PLATELIA SARS-COV-2 TOTAL AB 96 480 - BIO-RAD LABORATORIES
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Platelia SARS-CoV-2 Total Ab
1 Platte – 96 72710
5 Platten - 480 12013798
Der Platelia SARS-CoV-2 Total Ab Assay ist ein semiquantitativer, einstufiger Immunoassay für die In-vitro-
Diagnostik zum Nachweis von IgM/IgA/IgG-Antikörpern gegen das SARS-CoV-2 in Humanserum- und -
plasmaproben (EDTA, Heparin, ACD oder Citrat).
16008267 – 2020/05
Inhalt
1 VERWENDUNGSZWECK ........................................................................................... 3
2 KLINISCHE BEDEUTUNG DES TESTS ..................................................................... 3
3 TESTPRINZIP ............................................................................................................. 4
4 REAGENZIEN ............................................................................................................. 4
5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN .............................................. 5
6 PROBEN ...................................................................................................................... 7
7 TESTDURCHFÜHRUNG ............................................................................................. 8
8 GRENZEN DES TESTS ............................................................................................ 10
9 LEISTUNGSMERKMALE ......................................................................................... 10
10 LITERATUR .............................................................................................................. 13
2 [DE]
1 VERWENDUNGSZWECK
Der Platelia SARS-CoV-2 Total Ab Assay ist ein semiquantitativer, einstufiger Immunoassay für die In-vitro-
Diagnostik zum Nachweis von IgM/IgA/IgG-Antikörpern gegen das SARS-CoV-2 in Humanserum- und -
plasmaproben (EDTA, Heparin, ACD oder Citrat).
Dieser Test ist ein Hilfsmittel bei der Diagnose von Patienten mit Symptomen, die auf eine SARS-CoV-2-
Infektion hindeuten. Der Platelia SARS-CoV-2 Total Ab kann in Verbindung mit dem klinischen
Erscheinungsbild und anderen Diagnoseverfahren (RT-PCR, CT-Scan, spezifische Detektion von
IgM/IgA/IgG-Antikörpern gegen SARS-CoV-2) zur Diagnose von COVID-19 beitragen.
Dieser Assay kann auch als Screening-Hilfe verwendet werden, um das Vorhandensein von Antikörpern gegen
SARS-CoV-2 nachzuweisen und um den Immunstatus von Personen hinsichtlich der Exposition gegenüber
SARS-CoV-2 zu bestimmen.
Der Platelia SARS-CoV-2 Total Ab kann manuell oder in automatisierten Systemen eingesetzt werden.
2 KLINISCHE BEDEUTUNG DES TESTS
Das Coronavirus (CoV) ist ein behülltes Virus, das eine einsträngige RNA mit positiver Polarität enthält.
SARS-CoV-2, früher bekannt als 2019-nCoV, ist ein neu auftretendes Coronavirus, das hauptsächlich die
Atemwege befällt und zu einem schweren akuten respiratorischen Syndrom (SARS) führen kann. Die von
diesem Virus verursachte Erkrankung heißt COVID-19. Coronaviren waren in den letzten zwei Jahrzehnten
für mehrere Ausbrüche in der Welt verantwortlich. 2003 und 2014 verursachten Coronaviren Ausbrüche
hauptsächlich in Asien (SARS-CoV) sowie im Nahen Osten (MERS-CoV). Vor dem Aufkommen von SARS-
CoV-2 waren sechs humane Coronaviren bekannt (SARS-CoV, MERS-CoV und vier andere Coronaviren, die
leichte Infekte der oberen und unteren Atemwege verursachen).
SARS-CoV-2 wurde erstmals im Dezember 2019 in der Stadt Wuhan in der chinesischen Provinz Hubei
identifiziert, nachdem mehrere Patienten eine schwere Lungenentzündung entwickelt hatten, deren
Symptome den von SARS-CoV verursachten ähnelten. Seitdem hat sich das Virus schnell über die ganze
Welt verbreitet, und im März 2020 bezeichnete die WHO COVID-19 offiziell als Pandemie. Die Übertragung
des Virus von Mensch zu Mensch führte zu einer raschen Ausbreitung, und angesichts der hohen Zahl von
Patienten, die Intensivpflege benötigen, sahen sich die Behörden auf der ganzen Welt gezwungen,
Eindämmungsmaßnahmen zu ergreifen. Die Inkubationszeit liegt zwischen 2 und 14 Tagen.
Das Virus wurde in Atemwegssekreten nachgewiesen, die als primärer Übertragungsweg gelten. Sobald
Viruspartikel in den Atemtrakt gelangen, dockt das Virus über die ACE-2-Rezeptoren an die Lungenzellen an
und gelangt dann mittels Endozytose ins Zellinnere. SARS-CoV-2 kann auch durch Fäkalien übertragen
werden.
Bei Patienten, die positiv für SARS-CoV-2 getestet werden und Symptome aufweisen, wird COVID-19
diagnostiziert. Die Symptome können sehr unterschiedlich sein und umfassen insbesondere Fieber,
trockenen Husten, Anosmie, Sputumproduktion, Kopfschmerzen, Dyspnoe, Müdigkeit, Übelkeit und Durchfall.
