag 35 Tag 35 bis Geburt Stuten mit Endometriumzysten
Miyakoshi et al., J. Equ.Vet.Sci, 2012 Miyakoshi et al., 2012
Konformation der Vulva und
Schamschluss
optimal
Vulva steht senkrecht
Guter Schluss
Dorsaler Schamwinkel überragt
Beckenboden max. 4 cm
Abweichungen
Vulva stark geneigt
Schlechter Schluss
Adspektion des äußeren Sehr lange Scham
Dorsaler Schamwinkel überragt
Genitale Beckenboden deutlich
9 Bilder aus Equine Reproduction, 2nd Edition
Konformation der Vulva und Konformation der Vulva und
Schamschluss Schamschluss
2Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Konformation der Vulva bei Vollblutstuten Fertilität von Vollblutstuten (n=305) in
(n=305) in Abhängigkeit vom Alter Abhängigkeit von der Konformation der Vulva
Hemberg et al. 2005, Retrospective study on vulvar conformation in relation Hemberg et al. 2005, Retrospective study on vulvar conformation in relation
to endometrial cytology and fertility in thoroughbred mares to endometrial cytology and fertility in thoroughbred mares
Status der Stute bei
% 100 % 90 Vorstellung auf der
90 Deckstation:
80
80
70 gute Konformation
70
3-5 Jahre 60
60
6-8 Jahre 50
50 Caslick operiert
40 9-11 Jahre 40
30 > 11 Jahre 30
20 20 Caslick OP erst nach
10 Belegung
10
0
gute Konformation der Vulva, keine Caslick operiert (gesamt) 0
Caslick OP indiziert Konzeptionsrate Geburt eines lebenden Trächtigkeitsverluste
Fohlens
Konformation und Schluss der
Adspektion des äußeren Genitales
Vulva
Eine schlechte Konformation der Vulva sowie
mangelhafter Schamschluss
Treten vermehrt bei älteren, multiparen Stuten auf
Können eine Ursache für Fertilitätsstörungen sein
Subklinische Endometritiden
Geringere Konzeptions- und Abfohlraten
Geringere Zahl lebender Fohlen
Rechtzeitige Behebung des Problems
Caslick OP
Fütterung anpassen
Endometriumzysten
Ätiologie: Lymphlakunen oder dilatierte
Uterindrüsen
Stuten 7-14
Jahre
Inzidenz: Ø 22,4% 28%
Stuten >14
Jahre
72%
Vermehrtes Vorkommen bei:
Alten Stuten
Transrektale Palpation und Multiparen Stuten
Oft in Verbindung mit weiteren Veränderungen des
Sonografie Endometriums
Stanton et al., J.Equ.Vet.Sci., 2004
3Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Trächtigkeitsverluste bei Stuten mit
Endometriumzysten
Endometriumzysten
Mögliche Probleme:
Trächtigkeitsuntersuchung
Dokumentation!
% 15 Stuten mit
Endometriumzysten Behinderung der Motilität des
10 (n=177) Embryo
Eingeschränkte Versorgung des
5 Stuten ohne Zysten Embryo / Fetus
(n=2131)
0 Prognose für die Fruchtbarkeit abhängig von
Trächtigkeitsverluste
bis Tag 35
Trächtigkeitsverluste
Tag 35 bis Geburt
Anzahl, Größe und Lokalisation der Zysten im
Uterus
Miyakoshi et al., J. Equ.Vet.Sci, 2012 Stanton et al., J.Equ.Vet.Sci., 2004
Ovartumoren Granulosazelltumor Granulosathekazelltumor
Granulosathekazelltumor Häufigster Ovartumor bei der Stute
Terratom
Ovar vergrößert, derb, multizystische bis
Zystadenom wabenartige Struktur
Terratom
Endokrin aktiv: Inhibin, Steroide
Zystadenom
Kontralaterales Ovar atrophisch
Verhaltensänderungen: hengstartig, aggressiv, dauerrossig,
anöstrisch
Progesteron dauerhaft < 1 ng/ml
Testosteron > 0,1 ng/ml
Therapie: chirurgische Entfernung
Bilder aus Equine Reproduction, 2nd Edt.
Granulosathekazelltumor
Vaginale Untersuchung
Bilder aus: Equine Reproduction, 2nd Edt. 24
4Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Vaginale Untersuchung Beurteilung der Zervix
Diagnose des Zyklusstandes
Funktionalität der Zervix
Hinweis auf Erkrankungen
Sonstige Veränderungen
Wenn Hinweis auf gestörte
Zervixfunktion
Manuelle Palpation
Vaginale Inspektion
Weiterführende
Untersuchungen
28
Endometriumtupfer Ergebnisse Endometriumtupfer
Bestimmung des Keimspektrums im Ergebnisse1)
Uterus Echte Deckinfektionen sind sehr selten!
T.equigenitalis, P.aeruginosa, K.pneumoniae (Typ 1,2,5)
Wann? Meist bedingt pathogene Keime
Vor Zuchtsaison zum Nachweis von Häufigste Erreger
latenten Infektionen β-hämolysierende Streptokokken (56%)
Endometritis und Fruchttod E. coli (15%)
Staph. aureus (10%)
Abort infolge von Plazentitis
Bei Verdacht auf Endometritis Interpretation der Ergebnisse immer im Zusammenhang mit
Auswahl des geeigneten Antibiotikums der Klinik!
Resistenztest nicht vergessen!
1)
Beaufort Cottage Laboratories (2002–07)
5Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Endometriumtupfer Low-volume-uterine-lavage
LeBlanc et al., Theriogenology 2007; Niel, Theriogenology, 2005
Wann?
Falsch negative Ergebnisse möglich Stuten mit Fruchtbarkeitsstörungen
Tupfer kommt nur mit kleinem Bereich des Endometriums in Bei Verdacht auf subklinische Endometritis
Kontakt Negative Tupferprobe(n)
Bakterien besiedeln nicht immer die gesamte
Oberfläche des Uterus Vorteil
Plaques – Bildung möglich Größeres Areal des Endometriums wird erfasst
Schutz vor körpereigener Immunantwort und Antibiose?
Höhere Sensitivität im Vergleich zur reinen
z.B. E.coli
Tupferprobe!
(LeBlanc et al., Theriogenology 2007)
Low-volume-uterine-lavage Zytologie
Verschiedene Entnahmetechniken
Durchführung
Tupfer / Zytobrush / Low Volume Flush
Katheter (10 - 12 cm) bzw. lange Inseminette in den Mikroskopie
Uterus vorführen
Anzahl Epithelzellen und Entzündungszellen (PMNs)
60-80 ml sterile Kochsalzlösung infiltrieren
Bakterien, Pilze
Rektale Massage des Uterus Sonstige Verunreinigungen
Ablassen der Flüssigkeit in steriles Röhrchen
Zentrifugation bei 400 g für 10 min Verschiedene Arten der Auswertung
Dekantieren bis auf 5 ml Anteil PMNs / Epithelzellen
Tupferprobe aus dem Pellet für BU Anzahl PMNs / Gesichtsfeld
Menge an Debris Diff Quick ®
Card, Theriogenology, 2005
Zytologie: Vergleich verschiedener Zytologie: Vergleich verschiedener
Entnahmetechniken bei Stuten mit Entnahmetechniken bei Stuten mit
chronischer Infertilität chronischer Infertilität
Tupfer Zytobrush Low Volume Flush Tupfer Low Volume Flush
Intakte Zellen Intakte Zellen
60
Deformierte Deformierte
50 Zellen Zellen
40 Zellfragmente Zellfragmente
30
20
Cytobrush
10 Intakte Zellen
0 Deformierte
Zellen/Gesichtsfeld PMN/Gesichtsfeld PMN/Epithelzelle Zellen
Cocchia et al., Theriogenology 2012 Cocchia et al., Theriogenology 2012
6Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Zytologie: Einfluss verschiedener Entahme-
und Auswertetechniken bei Stuten mit
Zytologie
chronischer Infertilität (n=20)
Anzahl PMNs/Gesichtsfeld PMNs / Epithelzellen
Zytologie variiert stark mit der Entnahmetechnik
Gesamtzellzahl, Anzahl PMNs, Anzahl Epithelzellen
Tupfer Tupfer Intakte / zerstörte Zellen
Zytobrush Zytobrush Andere Entzündungszellen
Low Volume Flush Low Volume Flush Hintergrund
% 100
Hoher Grad an falsch positiven und falsch negativen
% 100 Ergebnissen
50 50 Entnahmetechnik bei der Auswertung berücksichtigen
0 Kaum zusätzliche Informationen
keine moderate 0
akute Endometritis Bei akuter Endometritis: Diagnose mittels gyn. Untersuchung und BU
Entzündung Entzündung
Diagnose Bei subklinischer Endometritis: Aussagekraft zu ungenau
Diagnose
Cocchia et al., Theriogenology 2012
Biopsie Auswertung Biopsie
Normales Endometrium Akute Entzündung
Wann? (Lutealphase) PMNs in Epithel, Drüsen
Fruchtbarkeitsstörung ohne klinische Befunde gleichmäßige Verteilung der und Stratum compactum
Alte Maidenstuten Uterindrüsen,
Vorberichtlich langwierige Endometritiden kaum zelluläre Infiltration
Konformationsänderungen der Vulva
Entzündliche und degenerative Veränderungen
werden erfasst!
Wichtig: Immer Zyklusstand und Vorbericht angeben!