Während einige Fälle asymptomatisch sind, können andere zum akuten Atemnotsyndrom (ARDS) und sogar
zum Tod führen.
Die Diagnose stützt sich hauptsächlich auf Tests mittels Echtzeit-RT-PCR (Reverse-Transkriptase-
Polymerase-Kettenreaktion) an Atemwegsproben. Die RT-PCR kann jedoch aufgrund niedriger Viruslast oder
einer ungeeigneten Entnahme, Handhabung und Lagerung der Abstriche (oropharyngeal oder
nasopharyngeal) oder eines Fehlers während des Reaktionsprozesses zu falsch negativen Ergebnissen
führen. Bildgebende Verfahren wie die Computertomographie (CT) können ebenfalls durchgeführt werden
und zeigen zur Unterstützung der Diagnose bilaterale, multilobäre Milchglastrübungen.
Mit Platelia SARS-CoV-2 Total Ab können die Antikörper IgM, IgA, und IgG gegen SARS-CoV-2 nachgewiesen
werden. Er kann in Verbindung mit anderen diagnostischen Tests verwendet werden, um festzustellen, ob ein
Patient mit SARS-CoV-2 in Kontakt gekommen ist.
3 [DE]
3 TESTPRINZIP
Platelia SARS-CoV-2 Total Ab ist ein einstufiger Immunoassay zum semiquantitativen Nachweis der
Gesamtzahl der gegen das SARS-CoV-2-Nukleokapsid gerichteten Antikörper (IgM/IgA/IgG) in Humanserum-
oder -plasmaproben.
▪ Der Assay verwendet ein rekombinantes SARS-Nukleokapsid-Protein in einem einstufigen
Immunoassay.
▪ Die Serum- oder Plasmaproben und Kontrollen werden vorverdünnt. Jeder Probe wird Konjugat
(rekombinantes SARS-Nukleokapsid-Protein, gekoppelt mit Peroxidase) zugegeben. Anschließend wird
die Mischung eine Stunde bei 37 °C in den mit dem rekombinanten SARS-Nukleokapsid-Protein
beschichteten Vertiefungen inkubiert. Bei Vorhandensein von IgM- und/oder IgG- und/oder IgA-
Antikörpern in der Probe bildet sich während der Inkubation ein Komplex aus rekombinantem SARS-
Nukleokapsid-Protein auf den Vertiefungen und mit Peroxydase gekoppeltem rekombinantem SARS-
Nukleokapsid-Protein.
▪ Nach einem Waschschritt wird das Vorhandensein von Immunkomplexen (SARS-Nukleokapsid-Protein /
anti-SARS-Nukleokapsid-Antikörper / SARS-Nukleokapsid-Protein, markiert mit POD) durch Zugabe
einer chromogenen Lösung nachgewiesen, die einen Farbumschlag bewirkt.
▪ Nach einer Inkubationszeit von 30 Minuten bei Raumtemperatur wird die Enzymreaktion durch Zugabe
einer Säurelösung gestoppt. Die mit einem Spektrophotometer (450/620 nm) gemessene optische Dichte
ist proportional zur Menge der in der Probe enthaltenen Antikörper. Das Vorhandensein von Antikörpern
gegen das SARS-CoV-2-Nukleokapsid in einer einzelnen Probe wird durch Vergleich ihrer optischen
Dichte mit der optischen Dichte des Cut-off-Kontrollserums bestimmt.
4 REAGENZIEN
4.1 Beschreibung
Bezeichnung auf dem Aufmachung/
Beschreibung
Etikett Zubereitung
Mikrotiterplatte
- 96 Vertiefungen (12 Teststreifen mit je 8
1 Platte 5 Platten
R1 Microplate Vertiefungen), beschichtet mit rekombinantem
Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
Nukleokapsid-Protein von SARS.
- Spezifische Kennnummer = 19
Concentrated Konzentrierte Waschlösung (20x) 1 Flasche 1 Flasche
R2 washing - TRIS-NaCl-Puffer (pH 7,4) 70 mL 235 mL
solution(20X) - Konservierungsmittel: 0.04% ProClin 300 Zum Verdünnen Zum Verdünnen
Negativkontrolle
1 Flasche 1 Flasche
Negative - TRIS-NaCl-Puffer (pH 8 ± 0,1),
R3 1.0 mL 1.0 mL
Control Rinderserumalbumin, Glycerol
Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
- Konservierungsmittel 0.1% ProClin 300
Cut-off-Kontrolle
- TRIS-NaCl-Puffer (pH 8 ± 0,1),
Rinderserumalbumin, Glycerol 1 Flasche 1 Flasche
R4 Cut-off Control 1.0 mL 1.0 mL
- Polyklonale Kaninchenantikörper gegen das
Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
SARS- Nukleokapsid
- Konservierungsmittel 0.1% ProClin 300
Positivkontrolle
- TRIS-NaCl-Puffer (pH 8 ± 0,1),
1 Flasche 1 Flasche
Positive Rinderserumalbumin, Glycerol
R5 1.0 mL 1.0 mL
Control - Polyklonale Kaninchenantikörper gegen das
Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
SARS- Nukleokapsid
- Konservierungsmittel 0,1% ProClin 300
4 [DE]
Konjugat
- Rekombinantes Nukleokapsid-Protein gekoppelt 1 Flasche 2 Fläschen
R6 Conjugate mit Meerrettichperoxidase 9 mL 23 mL
- TRIS-NaCl-Puffer (pH 8 ± 0,1), Phenolrot Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
- Konservierungsmittel 0,5% ProClin 300
Probenverdünnungsmittel 1 Flasche 2 Fläschen
R7 Sample Diluent - TRIS-NaCl-Puffer (pH 8 ± 0,1), Phenolrot 12 mL 23 mL
- Konservierungsmittel 0,5% ProClin 300 Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
Substratpuffer 1 Flasche 2 Fläschen
Substrate
R8 Citronensäure und Natriumacetatlösung pH 4,0 mit 60 mL 60 mL
buffer
H2O2 (0,015 %) und Dimethylsulfoxid (DMSO) (4 %) Zum Rekonstituieren Zum Rekonstituieren
Chromogen: 1 Flasche 2 Fläschen
Chromogen: TMB-Lösung
R9 TMB solution 5 mL 5 mL
Lösung mit 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidin (TMB)
(11X) Zum Rekonstituieren Zum Rekonstituieren
1 Flasche 3 Fläschen
Stopping Stopplösung
R10 28 mL 28 mL
solution Schwefelsäure-Lösung (H2SO4 1N)
Gebrauchsfertig Gebrauchsfertig
4.2 Hinweise zur Lagerung und Handhabung
Dieses Kit muss bei +2-8 °C aufbewahrt werden. Geöffnete Reagenzien sind gemäß nachstehenden
Anweisungen zu lagern.
Bezeichnung Lagerung
Nach dem Öffnen der vakuumversiegelten Verpackung sind die Teststreifen mit
R1 den Mikrovertiefungen bis zu 4 Wochen haltbar, wenn sie bei +2-8 °C im mit
Klebeband verschlossenen Originalbeutel mit Trockenmittel aufbewahrt werden.
Die verdünnte Waschlösung kann 2 Wochen bei +2-30 °C gelagert werden. Die
konzentrierte Waschlösung (R2) kann bis zum Verfalldatum bei +2-30 °C
R2
gelagert werden. Nach dem Öffnen ist die bei +2-8 °C gelagerte konzentrierte
Waschlösung (R2) ohne Kontamination bis zum Verfallsdatum haltbar.
R3, R4, R5, R6, R7, R8, Nach dem Öffnen sind diese bei +2-8 °C gelagerten Reagenzien (ohne
R9 Kontamination) 4 Wochen stabil.
Nach dem Verdünnen bleibt die Lösung bis zu 6 Stunden stabil, wenn sie im
R8 + R9
Dunkeln bei +18-30 °C aufbewahrt wird.
Nach dem Öffnen ist dieses bei +2-8 °C gelagerte Reagenz (ohne
R10
Kontamination) bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum stabil.
5. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN
In-vitro-Diagnostikum, das nur von Fachpersonal in einer Laborumgebung angewendet werden darf.
5.1 Hygiene- und Sicherheitsvorkehrungen
Dieses Testkit darf nur von qualifiziertem Fachpersonal gehandhabt werden, das in Laborverfahren geschult
und mit deren potenziellen Gefahren vertraut ist. Geeignete Schutzkleidung, Handschuhe und Augen-
/Gesichtsschutz tragen und bei der Handhabung die erforderliche Gute Laborpraxis einhalten.
Keine bekannte Testmethode kann die vollständige Sicherheit bieten, dass keine infektiösen Erreger
vorhanden sind. Daher sollten alle Humanblutderivate, Reagenzien und Humanproben als infektiös behandelt
werden, wobei die empfohlenen allgemeinen Vorsichtsmaßnahmen zum Schutz vor blutübertragenen
Krankheitserregern gemäß den lokalen, regionalen und nationalen Vorschriften zu beachten sind.
5 [DE]Verschüttete biologische Substanzen: Verschüttetes Material menschlichen Ursprungs ist als potenziell
infektiös zu behandeln.
Wurden nicht-säurehaltige Substanzen verschüttet, müssen der Arbeitsbereich, die Materialien sowie alle
verunreinigten Oberflächen oder Geräte sofort mit einem geeigneten chemischen Desinfektionsmittel, das
gegen die potenziellen biologischen Risiken der betroffenen Proben wirksam ist, gereinigt und trockengewischt
werden. Folgende Desinfektionsmittel können verwendet werden: Lösung aus 10%iger Haushaltsbleiche, 70-
80 % Ethanol oder Isopropanol, ein Jodophor wie 0,5 % Wescodyne™ Plus usw.).