Auswertung Biopsie Endometriumbiopsie
Chronisch degenerative Zuordnung des Endometriums zu
Veränderungen Kategorien in Abhängigkeit vom
Reproduktionsstatus (n= 105)
(Endometrose) Rosse Gelbkörperphase Anöstrus
Drüsennester 35
Periglanduläre Fibrose Veränderungen 30
Erwartete
Anzahl Stuten
Kategorie des 25
Zystische Dilatation von Abfohlrate
Endometriums 20
Drüsen 15
I Keine >80 %
Endometriumsatrophie 10
IIA Geringgradig 50-80% 5
Chronische Entzündung IIB Mäßig 10-50% 0
Lymphozyten, I bis IIA IIA bis B IIB III
Plasmazellen III DeutlichZuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Zuordnung des Endometriums zu Kategorien Zuordnung des Endometriums zu Kategorien
in Abhängigkeit vom Alter (103 Stuten) in Abhängigkeit vom Alter (103 Stuten)
12 Jahre 12 Jahre
30 30
Tragend: Tragend: Tragend: Tragend:
25 25 89% (8/9)
Anzahl Stuten
Anzahl Stuten
82% (31/38) 80% (12/15) Keine Info
20 20
15 15
10 10
5 5
0 0
I bis IIA IIA bis B IIB III I bis IIA IIA bis B IIB III
Kategorie Kategorie
Aurich et al. 2011 Aurich et al. 2011
Endometriumbiopsie
Beurteilung der morphologischen Veränderungen
des Endometriums in jeder Zyklusphase möglich
Alter der Stute hat einen signifikanten Einfluss
auf die Kategorisierung des Endometriums und
die Fertilitätsprognose
Durch gutes Management sind gute bis sehr gute
Trächtigkeitsraten auch bei Stuten höherer
Kategorien möglich!
Was kann ein einmalige ZTU
nicht leisten?
Aurich et al. 2011
Belegungsinduzierte
Ausbleiben der Ovulation
Endometritis
8Zuchttauglichkeitsuntersuchung – Maximiliane Merkl
Art der Besamung und
Trächtigkeitsraten an der Conclusio
Besamungsstation der Vetmeduni Wien
Art der Besamung
Trächtigkeitsraten am Wesentlich für die Fruchtbarkeit einer Zuchtstute ist ein
Ende der Saison
gutes Management
100 100
Voruntersuchung von Zuchtstuten vor der Saison
80 80
% der 60 60 Fruchtbarkeitsmindernde Probleme rechtzeitig vor
Stuten
40 40 Saisonbeginn abstellen
20 20 Anpassung des Besamungsregimes und des
0 0 Managements
Regelmäßige und systematische Untersuchungen
während der zur Belegung genutzten Rosse
Vielen Dank!
…Fragen?
9Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Zyklusmanipulation bei der Stute
Manipulation des Zyklus bei der Stute
• Rosseinduktion
‐ Aktueller Stand ‐
• Ovulationsinduktion
Christine Aurich • Rosseverschiebung
Graf Lehndorff‐Institut für Pferdewissenschaften und • Ovulationsinduktion im Frühjahr
Besamungs‐ und Embryotransferstation
Veterinärmedizinische Universität Wien
Indikationen für eine
Zyklusmanipulation bei der Stute Anforderungen an die
Zyklusmanipulation bei der Stute
• Terminierung des Rosseeintrittes
• Vorhersagbarkeit des
• Terminierung des optimalen Besamungszeitpunktes
Wirkungseintritts
– begrenzte Verfügbarkeit des Hengstes
• Wiederholbarkeit der
– Probleme mit dem Samentransport
Wirkung
– Einsatz von Tiefgefriersamen
– Turniereinsatz • Keine negative Beeinflussung
der Fruchtbarkeit
• Zyklussynchronisation
• Keine Nebenwirkungen
• Prophylaxe und Therapie pathologischer Ovarbefunde
Wiederholbarkeit der Ansprechbarkeit der
Ovulation im nicht manipulierten Zyklus der Stute
• In aufeinanderfolgenden Rossen keine Behandlung
ovulieren Stuten mit einem
ovulatorischen Follikels (mm)
60
Durchmesser des prä-
vergleichbaren Durchmesser des
präovulatorischen Follikels 40
• Auch der Verlauf des 20
endometrialen Ödems
(„Radspeichenstruktur“) verhält 0
se
se
sich in aufeinanderfolgenden
os
os
R
R
1.
2.
Rossen sehr ähnlich Cuervo‐Arango & Newcombe 2008)
Durchmesser des präovulatorischen
Follikels bei Stuten (n=20) in
2 aufeinanderfolgenden Rossen
Nach Aurich 2010 modifiziert
1Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Rosseinduktion Rosseinduktion bei der Stute
= Vorzeitiger Abbruch der Lutealphase • Luteolytische Substanzen:
– Prostaglandin F2 ,z.B. Dinoprost, 5‐10 mg/Tier
Indikationen: – PGF2 ‐Analoga (= biochemisch modifiziert)
• Vorverlegung der Rosse bei Stuten zur z.B. Cloprostenol, 100‐250µg/Tier
Besamung, da Hengst/Samen sonst nicht • einmalige Applikation
verfügbar • Voraussetzung: Vorhandensein eines endokrin
aktiven, auf PGF2 ansprechbaren Gelbkörpers
• Vorverlegung der 2. Rosse post partum (= Blütegelbkörper ‐> zwischen Tag 5 und 14 des
Zyklus)
• Beseitigung eines persistierenden Gelbkörpers
• Abbruch einer Frühträchtigkeit
Genestran ad us. vet.