Säurehaltige verschüttete Flüssigkeiten sind in geeigneter Weise aufzusaugen (aufzuwischen) oder zu
neutralisieren, und der Arbeitsbereich muss mit Wasser abgespült und trockengewischt werden. Material, das
zum Aufnehmen von verschütteten Substanzen verwendet wird, muss ggf. als biologischer Sonderabfall
entsorgt werden. Anschließend muss der Arbeitsbereich mit einem chemischen Desinfektionsmittel gereinigt
werden.
HINWEIS: Bleichmittelhaltige Lösungen nicht autoklavieren!
Alle für den Test verwendeten Proben und Reagenzien sind so zu entsorgen, als ob sie infektiöses Material
enthielten. Laborabfälle sowie chemische oder biologisch gefährliche Substanzen müssen gemäß allen
lokalen, regionalen und nationalen Vorschriften gehandhabt und beseitigt werden.
Beachten Sie zu Gefahren und Vorsichtsmaßnahmen für einige chemische Komponenten dieses Testkits bitte
das/die Piktogramm(e) auf den Etiketten und die Informationen am Ende der Packungsbeilage. Das
Sicherheitsdatenblatt ist verfügbar unter www.bio-rad.com.
5.2. Vorsichtsmaßnahmen beim Gebrauch
5.2.1.Vorbereitung
● Kit NICHT VERWENDEN, wenn die Verpackung der Komponenten beschädigt ist.
● Reagenzien NICHT VERWENDEN, wenn das Verfallsdatum abgelaufen ist.
● NICHT VERWENDEN, wenn sich kein Trockenmittel im Mikrotiterplattenbeutel befindet.
● Vor Gebrauch 30 Minuten warten, um die Reagenzien auf Raumtemperatur (18-30 °C) zu bringen.
● Reagenzien sorgfältig rekonstituieren und dabei jegliche Kontamination vermeiden.
● Zur Vorbereitung der Reagenzien sollte vorzugsweise Einwegmaterial verwendet werden. Bei
Verwendung von Glasgefäßen sind diese gründlich zu waschen und mit entionisiertem Wasser
abzuspülen.
● Innerhalb eines Testansatzes dürfen keine Reagenzien aus verschiedenen Chargen gemischt oder
kombiniert werden.
● Die Mikrotiterplatte darf zwischen dem Ende des Waschgangs und der Zugabe der Reagenzien nicht
austrocknen.
● Der Name des Tests sowie eine spezifische Kennnummer für den Test sind auf dem Rahmen jeder
Mikrotiterplatte vermerkt. Diese spezifische Identifikationsnummer ist ebenfalls auf jedem Teststreifen
angegeben.
Platelia SARS-CoV-2 Total Ab: Spezifische Kennnummer = 19
Spezifische Kennnummer vor der Verwendung überprüfen. Wenn die Kennnummer fehlt oder sich von
der angegebenen Nummer für den zu testenden Assay unterscheidet, sollte der Teststreifen nicht
verwendet werden.
● Keine Reagenzien aus anderen Kits mit anderen Chargennummern verwenden, mit Ausnahme der
Waschlösung (R2, Etiketten-Kennung*: 20x grün), des Peroxidasesubstratpuffers (R8, Etiketten-
Kennung*: TMB-Puf., blau), des Chromogens (R9, Etiketten-Kennung*: TMB 11X violett) und der
Stopplösung (R10, Etiketten-Kennung*:1N rot), sofern diese Reagenzien identisch sind und immer die
gleiche Chargennummer für einen Teststreifen verwendet wird.
HINWEIS: Die Waschlösung (R2, gekennzeichnet* in grün als 20X) darf nicht mit der Waschlösung
(R2 gekennzeichnet* in blau als 10X) aus den Reagenzien-Kits von Bio-Rad gemischt werden.
* auf dem Etikett des Flasches
● Zum Ansetzen der Reaktionslösung oder der Konjugatarbeitslösung ein sauberes Kunststoff- oder
Glasgefäß verwenden. Es werden Einmalbehälter aus Kunststoff empfohlen. Bei der Verwendung von
wiederverwendbaren Kunststoffbehältern können diese durch Einweichen über Nacht in destilliertem
6 [DE]Wasser oder Waschlösung gereinigt werden. Glaswaren können vorher mit 1N Salzsäure gewaschen und
mit destilliertem Wasser gespült und getrocknet werden.
● Die Reaktionslösung ist im Dunkeln aufzubewahren.
● Die Reaktionslösung (Substratpuffer + Konjugat) muss rosafarben sein. Eine Änderung dieser
Rosafärbung innerhalb weniger Minuten nach der Rekonstitution zeigt an, dass das Reagenz nicht mehr
zu gebrauchen ist und ersetzt werden muss. Die Reaktionslösung kann in einem sauberen Einmalgefäß
oder einem Glasgefäß angesetzt werden, das zuvor mit 1N Salzsäure gereinigt und mit destilliertem
Wasser sorgfältig gespült und getrocknet wurde. Dieses Reagenz ist im Dunkeln aufzubewahren.
● Das Pipettieren der Proben muss unmittelbar nach dem Pipettieren des Konjugats beginnen. Die
Wartezeit zwischen dem Pipettieren des Konjugats und der Proben sollte 30 Minuten nicht überschreiten.