Synthetische Prostaglandin‐Injektionslösung für Rinder, Rosseinduktion bei der Stute
Pferde und Schweine
Eigenschaften / Wirkungen
• Genestran enthält als Wirkstoff (+)‐Cloprostenol, den
biologisch aktiven Teil des synthetischen Prostaglandins
Cloprostenol, welches ähnlich wie das natürliche endogene
PGF2α wirkt. Da in Genestran nur das biologisch aktive (+)‐
Cloprostenol vorhanden ist, genügen bereits geringe Dosen,
um luteolytische Effekte und/oder stimulierende
Wirkungen auf das Myometrium zu erzielen. Die Belastung
durch Fremdsubstanzen wird gering gehalten und die
notwendige Wartezeit auf ein Minimum reduziert.
Quelle: Tierarzneimittel Kompendium der Schweiz
Rosseinduktion bei der Stute
‐ Zeitpunkt der PGF2‐Injektion Rosseinduktion bei der Stute
• Dauer bis Rosseeintritt und Ovulation abhängig von
Follikelwachstum auf den Ovarien zum Zeitpunkt
der Prostaglandin‐Applikation
1 Früh in der Lutealphase ‐> relativ kleiner,
wachsender Follikel ‐> später Eintritt der Ovulation
1 2
2 Später in der Lutealphase ‐> großer Follikel
im Wachstum: schneller Eintritt der Ovulation
oder Follikelatresie und Neuanbildung eines
Follikels, daher später Eintritt der Ovulation
Rosse Lutealphase Rosse
2Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Einfluss von Cloprostenol‐Dosis und Follikelgröße Einfluss von Cloprostenol‐Dosis und Follikelgröße
auf das Intervall bis zur Ovulation auf das Intervall bis zur Ovulation
(Newcombe et al. 2008) (Newcombe et al. 2008)
Durchmesser des dominanten Follikels bei Cloprostenol‐Injektion: Durchmesser des dominanten Follikels bei Cloprostenol‐Injektion:
28‐31mm 32‐35mm >36mm 28‐31mm 32‐35mm >36mm
Intervall bis zur Ovulation (Tage)
Intervall bis zur Ovulation (Tage)
Einfluss von Cloprostenol‐Dosis und Follikelgröße Einfluss der Cloprostenol‐Dosis auf Intervall bis zu
auf das Intervall bis zur Ovulation Ovulation sowie die Ovulationsrate des
(Newcombe et al. 2008)
dominanten Follikels (Newcombe et al. 2008)
Durchmesser des dominanten Follikels bei Cloprostenol‐Injektion:
28‐31mm 32‐35mm >36mm Tage bis zur Ovulation Ovulationsrate
5 100
Tage bis zur Ovulation
Ovulationsrate (%)
4 80
3 60
2 40
1 20
0 0
75
,5
25
75
5
0
5
12
25
62
12
8,
Dosis von Cloprostenol (µg)
Intervall bis zur Ovulation (Tage)
Zeitlicher Eintritt von Rossebeginn und Ovulation nach Behandlung Follikelgröße bei Ovulation nach PGF2α
mit PGF2α in niedrigen Dosierungen (Cuervo‐Arango & Newcombe 2008)
(= 10 bzw. 2,5% der empfohlenen Dosierung)
(nach Handler et al. 2004, modifiziert)
ovulatorischen Follikels (mm)
60
Durchmesser des prä-
Intervall von
0,8mg PGF/100kg
40
*
0,2mg PGF/100kg
PGF-Behandlung bis...
Kontrolle
20
Ovulation
0
Kontrolle Cloprostenol
Rossebeginn
Durchmesser des präovulatorischen Follikels bei Stuten
mit Spontanovulation bzw. nach Applikation von
0 5 10 15 20 Cloprostenol (125 bis 250 µg) zur Rosseinduktion
Tage (n=13)
*signifikante Unterschiede in der Follikelgröße
3Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Rosseinduktion bei der Stute Rosseinduktion bei der Stute
Die Cloprostenol‐Dosis beeinflusst das Intervall von
• Schon geringe Dosierungen der Applikation zur Ovulation
von PGF2α (1mg/Tier) und Insbesondere bei großen Follikeln und hoher
Cloprostenol (8,75 µg/Tier) Dosierung kann die Ovulation sehr schnell eintreten
wirken luteolytisch
(‐> Untersuchungsintervall anpassen!)
• PGF2α und seine Analoga
wirken zusätzlich luteotroph Die PGF2α ‐Behandlung reduziert die Größe des
und erhöhen die endogene dominanten Follikels bei der Ovulation im Vergleich
LH‐ und FSH‐Sekretion zu unbehandelten Kontrollzyklen
Aber: In 20 bis 35% der Fälle kommt es zur
Regression des dominanten Follikels und Neubildung
Effekt des PGF‐Analogons Luprostiol auf eines Follikels, der schließlich ovuliert ‐>
die LH‐Sekretion bei 4 anovulatorischen Verzögerung der Ovulation
Stuten (Jöchle et al. 1987)
Ovulationsinduktion bei der Stute
Ovulationsinduktion bei der Stute
Ovulationsinduktion
Ovulationsinduktion bei der Stute
= Vorzeitige Auslösung der Ovulation Induktion der Ovulation durch:
Indikationen: 1. Stimulation eines endogenen LH‐Peaks vor dem
• Terminierung der Ovulation im Hinblick auf die physiologischen durch GnRH‐Analoga
Belegung der Stute (Ovulation optimal innerhalb von 2. Applikation von (rekombinantem) LH bzw. LH–
Analoga (hCG)
24h nach KB mit Frisch‐ oder Kühlsamen)
Ovulation tritt in beiden Fällen nach 24 bis 48
• Terminierte Besamung (z.B. 30 und 42h nach hCG) bei Stunden ein (Maximum = 36h post injektionem)
Verwendung von TG‐Samen Die Entscheidung zur Ovulationsinduktion sollte
• Stimulation der Ovulation bei Stuten mit reduzierter möglichst frühzeitig getroffen werden, um den
endogener LH‐Sekretion (?) optimalen Zeitpunkt wählen zu können
4Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Ovulationsinduktion bei der Stute Ovulationsinduktion bei der Stute
GnRH und –Analoga
Voraussetzungen:
wiederholte Injektion (z.B. bei Buserelin in 12h‐Intervallen)
1. Stute in Rosse
(DD: Vorhandensein eines Langzeitformulierungen (z.B. Ovuplant)
Zwischenrossefollikels) Humanes Choriongonadotropin
2. Follikel von 35mm Einmalige Applikation von 1500 (bis 3000 IE) ist zur
3. Radspeichenstruktur +++ Ovulationsinduktion ausreichend
Ovulationsinduktion, sobald ca. 90% der Stute ovulieren innerhalb von 48h nach Injektion,
diese Kriterien erfüllt sind das Maximum der Ovulationen 36h nach Injektion.
Auftreten von Ovulationen nach Applikation
von hCG (1500 IE) bei Stuten im Östrus Ovulationsinduktion mit hCG (2500IE) vs.
Deslorelin (1,5mg)(McCue et al. 2007)
40
% der behandelten Stuten
Gruppe N Follikel Intervall bis %
(mm) bei zur Ovulationen
30
Applikation Ovulation innerh. 48h
Kontrolle 19 38,9 ± 2,2 3,1 ± 1,6a 36,8%a
20
hCG 128 40,3 ± 2,9 2,0 ± 0,7b 88,3%b
10
Deslorelin 101 40,4 ± 2,8 1,9 ± 0,7b 90,1%b
0
6 12 18 24 30 36 42 48 54 >54
ab: pZyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Zusammenfassung Ovulationsinduktion
• Sichere Ovulationsinduktion mit hCG und Deslorelin
• Gute Wiederholbarkeit der Ovulationsinduktion
• Aber: 1. Ovulationsinduktion durch
Intervall PGF bis Ovulation (Tage)
• hCG führt bei häufiger Applikation zur Bildung von hCG (1500 IE; n=47) 30
Antikörpern (selten) Ovuplant (Entfernung 48h nach
• Deslorelin‐Implantat führt bei etwa 25% der Stuten zu Applikation; n=48)
20
verlängerten interovulatorischen Intervallen Ovuplant (keine Entfernung; n=27) 10
2. Rosseinduktion 5 bis 9 Tage
nach Ovulation 0
hCG Ovuplant Ovuplant
entfernt
3. Intervall bis zur nächsten
Ovulation als Zielgröße
Entwicklung von rekombinantem LH Einsatz von rekombinantem LH
für den Einsatz beim Pferd zur Ovulationsinduktion bei der Stute
(Jablonka‐Shariff et al. 2007) (Yoon et al. 2007)
Synthese von rekombinantem 100
equinem LH in einer Hamster‐
Ovulationsrate (%)
80
Ovarzelllinie
60
40
20
0
Kontrolle hCG 0,3 0,6 0,75 0,9
mg rekombinantes LH
Ovulationsrate bei unbehandelten Kontrollstuten sowie mit hCG bzw.