● Die Enzymreaktion reagiert sehr empfindlich auf Metallionen. Daher dürfen die verschiedenen Konjugat-
oder Substratlösungen nicht mit Metallen in Berührung kommen.
● Zum Pipettieren von Konjugat und Reaktionslösung niemals dasselbe Gefäß verwenden.
5.2.2. Testdurchführung
● Assayprotokoll nicht ändern.
● Jeder Lauf dieses Assays muss nach dem Start ohne Unterbrechung zu Ende geführt werden. Eine
Verzögerung von weniger als 5 Minuten zwischen zwei Schritten ist akzeptabel.
● Pipetten und andere Geräte auf Genauigkeit und korrekte Funktion prüfen.
● Den Test nicht in Gegenwart reaktiver Dämpfe (von Säuren, Basen, Aldehyden) oder Staub
durchführen, weil die Enzymaktivität des Konjugats dadurch beeinträchtigt werden könnte.
● Für jede Probe eine neue Pipettenspitze verwenden.
● Das Waschen der Mikrotiterplatten ist ein entscheidender Schritt bei der Testdurchführung: Deshalb ist
die empfohlene Anzahl an Waschschritten genau einzuhalten. Darauf achten, dass alle Vertiefungen
vollständig befüllt und anschließend wieder vollständig geleert werden. Falsches Waschen kann zu
ungenauen Ergebnissen führen.
● Die beschriebenen Waschverfahren müssen genau eingehalten werden, um korrekte Testergebnisse
zu erhalten. Bei einigen Geräten kann es notwendig sein, das Waschverfahren zu optimieren (Erhöhung
der Anzahl der Waschzyklen und/oder des Waschpuffervolumens für jeden Zyklus), um ein akzeptables
Niveau des OD-Hintergrunds für die negativen Proben zu erhalten.
● Erkundigen Sie sich bei Ihrem Händler vor Ort nach den Anpassungen und speziellen Verfahren.
6 PROBEN
1. Der Test wird an Serum- oder Plasmaproben (mit verschiedenen Antikoagulanzien EDTA, ACD, Heparin
oder Citrat entnommen) durchgeführt.
2. Die folgenden Anweisungen zur Handhabung, Verarbeitung und Lagerung von Blutproben sind zu
beachten:
● Blutprobe nach den üblichen Laborverfahren entnehmen. Serumproben vor dem Zentrifugieren
vollständig gerinnen lassen.
● Röhrchen stets verschlossen halten.
● Nach dem Zentrifugieren Serum oder Plasma extrahieren und in einem dicht verschlossenen
Röhrchen aufbewahren.
● Die Proben können bei +2-8°C aufbewahrt werden, wenn der Test innerhalb von 4 Tagen
durchgeführt wird.
● Wenn der Test nicht innerhalb von 4 Tagen durchgeführt werden kann, Proben bei -20 °C (oder -
80 °C) einfrieren.
● Serum- oder Plasmaproben dürfen höchstens 1 Einfrier-/Auftauzyklus unterworfen werden.
Aufgetaute Proben, die zuvor eingefroren waren, vor dem Test gründlich durchmischen.
3. Proteinreiche Proben mit 90 g/l Albumin, ikterische Proben mit 100 mg/l Bilirubin, lipämische Proben mit
dem Äquivalent zu 36 g/l Triolein (Triglycerid) und hämolysierte Proben mit bis zu 10 g/l Hämoglobin
haben keinen Einfluss auf die Testergebnisse.
4. Proben nicht erhitzen.
7 [DE]7 TESTDURCHFÜHRUNG
7.1 Benötigtes, nicht mitgeliefertes Material
1. Steriles destilliertes oder entmineralisiertes Wasser zum Verdünnen der Waschlösung.
2. Natriumhypochlorit (Bleichlauge) und Natriumbicarbonat.
3. Saugfähiges Papier.
4. Klebefolie
5. Schutzbrille
6. Einmal-Röhrchen
7. Automatische oder halbautomatische, einstellbare oder voreingestellte Pipetten oder Multipipetten zum
Abmessen und Verteilen von 10 µl bis 1000 µl, 1 mL, 2 mL und 10 mL.
8. Messzylinder der Größe 25 mL, 50 mL, 100 mL und 1000 mL. Vortex-Mischer.
9. Manuelles Mikrotiterplatten-Waschsystem, Wasserbad oder gleichwertiger Mikrotiterplatten-Inkubator,
thermostatisch geregelt auf 37 °C ± 1 °C (*).
10. Mikrotiterplatten-Reader oder vollautomatisches System mit 450- und 620-nm-Filtern (*).
11. Behälter für infektiöse Abfälle
(*) Genaue Auskunft zu den empfohlenen Geräten erhalten Sie von unserer technischen Abteilung.
7.2 Ansetzen der Reagenzien
7.2.1 Gebrauchsfertige Reagenzien
Reagenz 1 (R1) Mikrotiterplatte
Jeder Halterahmen mit 12 Teststreifen ist einzeln in einem Folienbeutel eingeschweißt. Beutel mit der Schere
0,5 bis 1 cm oberhalb der Schweißnaht aufschneiden. Beutel öffnen und Rahmen herausnehmen. Nicht
verwendete Teststreifen zusammen mit dem Trockenmittel in den Beutel zurücklegen. Beutel sorgfältig
verschließen und wieder bei +2-8 °C lagern.
Reagenz 3 (R3) Negativkontrolle, Reagenz 4 (R4): Cut-off-Kontrolle, Reagenz 5 (R5): Positivkontrolle,
Reagenz 6 (R6): Konjugat, Reagenz 7 (R7): Probenverdünnungsmittel
Diese Reagenzien sind gebrauchsfertig.
7.2.2 Reagenzien zum Rekonstituieren
Reagenz 2 (R2): Konzentrierte Waschlösung (20x)
Vorbereiten der Waschlösung durch Verdünnen der 20-fach konzentrierten Waschlösung mit destilliertem
Wasser: 50 mL R2 in 950 mL destilliertem Wasser. Für eine ganze Platte mit 12 Teststreifen werden 800 mL
gebrauchsfertige Waschlösung benötigt. Das Totvolumen der verwendeten Geräte ist hierbei nicht
berücksichtigt
Reagenz 8 (R8) + Reagenz 9 (R9): Enzymreaktionslösung
Chromogen (R9) 1:11 im Substratpuffer (R8) verdünnen (z. B. 2 mL Reagenz R9 + 20 mL Reagenz R8), wobei
20 mL für 12 Teststreifen notwendig und ausreichend sind. Homogenisieren.
7.3 Testverfahren
Halten Sie sich genau an das vorgeschriebene Protokoll und beachten Sie die GLP-Richtlinien.
EIA-Verfahren
1. Reagenzien vor Gebrauch mindestens 30 Minuten auf Raumtemperatur (+18-25 °C) bringen.
2. Zur Validierung der Testergebnisse sollten die Positiv- und Negativkontrollen in jedem Testansatz
mitgeführt werden.
3. Probenverteilungs- und -identifikationsplan für die Kontrollen und Patientenproben erstellen.
8 [DE]4. Verdünnte, gebrauchsfertige Waschlösung (R2) herstellen (Siehe Abschnitt 7.2)
5. In einer inerten Vorverdünnungsmikrotiterplatte Kontrollen R3, R4, R5 und Testproben E1, E2 in R7 1:5
verdünnen:
● In jede Vertiefung 60 µl R7 pipettieren und dann 15 µl Probe hinzufügen.
● 75 µl Konjugatlösung (R6) in alle Vertiefungen der Vorverdünnungsmikrotiterplatte geben.
● Durch einmaliges Ansaugen und Ausstoßen mischen, dann sofort 100 µl der vorverdünnten
Kontrollen und Proben in die Vertiefungen der Reaktionsmikrotiterplatte überführen (R1).
6. Mikrotiterplatte mit Klebefolie abdecken; dabei fest auf die Platte drücken, um diese luftdicht zu
verschließen. Mikrotiterplatte in einem per Thermostat kontrollierten Wasserbad oder einem
Mikrotiterplatten-Inkubator 60 Minuten (+/- 5 min) bei 37 ° C (+/- 2 ° C) inkubieren.
7. Enzymreaktionslösung (R8+R9) herstellen (Siehe Abschnitt 7.2)
8. Am Ende der Inkubationszeit Klebefolie entfernen. Den Inhalt aller Vertiefungen in einen Behälter für
infektiöse Abfälle (mit Natriumhypochlorit) absaugen. Platte fünfmal in einem Waschsystem für
Mikrotiterplatten (mit 800 μl der verdünnten Waschlösung) waschen. Mikrotiterplatte umdrehen und
auf saugfähigem Papier leicht ausklopfen, um die restliche Flüssigkeit zu entfernen.
9. Schnell in jede Vertiefung 200 µl der Reaktionslösung (R8+R9) geben. 30 Minuten (+/- 4 min) im
Dunkeln bei Raumtemperatur (+18-30 °C) inkubieren. Während dieses Inkubationsschritts keine
Klebefolie verwenden.
10. 100 µl Stopplösung (R10) in der gleichen Reihenfolge und im gleichen Zeitrahmen wie bei der Zugabe
der Reaktionslösung in jede Vertiefung geben. Gut mischen.
11. Unterseite der Platte vorsichtig abwischen.
12. Innerhalb von 30 Minuten nach Zugabe der Stopplösung die optische Dichte jeder Vertiefung bei
450nm (Referenzfilter bei 620 nm) messen (die Teststreifen müssen bis zum Ablesen lichtgeschützt
aufbewahrt werden).
13. Vor der Weitergabe der Ergebnisse sollte die Übereinstimmung zwischen den abgelesenen Werten und
dem Verteilungsschema überprüft werden.
7.4 Qualitätskontrolle
Die Kontrollen bei jedem Test auf jeder Mikrotiterplatte mitführen.
7.5 Testvalidierungskriterien
Der Cut-off-Wert ODMR4 entspricht dem Mittelwert der optischen Dichten der Cut-off-Kontrolle R4.