verschiedenen Dosierungen von reLH behandelten Stuten
Behandlungsschemata bei Belegung mit Behandlungsschemata bei Belegung mit
Frisch‐ oder gekühlter Transportsamen Tiefgefriersamen
FK FK+hCG FK+KB FK FK+hCG FK+1.KB FK+2.KB
FK 42h
30h
ROSSE Tag 3 Tag 4 Tag 5 Tag 6
ROSSE Tag 3 Tag 4 Tag 5 Tag 6
36h
Ovulation
Ovulation
FK = Follikelkontrolle
FK = Follikelkontrolle hCG = Injektion von hCG (1500 IE)
hCG = Injektion von hCG (1500 IE) 1.KB = 1. Besamung mit TG‐Samen (30 Stunden nach hCG‐Injektion)
KB = Besamung, bei Ausbleiben der Ovulation Nachbesamung nach 48h 2.KB = 2. Besamung mit TG‐Samen (42 Stunden nach hCG‐Injektion)
6Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Einfluss einer Zyklusmanipulation auf Trächtigkeitsraten Doppelovulationen nach Rosseinduktion
(per Zyklus) und Doppelovulationsraten mit Cloprostenol
(nach Katila 2003, modifiziert) (Cuervo‐Arango & Newcombe 2009)
Behandlung Trächtigkeitsrate* Doppelovulationen
PGF 48,7 % 16,2 %
hCG 47,9 % 10,7 %
PGF+hCG 48,7 % 17,2 %
Keine 43,6 % 9,9 %
*Besamung mit gekühltem Transportsamen
Auftreten von hämorrhagischen Follikeln nach
Auftreten von hämorrhagischen Follikeln nach Rosseinduktion mit Cloprostenol
Rosseinduktion mit Cloprostenol (Cuervo‐Arango & Newcombe 2009)
(Cuervo‐Arango & Newcombe 2009)
„Nebenwirkungen“ bei Rosse‐ und
Ovulationsinduktion
• Dosierung: 2mg/kg 2mal täglich • Doppelovulationen
• Eventuell Probleme bei Stuten, die aufgrund Zwillingsgraviditätsrate
verschiedener Indikationen mit NSAIDs behandelt Trächtigkeitsuntersuchung vor
werden??? Tag 16 post Ovulationem
• Behandlung mit Dexamethason (50mg bei Besamung) • Anovulatorische
oder NSAIDs nach Dosierungsanleitung führte in hämorrhagische Follikel
eigenen Studien nicht zu einem Ausbleiben der Konzeptionschance
Ovulation
7Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Rosseverzögerung bei der Stute
Rosseverzögerung bei der Stute
= Verschiebung der Rosse durch Gestagenapplikation
Indikationen:
• Verschiebung der Rosse in einen Zeitraum, wo
Samen/Hengst verfügbar
• Verschiebung der Fohlenrosse zur besseren
Uterusinvolution
• Ständige Unterdrückung der Rosse bei Sportpferden
• Induktion von fertilen Ovulationen im Frühjahr
Controlled Internal Drug Release = CIDR
Rosseverzögerung bei der Stute
Rind
• Nur Gestagene, die an
den equinen
relative Bindung (%)
1000 Pferd
Schwein
Progesteronrezeptor
500
binden, sind wirksam
0
• Applikation >8 Tage
Progest. Norgest. Chlormad. Altrenogest
• Vaginal“spiralen“
Relative Bindung verschiedener Gestagene an den uterinen
Progesteronrezeptor bei Rind, Pferd und Schwein (nach Frey 1999, mod.)
• Altrenogest (0,044mg/kg
einmal täglich oral)
Progesterone Releasing Intravaginal Device
= PRID
Rosseverzögerung bei der Stute
• Eintritt der Rosse:
nach Vaginalspiralen: ca. 2‐3 Tage
nach Altrenogest: ca. 3‐4 Tage
• Probleme
1. Ovulationen während der Gestagenapplikation
Prostaglandin bei Behandlungsende
2. Intervall bis zum Eintritt der Rosse/Ovulation
abhängig von Follikelgröße
Ovarkontrolle bei Behandlungsende
8Zyklusmanipulation bei der Stute – Christine Aurich
Behandlungsschema
1. CIDR‐B für 10 bis 12 Tage
2. Wenn Follikel > 30mm
Ovulationsinduktion im Frühjahr ‐>Behandlungsende
3. Ovulationsinduktion mit hCG oder Ovuplant bei/ kurz nach Behandlungsende
Indikationen:
• Frühzeitige Belegung von Behandlung Rosse Ovulation Trächtigkeit
Stuten im Frühjahr
Ovuplant
• Begrenzte Verfügbarkeit von (n=146) 95% 96% 54%
Hengsten in der Saison
• Starke Frequentierung hCG
(n=159) 86% 89% 61%
bestimmter Hengste in der
Hochsaison und Stute selbst Keine
nicht tragend (n=101) 81% 55% 44%
Newcombe et al. (2002)
Einfluss der Follikelgröße bei Behandlungsbeginn Ovulationsinduktion im Frühjahr
auf die Erfolgsrate der Behandlung anovulatorischer Stuten mit Gestagenen
Follikelgröße bei Anzahl der Stuten, die Stuten, die • Auch bei Stuten mit kleinen
Behandlungsbeg Stuten belegt wurden tragend wurden Follikeln kann die Behandlung
inn
zur Induktion einer Ovulation
30mm 36 59% 52% die Stuten meist im Zyklus
Newcombe et al. (2002)
9Herstellung von Tiefgefriersamen – Mareike von Lewinski
Herstellung und Nutzung von Begriffsbestimmungen
Tiefgefriersamen in der Pferdezucht
1. Frischsperma
Nativsperma: unverdünnt, KB unmittelbar
nach Gewinnung
flüssigkonserviertes Sperma („Frischsperma“)
‐ KB ≤ 12h nach Samengewinnung, RT/+5°C.