Wenn einer der Einzelwerte der Cut-Off-Kontrolle R4 um mehr als 30 % vom Mittelwert abweicht, wird
der Wert ignoriert und die Berechnung mit den zwei übrigen Positivkontrollwerten erneut durchgeführt.
Validierungskriterien
R4 Die ODMR4 muss zwischen folgenden Werten
liegen: 0,5 < ODMR4 < 1,4
R3 / R4 Das Verhältnis (OD R3 / ODMR4) muss ≤ 0,25 sein
9 [DE]R5 / R4 Das Verhältnis (OD R5 / ODMR4) muss ≥ 1,1 sein
7.6 Berechnung / Interpretation der Ergebnisse
Der Cut-off-Wert ODMR4 entspricht dem Mittelwert der optischen Dichten der Cut-off-Kontrolle R4.
Die Probenergebnisse werden als Quotient entsprechend folgender Formel ausgedrückt: Probenindex =
OD der Probe / ODMR4.
Interpretation der Ergebnisse
● Ein Probenindex < 0,8 wird als «negativ» für das Vorliegen von Antikörpern gegen SARS-CoV-2
betrachtet.
● Ein Probenindex zwischen 0,8 und 1,0 wird als «grenzwertig» für das Vorliegen von Antikörpern
gegen SARS-CoV-2 betrachtet. Einige Tage später sollte eine weitere Probe entnommen und
getestet werden.
● Ein Probenindex ≥ 1,0 wird als «positiv» für das Vorliegen von Antikörpern gegen SARS-CoV-2
betrachtet.
Probenindex Ergebnis
R < 0,8 Negativ
0,8 < R < 1,0 Grenzwertig
R ≥ 1,0 Positiv
8 GRENZEN DES TESTS
1. Die klinische Diagnose von COVID-19 sollte nicht auf der Grundlage eines einzigen Testergebnisses
gestellt werden. Es sollten Folgetests und zusätzliche Tests sowie weitere klinische Befunde und
Laborergebnisse berücksichtigt werden.
2. Der Nachweis von Antikörpern gegen SARS-CoV-2 in Serum- oder Plasmaproben hängt davon ab, wie
häufig bei den Patienten getestet wird. Um die Sensitivität des Tests und die frühzeitige Erkennung zu
verbessern, sollte Patienten, bei denen der Verdacht auf eine SARS-CoV-2-Infektion besteht, regelmäßig
überwacht werden.
3. Der Nachweis von Antikörpern gegen SARS-CoV-2 hängt von der Anwesenheit des Analyten in der Probe
ab. Ein negatives oder nicht-reaktives Ergebnis kann auftreten, wenn die Menge an Antikörpern gegen das
SARS-CoV-2-Virus in der Probe unterhalb der Nachweisgrenze des Assays liegt. Während der akuten
Infektionsphase und/oder bei immunsupprimierten Patienten sind möglicherweise keine Antikörper gegen
SARS-CoV-2 nachweisbar, solange die Person mit SARS-CoV-2 infiziert ist. Daher ist ein Negativergebnis
kein Beweis für die Abwesenheit einer COVID-19-Infektion.
4. Die Leistungsmerkmale von Platelia SARS-CoV-2 Total Ab wurden nicht mit neonatalen oder pädiatrischen
Serum- oder Plasmaproben evaluiert.
5. Mit dem Platelia SARS-CoV-2 Total Ab Assay kann die Gesamtzahl der Antikörper gegen SARS-CoV-1
und SARS-CoV-2 nachgewiesen werden, ohne weiter zu differenzieren.
9 LEISTUNGSMERKMALE
Die nachstehend beschriebenen Leistungen wurden bei Evaluierungen des Platelia SARS-CoV-2 Total Ab
Assays untersucht. Die in einem Labor erzielten Ergebnisse können davon abweichen.
9.1 Analytische Leistungsmerkmale
Alle analytischen Studien wurden im F&E-Labor von Bio-Rad durchgeführt.
10 [DE]9.1.1 Genauigkeitsmessung
Reproduzierbarkeit
3 positive Proben und 1 negative Probe wurden 30 Mal im gleichen Lauf getestet. Der Variationskoeffizient
(VK) innerhalb des Laufs liegt bei der negativen Probe unter 10% und bei allen positiven Proben unter 5%.
Proben-Nr. N Mittlerer Index SD VK%
Negativ 30 0,05 0,004 7,1%
Niedrig positiv 30 1,15 0,038 3,3%
Mäßig positiv 30 1,54 0,055 3,6%
Stark positiv 30 2,36 0,095 4,0%
Intermediäre Genauigkeit
Die gleichen Proben wurden in 10 getrennten Läufen über 6 Tage getestet.
Es wurde eine hierarchische Varianzanalyse (nested ANOVA) durchgeführt, um die Genauigkeit innerhalb
einer Testreihe, zwischen Testreihen und zwischen Tagen sowie die Gesamtgenauigkeit zu bestimmen.