‐ KB nach Versand und 24‐36h nach
Samengewinnung,+5°C
2. Tiefgefriersperma (‐196° C)
Dr. Mareike von Lewinski
Graf‐Lehndorff‐Institut Neustadt (Dosse)
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
Bedeutung TG‐Samen Bedeutung TG‐Samen
Natursprung KB. Frischsamen KB, TG-Samen
Natursprung KB FS
50000 KB TG ET 80
70
belegte Stuten in %
40000
60
Anzahl Stuten
30000 50
40
20000
30
10000 20
10
0
0
Frankreich Deutschland
85
90
95
00
04
05
06
07
08
09
10
11
19
19
19
20
20
20
20
20
20
20
20
20
Jahr
Belegung von Stuten der Reitpferderassen durch Natursprung
und Besamung in Deutschland und Frankreich 2004
Besamung und Natursprung in der deutschen Reitpferdezucht (FN‐Jahresberichte, Haras nationaux ‐ Chiffres d`elevage)
(FN‐Jahresberichte)
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
TG‐Samen‐Herstellung
Vorbereitung TG‐Samen
Rassenverteilung
Pony Isländer PRE
7% 1% Vollblut TG‐Eignung des Hengstes?
2%
Lippizaner Araber
5% 12% Andrologische Untersuchung
30tägige Quarantäne und Untersuchung des Hengstes
AQUH Warmblut
gemäß RL 92/65 EWG (CEM, EIA, EAV)
29% 34% 30 Tage vor und während der Samengewinnung kein
Natursprung
Traber
10% Versand
‐ national
‐ EU
‐ Drittländer (z.T. weitere Voruntersuchungen)
Rassenverteilung TG‐Samenherstellung an der
Besamungsstation der Vetmeduni Wien 2002‐2012
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
1Herstellung von Tiefgefriersamen – Mareike von Lewinski
TG‐Eignung von Hengsten
TG‐Eignung von Hengsten
Alterseffekte
VMot > 35% VMot < 35%
25% VMot < 35%
19% 32%
VMot > 35% 81% 68%
75%
Hengste bis 10 Jahre Hengste über 10 Jahre
Qualität von TG‐Samenportionen (n=964), Hengste verschiedener Qualität von TG‐Samenportionen (n=964), Hengste verschiedener
Rassen, Besamungsstation Vetmeduni Wien 2002‐2012 Rassen, Besamungsstation Vetmeduni Wien 2002‐2012
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
TG‐Eignung von Hengsten TG‐Samen‐Herstellung
Rasseeffekte Jahreszeit
Lippizaner 200
180
Warmblut 160
140
AQUH 120
100
Araber und Vollblut 80
60
sonstige
40
20
Traber
0
Isländer
0% 20% 40% 60% 80% 100%
Verteilung TG‐Samenproduktion im Jahresverlauf, Besamungsstation
VMot < 35% VMot > 35% Vetmeduni Wien 2002‐2012
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
TG‐Samen‐Herstellung TG‐Samen‐Herstellung
Jahreszeit Jahreszeit
140 Vmot > 35%
Vmot < 35%
120
100
80
60
40
20
0
TG‐Samenqualität im Jahresverlauf TG‐Samenqualität in den Wintermonaten
Besamungsstation Vetmeduni Wien 2002‐2012 Besamungsstation Vetmeduni Wien 2002‐2012
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
2Herstellung von Tiefgefriersamen – Mareike von Lewinski
Samenentnahme Samenentnahme
Samenbeurteilung und ‐verdünnung
• Samenentnahme 3 mal pro Woche
Zentrifugation: Konzentration der Spermien • Abschöpfung überalterter Samenzellen nach längerer
Deckruhe: optimale Samenqualität nach
Resuspension mit Einfrierverdünner 7 bis 14 Tagen regelmäßiger Samenentnahme
Endverdünnung: Glycerin ca. 2,5%
Konfektionierung
(0,5ml Pailletten)
Kühlung/Gefrierung
Lagerung (‐196 °C)
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
Samenbeurteilung Samenverdünner
Samenbeurteilung für die 1. Zentrifugations‐ bzw. Vorverdünner:
Tiefgefriersamenkonservierung • Verdünnungsverhältnis: 1 + 1; (50Mill. SZ/ml)
• Seminalplasmaretention (ca. 5%)
Ejakulate mit einer 2. Tiefgefrierverdünner:
Samendichte > 200 Mio. Sz/ml • Merck‐Laktose‐Verdünner
Vorwärtsmotilität > 50% modifizierter Frischsamenverdünner
• Osmolarität
Anteil formnormaler
• Kryoprotektiva
Samenzellen > 70%
• Glycerol (optimal 2,5% in der Endverdünnung)
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
Resuspension / Kryoprotektiva Konfektionierung
Konfektionierung in 0.5 ml Pailletten
• Verwendung von Tiefgefriersamenverdünner mit
„Gefrierschutzmittel“ • gute Samenqualität
• penetrierende (Glycerol, Zuckeralkohole,DMSO) und • homogenes Einfrieren (kleines Volumen, große
nicht penetrierende (Zucker, Aminosäuren, versch. Proteine) Oberfläche)
Kryoprotektiva
• geringes Lagervolumen
• Glycerolzusatz nicht mehr als 2,5% in der
Endverdünnung • begrenzte Handlichkeit
1.Glycerol (insbesondere, wenn viele
Glycerol
3.H2O
+ H2O mehrere Pailletten pro
IZR
IZR KB‐Portion)
EZR 2.Osm ↑ EZR EZR
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
3Herstellung von Tiefgefriersamen – Mareike von Lewinski
Kennzeichnung Kühlung / Gefrierung
Tierzuchtgesetz: unmittelbar, unverwechselbar, dauerhaft Abkühlung des Samens
Richtlinie 92/65 EWG
Identität des Hengstes (Name, Lebensnummer) – Temperaturbereiche:
1. 37°C ‐ ~20°C Pferdespermien relativ unempfindlich
herstellende Station (Name, EU‐Nummer)
2. 18°C ‐ ~8°C temperatursensitiver Bereich
Datum der Samenherstellung (Chargendatum) reversible Verlangsamung aller Stoffwechselfunktionen
– Kühlraten:
• 0,05 bis 0,1°C/min (ideal)
• 0,2°C/min (Kühlschrank direkt)
• 0,07°C/min (Wasserbad mit 20 °C im Kühlschrank)
• 0,04°C/min (Equitainer®)
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
Computergesteuerter
Kühlung / Gefrierung
Einfrierprozess
• Schritt 1: 20°C bis 5°C, 50 min
(temperatursensitiver Bereich)
• Schritt 2: 5°C bis ‐25°C, 3 min
• Schritt 3: ‐25°C bis ‐140°C, 4,6 min
Gesamtzeit 57,6 min
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
Lagerung Kalkulation KB Portion
• obligatorische 30tägige Lagerung vor Verwendung Mind. 300 Mio. gesamtbewegliche Samenzellen pro Portion
oder Versand z.B. Quaterback 16.02.2013: 30 Pailletten TG‐Samen
• Auftaukontrolle
• in dieser Zeit Nachuntersuchung am Hengst
Dichte 400 Mio. SZ/ml
frühestens 14 Tage und spätestens 90 Tage nach Motilität: 55 % (V), 25%(O), 30% (U) = 80% motile SZ
Produktionsdatum (RL 92/65 EWG Anhang D)
Wieviele Pailletten/KB? Wieviele Portionen insgesamt?
• 400:2= 200 Mio Sz/Paillette x 0,8 (80% Mot)
• 160 Mio. gesamtbewegliche SZ /Paillette
• 300 : 160= 1,86 = 2 Pailletten /KB
• 15 Portionen insgesamt
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
4Herstellung von Tiefgefriersamen – Mareike von Lewinski
Versand
nach Ablauf der 30tägigen Lagerfrist und Eingang der
Testergebnisse der Nachuntersuchung mit Negativbefund
Versand der gewünschten Portionen
begleitet von
Attest (zzgl. Importerlaubnis und
Ausfuhrbescheinigung)
Samenschein
Samenverwendungsnachweis
Tierärztetagung 16.02.2013
Besamung Auftauen von TG‐Samen
Auftauen der Besamungsportion unmittelbar vor
der Verwendung im Wasserbad
Normalpailletten (o.5 ml) 37°C 15‐30 sec.
Sameneinführung
Manuell oder instrumentell
Gebärmutterkörper
(tief intracornual)
(auf Eileiterpapille)
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
5Herstellung von Tiefgefriersamen – Mareike von Lewinski
TG Samenproduktion als TG Samenproduktion als
Dienstleistung Dienstleistung in Neustadt (Dosse)
• Das Brandenburgische Haupt‐ und Landgestüt und das
Graf Lehndorff Institut Neustadt (Dosse) bieten
gemeinsam die Herstellung von Tiefgefriersamen bei
Hengsten als Dienstleistung an
• Zu diesem Zweck können Hengste aller Rassen
vorübergehend in die EU‐Besamungsstation Neustadt
(Dosse) aufgenommen werden
• Routinemäßig kann der hergestellte Tiefgefriersamen in
alle EU‐Länder versandt werden.
• Export in Drittländer entsprechend deren spezifischen
Anforderungen
Tierärztetagung 16.02.2013 Tierärztetagung 16.02.2013
Vielen Dank für Ihre
Aufmerksamkeit
Tierärztetagung 16.02.2013
6Sie können auch lesen