Der VK zwischen den Läufen liegt bei der negativen Probe unter 30% und bei allen positiven Proben unter
10%
Mittlerer Zwischen
Reproduzierbarkeit Zwischen Tagen Innerh. d. Labors
Index Läufen
Proben-Nr. N
SD VK% SD VK% SD VK% SD VK%
Negativ 20 0,05 0,005 10,9% 0,005 11,7% 0,009 20,0% 0,012 25,6%
Niedrig positiv 20 1,26 0,046 3,6% 0,026 2,0% 0,040 3,2% 0,066 5,3%
Mäßig positiv 20 1,77 0,053 3,0% 0* entfällt 0,122 6,9% 0,133 7,5%
Stark positiv 20 2,52 0,065 2,6% 0* entfällt 0,089 3,5% 0,110 4,4%
Anmerkung: (*) Der Varianzwert für negative Proben wird auf 0 geschätzt.
9.1.2 Analytische Spezifität / Kreuzreaktivität
Die Kreuzreaktivität wurde durch Testen von seronegativen SARS-CoV-2-Proben von Patienten mit
Antikörpern gegen andere Coronaviren oder Erkrankungen bewertet. Mit dem Platelia SARS-CoV-2 Total Ab-
Assay wurde in keiner der getesteten Proben eine Kreuzreaktivität (falsch positive Ergebnisse) festgestellt.
Anzahl der
Analyt getesteten Nicht reaktiv Reaktiv
Proben
anti-229E (alpha coronavirus) 6 6 0
anti-NL63 (alpha coronavirus) 3 3 0
anti-OC43 (beta coronavirus) 13 13 0
anti-HKU1 (beta coronavirus) 71 71 0
Anti-Influenza-Impfstoff 15 15 0
anti-Mycoplasma pneumoniae 4 4 0
anti-VZV 5 5 0
anti-HSV 9 9 0
anti-EBV 4 4 0
Rheumafaktor 5 5 0
Influenza A-Infektion 11 11 0
RSV-Infektion 11 11 0
1
Ein Patient war mit CovHKU1 + INF A koinfiziert und ein Patient war mit CoVHKU1 + RSV koinfiziert
11 [DE]9.1.3 Hook-Effekt
Eine positive Probe mit einem hohen Titer an Anti-Coronavirus-Ab wurde seriell verdünnt und rein getestet
und mit dem Platelia SARS-CoV-2 Total Ab-Assay verdünnt.
An der reinen Probe wurden keine negativen Ergebnisse beobachtet. Eine Abnahme des Signals beim Test
von verdünnten Proben wurde beobachtet.
Beim Platelia SARS-COV-2 Total Ab-Assay mit dem Test einer hochpositiven Probe wird kein Hakeneffekt
beobachtet.
9.2 Klinische Leistungsmerkmale
Die klinischen Leistungen des Platelia SARS-CoV-2 Total Ab Assays wurden im Rahmen einer Multi-
Evaluation an Proben aus einer allgemeinen asymptomatischen Population prä-epidemischer Personen
(Blutspender, hospitalisierte Patienten) und an Patienten mit klinischen Symptomen des Coronavirus COVID-
19, die mit dem RT-PCR-Test positiv getestet wurden, bewertet. Es wurden sowohl prospektive als auch
retrospektive Studien an der asymptomatischen Bevölkerung und an ausgewählten infizierten Patienten
durchgeführt.
9.2.1 Diagnostische Spezifität
Insgesamt wurden 687 Proben (620 von Blutspendern und 67 von asymptomatischen Patienten im
Krankenhaus, die vor Ausbruch der COVID-19-Pandemie entnommen wurden) getestet. Die Spezifität betrug
99,56% (684/687) (95% -Konfidenzintervall von 98,72-99,85%)
9.2.2 Diagnostische Sensitivität
Eine Längsschnittstudie wurde an 51 Patienten (133 Proben) auf der Intensivstation in 3 Krankenhäusern mit
klinischen Symptomen von COVID-19 und einem PCR-positiven Ergebnis durchgeführt.
Zwischen 2 und 5 Proben pro Patient wurden 2 bis 42 Tage nach Auftreten der klinischen Symptome
entnommen. Wenn Proben> 8 Tage nach Auftreten der Symptome entnommen wurden, zeigten 39
Patienten in der Längsschnittstudie ein positives Ergebnis mit dem Platelia SARS-CoV-2-Assay für eine oder
mehrere getestete Proben. Für jeden Patienten, der ein positives Ergebnis hatte, fasst die folgende Tabelle
zusammen, wann das erste positive Ergebnis beobachtet wurde.
Tage zwischen Auftreten Erstes reaktives
Nicht reaktiver
der Symptome und Ergebnis für den Gesamt %
Patient
Probenentnahme Patienten
7 Tagen zunehmen (Zhao et al., 2020)7.
In dieser Studie wurden 39/40 Patienten> 8 und ≤ 42 Tage nach Auftreten der Symptome positiv. Die
Sensitivität für PCR-positive Patienten, die nach> 8 Tagen getestet wurden, beträgt 97,5% (39/40) mit
einem 95% -KI [86,8% -99,9%].
12 [DE]10 LITERATUR
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www.bio-rad.com 2020/05
19 [DE]Sie können auch lesen
